肺脾氣虛動物模型造模方法

1、一、肺脾氣虛動物模型的復制方法：模型的建立方法：模型組采用 實用中醫(yī)證侯動物模型學之煙熏法肺氣虛證動物模型復 制法，并復合木瓜蛋白酶霧化吸人法復制SD大鼠肺氣虛證模型。番瀉葉冷服瀉下法復制 脾氣虛證模型。具體方法如下：將以上3組大鼠分別置于特制的lm3煙室中。用刨花、鋸末、煙葉各30-50g， 另加硫磺5-10g，點燃煙熏，每日2次，每次30分鐘，注意適當通風，以防大鼠窒息。造 模期6o天。并于造模開始后第3o、32、34、36天給以上各組大鼠木瓜蛋白酶霧化吸人， 具體方法如下：在大鼠清醒狀態(tài)下，每次將5只大鼠放入一 40X40X40cm的與超聲波霧化 器相連的透明霧化箱中，通過霧化管向箱中噴

2、入用0. 9%Nacl液稀釋為3g的木瓜蛋白酶， 每次霧化量2ml。造模第20天開始，以濃度為lg/ml冰冷的番瀉葉浸液，按lml / 100g體 重的劑量給大鼠灌胃，每日1次，持續(xù)3o天。正常對照組，分室常規(guī)喂養(yǎng)，不做任何處理。 參考文獻：李亞光，曹柏龍，賈東巖.慢性阻塞性肺疾病肺脾氣虛證復合證型動物模型的 研究.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2005年第5期：18-19.二、肺氣虛動物模型的復制方法：造模方法：氣管內(nèi)注入脂多糖(LPS)并煙熏方法復制肺氣腫/COPD肺氣虛證大鼠模型。(此 法最常用)具體方法:于模型復制的第1和14天用10%水合氯醛腹腔麻醉后，行氣管內(nèi)注入LPS200ug / 200ul，

3、慶大霉素局部抗炎，縫合皮膚并消毒。術(shù)后第213、1528天，置于1 mX 1 m X1 m的煙室中，香煙(焦油量為12 mg，煙氣煙堿量為1. 1 mg)煙熏，每日30 min；自由進 食、飲水。對照組：將每只大鼠于第1、14天氣管內(nèi)注入0. 9%氯化鈉注射液200 u1；于 第213、15-28天，置于無煙熏同樣環(huán)境中飼養(yǎng)，余法同模型組。參考文獻：王哲，王春田，任艷玲.肺氣虛模型大鼠血ET、IL 一邛及TNF-a含量的變化.中國老年學雜 志,2008,12 月第 28 卷:2414-2416.劉向國，方志斌，蔡圣榮，肺氣腫肺氣虛證模型大鼠肺組織中基質(zhì)金屬蛋白酶表達的變化.中 國中醫(yī)藥科技,2

4、006,13( 5):289-291.劉茜，劉向國武松.肺氣腫肺氣虛證模型大鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)變化的實驗研究甘肅中 醫(yī)學院學報,2006,23(1):20-22.李澤庚，彭波，杰根.肺氣虛證模型大鼠的建立.北京中醫(yī),2005,24(1):53-55.方法：用煙熏并復合木瓜蛋白酶霧化吸入法復制COPD肺氣虛證大鼠模型。具體方法:動物造模采用實用中醫(yī)證候動物模型學之煙熏法肺氣虛證動物模型復制法， 并復合木瓜蛋白酶霧化吸人法，復制SD大鼠肺氣虛證COPD模型。每5只大鼠置于自制透 明塑料箱中，用刨花、鋸末、煙葉各3050g，另加硫磺510g，點燃煙熏，每日2次，每 次30min，注意適當通風，以防

5、大鼠窒息。并于造模開始后第30、32、34、36天將超聲波 霧化器與透明塑料箱相連，通過霧化管向箱中大鼠噴人濃度為0. 3%的木瓜蛋白酶，每5 只大鼠2mL。造模期60天。正常對照組置于正常無煙環(huán)境中飼養(yǎng)。參考文獻：張葵，劉良麗，歐江琴.COPD肺氣虛證模型大鼠血清TNF-a IL-8的表達和意義，遼寧中醫(yī)藥大學學報.2008,10(6):200-201.造模方法：SO2吸入復制肺氣虛模型。具體方法：取本院動物房健康小白鼠(體重2030 g)為造型對象，實驗期間喂養(yǎng)等同實驗 前，實驗分批進行。每批5只，置于玻璃罩內(nèi)，以1% SO 2吸入30秒/每次.1次/每天， 連續(xù)20天。設(shè)空白對照組.參考

6、文獻：陸和屏，齊幼齡.肺氣虛動物模型的實驗研究.中國病理生理雜 志,1996,12,(6):622-622.造模方法：采用風寒和二氧化硫吸入綜合刺激復制大鼠肺氣虛證模型。具體方法：采用風寒和二氧化硫(SO2)綜合刺激。SO2刺激量為200-250ppm，每日刺激1小 時，持續(xù)13天。風寒刺激用低于太鼠生活環(huán)境溫度5C的冷風，每日刺激15分鐘，持續(xù)13 天，每次在SO2刺激結(jié)束后即進行風寒刺激。肺氣虛組和喂藥組大鼠進行刺激，其余組大鼠不進行。刺激在動物實驗室進 行，動物實驗室溫度為19-21C，相對濕度為70-76%。參考文獻：徐錫鴻，孔繁智.大鼠肺氣虛證模型的建立.中醫(yī)雜志,1994, 35(

