肺脾氣虛動物模型造模方法

1、一、肺脾氣虛動物模型的復(fù)制方法：模型的建立方法：模型組采用 實用中醫(yī)證侯動物模型學(xué)之煙熏法肺氣虛證動物模型復(fù) 制法，并復(fù)合木瓜蛋白酶霧化吸人法復(fù)制SD大鼠肺氣虛證模型。番瀉葉冷服瀉下法復(fù)制 脾氣虛證模型。具體方法如下：將以上3組大鼠分別置于特制的lm3煙室中。用刨花、鋸末、煙葉各30-50g， 另加硫磺5-10g，點燃煙熏，每日2次，每次30分鐘，注意適當(dāng)通風(fēng)，以防大鼠窒息。造 模期6o天。并于造模開始后第3o、32、34、36天給以上各組大鼠木瓜蛋白酶霧化吸人， 具體方法如下：在大鼠清醒狀態(tài)下，每次將5只大鼠放入一 40X40X40cm的與超聲波霧化 器相連的透明霧化箱中，通過霧化管向箱中噴

2、入用0. 9%Nacl液稀釋為3g的木瓜蛋白酶， 每次霧化量2ml。造模第20天開始，以濃度為lg/ml冰冷的番瀉葉浸液，按lml / 100g體 重的劑量給大鼠灌胃，每日1次，持續(xù)3o天。正常對照組，分室常規(guī)喂養(yǎng)，不做任何處理。 參考文獻(xiàn)：李亞光，曹柏龍，賈東巖.慢性阻塞性肺疾病肺脾氣虛證復(fù)合證型動物模型的 研究.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2005年第5期：18-19.二、肺氣虛動物模型的復(fù)制方法：造模方法：氣管內(nèi)注入脂多糖(LPS)并煙熏方法復(fù)制肺氣腫/COPD肺氣虛證大鼠模型。(此 法最常用)具體方法:于模型復(fù)制的第1和14天用10%水合氯醛腹腔麻醉后，行氣管內(nèi)注入LPS200ug / 200ul，

3、慶大霉素局部抗炎，縫合皮膚并消毒。術(shù)后第213、1528天，置于1 mX 1 m X1 m的煙室中，香煙(焦油量為12 mg，煙氣煙堿量為1. 1 mg)煙熏，每日30 min；自由進(jìn) 食、飲水。對照組：將每只大鼠于第1、14天氣管內(nèi)注入0. 9%氯化鈉注射液200 u1；于 第213、15-28天，置于無煙熏同樣環(huán)境中飼養(yǎng)，余法同模型組。參考文獻(xiàn)：王哲，王春田，任艷玲.肺氣虛模型大鼠血ET、IL 一邛及TNF-a含量的變化.中國老年學(xué)雜 志,2008,12 月第 28 卷:2414-2416.劉向國，方志斌，蔡圣榮，肺氣腫肺氣虛證模型大鼠肺組織中基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的變化.中 國中醫(yī)藥科技,2

4、006,13( 5):289-291.劉茜，劉向國武松.肺氣腫肺氣虛證模型大鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)變化的實驗研究甘肅中 醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2006,23(1):20-22.李澤庚，彭波，杰根.肺氣虛證模型大鼠的建立.北京中醫(yī),2005,24(1):53-55.方法：用煙熏并復(fù)合木瓜蛋白酶霧化吸入法復(fù)制COPD肺氣虛證大鼠模型。具體方法:動物造模采用實用中醫(yī)證候動物模型學(xué)之煙熏法肺氣虛證動物模型復(fù)制法， 并復(fù)合木瓜蛋白酶霧化吸人法，復(fù)制SD大鼠肺氣虛證COPD模型。每5只大鼠置于自制透 明塑料箱中，用刨花、鋸末、煙葉各3050g，另加硫磺510g，點燃煙熏，每日2次，每 次30min，注意適當(dāng)通風(fēng)，以防

5、大鼠窒息。并于造模開始后第30、32、34、36天將超聲波 霧化器與透明塑料箱相連，通過霧化管向箱中大鼠噴人濃度為0. 3%的木瓜蛋白酶，每5 只大鼠2mL。造模期60天。正常對照組置于正常無煙環(huán)境中飼養(yǎng)。參考文獻(xiàn)：張葵，劉良麗，歐江琴.COPD肺氣虛證模型大鼠血清TNF-a IL-8的表達(dá)和意義，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報.2008,10(6):200-201.造模方法：SO2吸入復(fù)制肺氣虛模型。具體方法：取本院動物房健康小白鼠(體重2030 g)為造型對象，實驗期間喂養(yǎng)等同實驗 前，實驗分批進(jìn)行。每批5只，置于玻璃罩內(nèi)，以1% SO 2吸入30秒/每次.1次/每天， 連續(xù)20天。設(shè)空白對照組.參考

6、文獻(xiàn)：陸和屏，齊幼齡.肺氣虛動物模型的實驗研究.中國病理生理雜 志,1996,12,(6):622-622.造模方法：采用風(fēng)寒和二氧化硫吸入綜合刺激復(fù)制大鼠肺氣虛證模型。具體方法：采用風(fēng)寒和二氧化硫(SO2)綜合刺激。SO2刺激量為200-250ppm，每日刺激1小 時，持續(xù)13天。風(fēng)寒刺激用低于太鼠生活環(huán)境溫度5C的冷風(fēng)，每日刺激15分鐘，持續(xù)13 天，每次在SO2刺激結(jié)束后即進(jìn)行風(fēng)寒刺激。肺氣虛組和喂藥組大鼠進(jìn)行刺激，其余組大鼠不進(jìn)行。刺激在動物實驗室進(jìn) 行，動物實驗室溫度為19-21C，相對濕度為70-76%。參考文獻(xiàn)：徐錫鴻，孔繁智.大鼠肺氣虛證模型的建立.中醫(yī)雜志,1994, 35(

