免疫實(shí)驗(yàn)課：實(shí)驗(yàn)一 靜脈采血法

1、實(shí)驗(yàn)一 靜脈采血法目的：掌握靜脈采血的方法和無(wú)菌操作技術(shù)。原理：使用注射器和針或真空采血器刺入淺靜脈，用負(fù)壓吸取所需的血量。器材：1.消毒棉簽。 2.止血帶。 3.針頭及注射器或一次性真空采血 裝置。試劑：碘伏標(biāo)本：靜脈血操作： 1.準(zhǔn)備器具及標(biāo)記試管 2.消毒雙手 采血前，操作人員應(yīng)清潔和消毒雙手。 3.選擇靜脈 常用肘前靜脈。 4.檢查注射器 將針頭和針筒緊密連接，并使針頭斜面對(duì)準(zhǔn)針筒刻度，抽拉針?biāo)z查有無(wú)阻塞和漏氣。最后排盡注射器中的空氣，備用。 5.扎止血帶 在采血部位上端約6cm處扎止血帶。要求患者握緊和放松拳頭幾次，使靜脈隆起。 6.選擇進(jìn)針部位 采用左手食指觸摸進(jìn)針部位的靜脈。

2、7.消毒皮膚 用棉簽蘸取碘伏自所選靜脈穿刺處從內(nèi)向外，順時(shí)針?lè)较蛳酒つw，待碘伏揮發(fā)后，再用75%乙醇棉簽以同樣方式拭去碘劑，待干。 8.穿刺皮膚 左手拇指固定靜脈穿刺部位下端，右手持注射器，食指固定針頭下座。保持針頭斜面和針筒刻度向上，沿靜脈走向使針頭與皮膚呈30角斜行快速刺入皮膚，然后呈5角向前穿破靜脈壁進(jìn)入靜脈腔。確認(rèn)穿刺入靜脈中心位置，并沿靜脈走向?qū)⑨橆^推入10-15mm。 9.抽血 右手固定注射器，左手緩緩向后拉注射器針?biāo)?，?jiàn)少量回血后松開(kāi)止血帶，然后向后拉針?biāo)ǖ竭_(dá)采血量刻度。 10.止血 囑受檢者松拳，用消毒棉簽壓住進(jìn)針部位。迅速拔出針頭。 11.放血 從注射器上取下針頭，將血液沿

3、試管壁緩緩注入到達(dá)標(biāo)記處。含抗凝劑試管需迅速顛倒混勻幾次。注意事項(xiàng)： 1.選擇靜脈 若肥胖患者靜脈暴露不明顯，可以 用消毒后的左手食指在采血部位觸摸，發(fā)現(xiàn)靜脈走向后憑手感試探性穿刺。 2.扎止血帶 止血帶壓迫時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)、綁扎不能過(guò)緊，以免淤血和血液濃縮，最好不要超過(guò)1min。 3.穿刺 不能從靜脈側(cè)面進(jìn)針。針頭進(jìn)入皮膚有一定阻力，靜脈壁阻力小更富彈性。 4.抽血 抽血時(shí)針?biāo)ㄖ荒芟蛲獬椴荒芟騼?nèi)推，以免造成空氣栓塞。 5.止血 不能彎曲手臂，以免形成血腫。 6.放血 血液注入容器時(shí)最好取下針頭后再注入，防止溶血，顛倒混勻幾次，切忌用力振蕩。 實(shí)驗(yàn)二 血細(xì)胞比容的測(cè)定溫氏法目的：掌握血細(xì)胞比容溫氏