7、4):230-232.單純煙熏方法復制肺氣虛大鼠模型。具體方法：將實驗小鼠隨機分為造型組和對照組造型組小鼠每日上午置于靜式染毒柜內(nèi)，用 香煙煙熏，連續(xù)2支，每支香煙約燃煙10分鐘，兩支香煙之間間隔5分鐘，每周連續(xù)6天。 對照組動物除不用香煙煙薰，其他條件與造型組相同，實驗在室溫16C22C)中進行。參考文獻：彭國瑞，許志奇，曾詳國.肺氣虛型慢性支氣管炎動物模型的實驗研究.北京實 驗動物科學與管理,1994, 11( 3: 31-33.三、脾氣虛大鼠模型的復制：方法：以大黃法、游泳力竭法、饑餓法三因素復合的方法復制脾氣虛證大鼠模型。(此法 最常用)具體方法：每日上午以3ml/只灌服大黃制液，1次

8、/d ；每日下午將動物負重，于大鼠尾根部 纏繞重量為大鼠體重10%的保險絲，放入水深50cm、水溫20C的水槽中游泳，以力竭為度， 即大鼠鼻尖沒入水面10秒，1次/d；控制飲食，每日上午8:00給食，下午8:00撤食。正常 組每天上午以3ml/只灌服生理鹽水，1次/d，自由飲食，共21d。參考文獻：胡久略，賀又舜.參苓白術(shù)散對脾氣虛證大鼠血清胃泌素影響的實驗研究.時珍國醫(yī)國藥,2010,21(12):3346-3347.宋紅,鄭小偉,王穎.多因素復合建立脾氣虛證大鼠模型及以方測證研究.浙江中醫(yī)雜志,2008,43(3):136-138.鄭小偉，王穎，宋紅.三種脾氣虛證模型大鼠血清胃泌素及胃竇G

9、細胞的比較研究.中華中醫(yī) 藥雜志,2OO6,21(6):338-340.運用小承氣湯加饑飽失常法復制脾氣虛證的動物模型具體方法：脾氣虛模型的建立與分組SD大鼠9O只，隨機分為15組，每組6只?？瞻捉M： 生理鹽水4 ml灌服，隔日1次，連續(xù)42 d；脾氣虛證模型組：小承氣湯煎液4 ml(1 ml藥液 含原生藥0. 25 g)隔日灌胃1次，喂藥當日禁食，飲水不限，次日喂飼不限，連續(xù)42天， 復制脾氣虛模型；余為白術(shù)茯苓湯組；總多糖高、中、低劑量組；總絡(luò)合物高、中、低劑 量組；白術(shù)內(nèi)酯III高、中、低劑量組，上述3組分配伍之高、中、低劑量組，均于第43天 分別給予相應(yīng)濃度藥液4 ml, 1次d/,連

10、續(xù)7 do參考文獻：羅云波，賈波，祝捷.白術(shù)茯苓湯及水煎液提取分離組分對脾氣虛大鼠VIP受 體的影響.時珍國醫(yī)國藥,2010,21（5）:1045-1046.方法：體質(zhì)篩選、苦寒瀉下加耗氣破氣降氣法。造模方藥制作：方1：生大黃：厚樸：枳實=2： 1： 1，大黃后下，常規(guī)制成200%煎劑。方2：廣豆根：旋復花：檳榔=3： 1： 1，常規(guī)制成250%濃度煎劑。藥化飼料：用方1，常規(guī)制成濃度750g/600mL煎液。每600mL藥液加入6000g原飼料粉 中，按SPF飼料規(guī)范制成藥化飼料。藥化飲水：旋復花：檳榔=1： 1。常規(guī)制成l6. 7%（50g / 300mL）煎液。造模方法：先采用游泳時間法

11、測定體質(zhì)，體質(zhì)弱者用于造模（詳后）。方1和方2分別于4C 交替灌喂，4mid只，次，方1和方2灌喂次數(shù)按3/2比例，造模前18d 3次，d，后12d 4次，d。每兩次灌喂間隔N3. 5h。同時以藥化飼料自由喂飼，藥化飲水自由飲用。造模30do 參考文獻：周永生，樊雅莉，陳小野.脾氣虛證動物模型規(guī)范化的初步研究-分免疫功能方面.實驗動物科學與管理,2003,20:1-5.其他方法：5種方法均造模12do大黃模型：生大黃，后下，常規(guī)制成200%煎劑。室溫下灌喂，每天6ml/只，d （1次）。耗氣破氣模型：厚樸：枳實：生大黃=3： 3： 2,常規(guī)制成200%煎劑。室溫下灌喂，6ml/只，d（1次）。限量營養(yǎng)模型：按對照組食量的半量（9g