7、4):230-232.單純煙熏方法復(fù)制肺氣虛大鼠模型。具體方法：將實驗小鼠隨機(jī)分為造型組和對照組造型組小鼠每日上午置于靜式染毒柜內(nèi)，用 香煙煙熏，連續(xù)2支，每支香煙約燃煙10分鐘，兩支香煙之間間隔5分鐘，每周連續(xù)6天。 對照組動物除不用香煙煙薰，其他條件與造型組相同，實驗在室溫16C22C)中進(jìn)行。參考文獻(xiàn)：彭國瑞，許志奇，曾詳國.肺氣虛型慢性支氣管炎動物模型的實驗研究.北京實 驗動物科學(xué)與管理,1994, 11( 3: 31-33.三、脾氣虛大鼠模型的復(fù)制：方法：以大黃法、游泳力竭法、饑餓法三因素復(fù)合的方法復(fù)制脾氣虛證大鼠模型。(此法 最常用)具體方法：每日上午以3ml/只灌服大黃制液，1次

8、/d ；每日下午將動物負(fù)重，于大鼠尾根部 纏繞重量為大鼠體重10%的保險絲，放入水深50cm、水溫20C的水槽中游泳，以力竭為度， 即大鼠鼻尖沒入水面10秒，1次/d；控制飲食，每日上午8:00給食，下午8:00撤食。正常 組每天上午以3ml/只灌服生理鹽水，1次/d，自由飲食，共21d。參考文獻(xiàn)：胡久略，賀又舜.參苓白術(shù)散對脾氣虛證大鼠血清胃泌素影響的實驗研究.時珍國醫(yī)國藥,2010,21(12):3346-3347.宋紅,鄭小偉,王穎.多因素復(fù)合建立脾氣虛證大鼠模型及以方測證研究.浙江中醫(yī)雜志,2008,43(3):136-138.鄭小偉，王穎，宋紅.三種脾氣虛證模型大鼠血清胃泌素及胃竇G

9、細(xì)胞的比較研究.中華中醫(yī) 藥雜志,2OO6,21(6):338-340.運用小承氣湯加饑飽失常法復(fù)制脾氣虛證的動物模型具體方法：脾氣虛模型的建立與分組SD大鼠9O只，隨機(jī)分為15組，每組6只?？瞻捉M： 生理鹽水4 ml灌服，隔日1次，連續(xù)42 d；脾氣虛證模型組：小承氣湯煎液4 ml(1 ml藥液 含原生藥0. 25 g)隔日灌胃1次，喂藥當(dāng)日禁食，飲水不限，次日喂飼不限，連續(xù)42天， 復(fù)制脾氣虛模型；余為白術(shù)茯苓湯組；總多糖高、中、低劑量組；總絡(luò)合物高、中、低劑 量組；白術(shù)內(nèi)酯III高、中、低劑量組，上述3組分配伍之高、中、低劑量組，均于第43天 分別給予相應(yīng)濃度藥液4 ml, 1次d/,連

10、續(xù)7 do參考文獻(xiàn)：羅云波，賈波，祝捷.白術(shù)茯苓湯及水煎液提取分離組分對脾氣虛大鼠VIP受 體的影響.時珍國醫(yī)國藥,2010,21（5）:1045-1046.方法：體質(zhì)篩選、苦寒瀉下加耗氣破氣降氣法。造模方藥制作：方1：生大黃：厚樸：枳實=2： 1： 1，大黃后下，常規(guī)制成200%煎劑。方2：廣豆根：旋復(fù)花：檳榔=3： 1： 1，常規(guī)制成250%濃度煎劑。藥化飼料：用方1，常規(guī)制成濃度750g/600mL煎液。每600mL藥液加入6000g原飼料粉 中，按SPF飼料規(guī)范制成藥化飼料。藥化飲水：旋復(fù)花：檳榔=1： 1。常規(guī)制成l6. 7%（50g / 300mL）煎液。造模方法：先采用游泳時間法

11、測定體質(zhì)，體質(zhì)弱者用于造模（詳后）。方1和方2分別于4C 交替灌喂，4mid只，次，方1和方2灌喂次數(shù)按3/2比例，造模前18d 3次，d，后12d 4次，d。每兩次灌喂間隔N3. 5h。同時以藥化飼料自由喂飼，藥化飲水自由飲用。造模30do 參考文獻(xiàn)：周永生，樊雅莉，陳小野.脾氣虛證動物模型規(guī)范化的初步研究-分免疫功能方面.實驗動物科學(xué)與管理,2003,20:1-5.其他方法：5種方法均造模12do大黃模型：生大黃，后下，常規(guī)制成200%煎劑。室溫下灌喂，每天6ml/只，d （1次）。耗氣破氣模型：厚樸：枳實：生大黃=3： 3： 2,常規(guī)制成200%煎劑。室溫下灌喂，6ml/只，d（1次）。限量營養(yǎng)模型：按對照組食量的半量（9g