4、測(cè)定法的原理及操作。原理：將定量的抗凝血液在一定的速度和時(shí)間離心后，血液中的各種不同成分互相分離，計(jì)算壓實(shí)紅細(xì)胞占全血的比值即為血細(xì)胞比容。器材： 1.溫氏管 2.細(xì)長(zhǎng)毛細(xì)滴管 3.離心機(jī)標(biāo)本：EDTA-K2或肝素抗凝靜脈血操作： 1.加標(biāo)本 用細(xì)長(zhǎng)毛細(xì)滴管吸取混勻的抗凝血插入溫氏管底部，將血液緩慢注入到刻度“10”處，并用小橡皮塞塞緊管口。2.離心 將加好標(biāo)本的溫氏管置于離心機(jī)，以相對(duì)離心力RCF為2664g離心30min，讀取壓實(shí)紅細(xì)胞層柱高的毫米數(shù)，然后再以同樣的速度離心10min，至紅細(xì)胞層高度不再下降為止。3.讀數(shù) 以還原紅細(xì)胞層表面為準(zhǔn)，讀取紅細(xì)胞層柱高的毫米數(shù)，乘以0.01，即為

5、HCT值。4.報(bào)告方式 0. L/L參考值： 1.男 0.380-0.508 2.女 0.335-0.450注意事項(xiàng) 1.采血 同紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，但穿刺應(yīng)稍深，使血液自動(dòng)流出，取第二滴血檢驗(yàn)。靜脈采血時(shí)以空腹采血為好，采血應(yīng)順利。 2.加標(biāo)本 抗凝血加入溫氏管前應(yīng)反復(fù)輕微振蕩，使血紅蛋白與氧充分接觸，注入溫氏管時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。 3.離心 要確保離心條件，以相對(duì)離心力RCF為2664g離心30min。 RCF（g）=1.118有效離心半徑（cm） 轉(zhuǎn)速2（r/min）。本實(shí)驗(yàn)所用離心機(jī)有效離心半徑為10cm。4.讀數(shù) 離心后血液分為5層：自上而下分別為血漿層、血小板層、白細(xì)胞層和有核紅細(xì)胞層、還原紅

6、細(xì)胞層（紫黑紅色）、氧合紅細(xì)胞層（鮮紅色）。讀數(shù)以還原紅細(xì)胞層表面為準(zhǔn)。5.報(bào)告結(jié)果 上層血漿如有黃疸及溶血現(xiàn)象應(yīng)予注明。實(shí)驗(yàn)三 紅細(xì)胞平均值計(jì)算RBCHbHCTMCVMCHMCHC1紅細(xì)胞平均體積（MCV）含義：平均每個(gè)紅細(xì)胞的體積， 以fl為單位。1L=1015fl 計(jì)算：MCV=HCT（LL）/RBC （個(gè)L）1015fl 2. 紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量（MCH）含義：平均每個(gè)紅細(xì)胞所含血紅 蛋白的量，以pg為單位。 1g=1012pg計(jì)算：MCH=Hb（gL）/RBC（個(gè)L ） 1012 pg 3平均RBC血紅蛋白濃度(MCHC)含義：平均每升紅細(xì)胞所含血紅 蛋白的量，以g/L表示 計(jì)算

7、： MCHC=Hb（gL）/HCT（L L ）4參考值、臨床意義：用于貧血的形態(tài)學(xué)分類(lèi)及病因分析MCV：（8292）fl 92：大cell性貧血； 360：高色素性貧血； 92 31 正常正常cell性貧血 正常 正常 正常 單純小cell性貧血 82 27 正常 貧血形態(tài)學(xué)分類(lèi)實(shí)驗(yàn)四 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 【目的】 掌握網(wǎng)織紅細(xì)胞試管法的原理及操作方法。 【原理】 網(wǎng)織紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)殘存少量核蛋白體和核糖核酸(RNA)等嗜堿性物質(zhì)，經(jīng)煌焦油藍(lán)或新亞甲藍(lán)等染液活體染色后呈藍(lán)色網(wǎng)織狀或點(diǎn)粒狀，可與完全成熟的紅細(xì)胞區(qū)別。試管法：器材 1.顯微鏡。 2.香柏油、擦鏡紙、清潔液。 3.試管、試管架。 4.玻片

8、。 試劑 1. 10g/L煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液 2. 新亞甲藍(lán)N溶液標(biāo)本 新鮮全血操作 1.加染液 于試管中加入染液2滴。 2.加血 在加入染液的試管中注入新鮮全血2滴，立即混勻，室溫下放置15-20min。 3.制備涂片 取混勻染色血1滴制成薄涂片，自然干燥。 4.觀察 低倍鏡下觀察紅細(xì)胞的分布和染色情況，并選擇紅細(xì)胞分布均勻、著色好的部位。 5.計(jì)數(shù) 在油鏡下對(duì)所選擇部位計(jì)數(shù)至少1000個(gè)紅細(xì)胞中的網(wǎng)織紅細(xì)胞。 6.計(jì)算 網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)=計(jì)數(shù)的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)/1000 網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值=紅細(xì)胞數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)7.報(bào)告方式 網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：0. 網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值： 109參考值 成人：0

9、.005-0.015；新生兒：0.03-0.06；兒童：0.005-0.015注意事項(xiàng) 1.染液質(zhì)量直接影響網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性?；徒褂退{(lán)染液長(zhǎng)期普遍應(yīng)用，但溶解度低，易形成沉渣吸附于紅細(xì)胞表面；新亞甲藍(lán)對(duì)Ret染色力強(qiáng)且穩(wěn)定，是WHO推薦使用的染液。試劑應(yīng)定期配制，以免變質(zhì)沉淀。瑞氏1染液質(zhì)量直接影響網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性?；徒褂退{(lán)染液長(zhǎng)期普遍應(yīng)用，但溶解度低，易形成沉渣吸附于紅細(xì)胞表面；新亞甲藍(lán)對(duì)Ret染色力強(qiáng)且穩(wěn)定，是WHO推薦使用的染液。試劑應(yīng)定期配制，以免變質(zhì)沉淀。瑞氏染液復(fù)染可使網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)值偏低。 2染色時(shí)間不能過(guò)短，室溫低時(shí)，可放置37 溫箱或適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間。染液與血液的比

10、例以11為宜。 3因網(wǎng)織紅細(xì)胞在體外仍繼續(xù)成熟，其數(shù)量隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)而遞減，所以標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)處理；標(biāo)本染色后也應(yīng)及時(shí)測(cè)定，因染料吸附可人為增高網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值。 4選擇紅細(xì)胞分布均勻、網(wǎng)織紅細(xì)胞著色好的部位計(jì)數(shù)。由于網(wǎng)織紅細(xì)胞體積較大，故應(yīng)兼顧血片邊緣和尾部。實(shí)驗(yàn)五 紅細(xì)胞沉降率測(cè)定魏氏法【目的】掌握魏氏法測(cè)定血沉的方法及操作方法。【原理】 將一定量的枸櫞酸鈉抗凝全血置于特制血沉管中，直立于血沉架上。由于紅細(xì)胞比重大于血漿，在離體抗凝血中能克服血漿阻力而下沉。1h后讀取上層血漿高度的毫米數(shù)值，即為紅細(xì)胞沉降率。 器材1.血沉管長(zhǎng)300mm，內(nèi)徑2.5mm的厚壁玻璃管，自上而下有0mm200mm刻度2.血沉架使血沉管垂直放置，應(yīng)置于穩(wěn)固的工作臺(tái)上，注意防震3.試管、吸耳球、注射器等【標(biāo)本】 新鮮全血【操作】1.靜脈采血 采靜脈血1.6 ml ，加入含枸櫞酸鈉抗凝劑的試管中，混勻。3.吸血 混勻全血吸入血沉管內(nèi)至刻度“0”處，拭去管外殘留余血。4.立血沉管 將血沉管直立于血沉架上。5.讀數(shù) 1h末準(zhǔn)確讀取紅細(xì)胞下沉后暴露出的