花粉管生長觀察及核型分析

1、開放性試驗Giemsa染液：Giemsa粉0.5g，加廿油33ml，充分研磨1h, 56度保溫2h,加甲醇33ml，混勻；使用前1： 20稀釋苯胺藍染液配方:水溶性苯胺藍0.1g，溶于磷酸鉀溶液(1/30 mol/L)100mL,避 光冷藏至近無色.FAA配方:福爾馬林(38%甲醛)5 ml:冰醋酸5ml:70%酒精90 ml幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收縮;還可加入5 ml甘油(丙三 醇)以防蒸發(fā)和材料變硬.參考資料： HYPERLINK /view/736903.html?tp=7_01 /view/736903.html?tp=7 01苯胺藍-藏紅O染液:水溶性苯胺藍0

2、.75g,K& O 0.25g,溶于加熱的的45%醋酸，過濾?；ǚ酃苌L途徑的顯微觀察實驗材料1：授粉后的雌蕊,FAA固定液 ,5%的KOH(NaOH)溶液 mL ,蒸餾水，載玻片苯胺藍染液，50%的甘油，蓋玻片，實驗步驟1,將授粉后的雌蕊用FAA固定液固定()小時將固定好的雌蕊用5%的NaOH溶液離析透明,大致 (1h,)(75min)(90min),視情況而定,總之要離析至透明用蒸餾水漂洗3次4取適量材料于載玻片上加上12滴苯胺藍染液染色大約1h,再加 上50%的甘油1滴,5蓋上蓋玻片之后（必要時可輕壓）,至于熒光顯微鏡下觀察實驗材料2 :授粉后的雌蕊，酒精-三氯甲烷-醋酸（3 ： 4 ：

3、 1）溶 液，70%酒精，50%酒精，30%酒精，蒸餾水，苯胺藍藏紅O染 液，45%醋酸溶液，乳酸酚實驗步驟將授粉后的雌蕊在酒精-三氯甲烷-醋酸（3： 4： 1）溶液 中固定30min.在70%酒精,50%酒精，30%酒精，蒸餾水依次浸泡2min后取出，用苯胺藍-藏紅O染液染色（）min,取出4將材料置于45%醋酸溶液中透明約1h5,取出材料，用乳酸酚裝片,置于顯微鏡下觀察（視野中淺紫色 的為花柱組織，深藍色的為花粉管）.植物的核型分析（去壁低滲法）實驗材料:分生組織的根尖莖尖，蒸餾水,，根尖和花粉母細 胞，卡諾固定液，秋水仙堿（001%-02%），對二氯 苯飽和溶液，8-羥基喹啉（0.002

4、-0.004mol/L）,70%酒精，纖維素酶-果膠酶混合液，雙蒸水，無水酒精- 冰醋酸(3： 1),無水酒精，Giemsa染液實驗步驟:1預處理;有以下幾種方法(1 )用低濃度的秋水仙素溶液(0. 01 %0. 2 %)對材料進行預處理特點：秋水仙素有很強的毒性，如果秋水仙素用量過大或處理時間過長，會引起染色體收縮過度或產生多倍體，但用 秋水仙素進行預處理效果較好。(2 )用飽和的對二氯苯水溶液對材料進行預處理特點：對二氯苯也有毒性,其效果和秋水仙素相似，但價格較為便宜。(3 )用低濃度的8-羥基喹啉溶液(0.02-0.04mol/L)對材料 進行預處理。特點；適合處理具有較大染色體的植物。

5、經過該溶液處理后,染色體的縊痕區(qū)比較清晰。(物理方法即低溫處理因時間較長建議與化學方法混合使用)。通常用卡諾液I (無水酒精：冰醋酸=3 : 1)對材料固定24h左右。3，將材料浸泡在蒸餾水中做前低滲處理30min,4, 一 一轉入纖維素-果膠酶混合酶溶液中，25度下酶解2-4小 時。5，吸取酶液，以雙蒸水漂洗3次，在雙蒸水中25度下停留30min作為后低滲處理6，將材料固定于無水酒精-冰醋酸(3:1)中并使分生組 織細胞分散制成細胞懸浮液；7，取此細胞懸浮液滴在無水酒精浸泡的遇冷的載玻片上， 讓細胞迅速分散，酒精燈上迅速過火使材料干燥。8，Giemsa染液染色，自來水沖洗載玻片，自然干燥。即可鏡檢拍照。數(shù)據處理：選擇中期著絲點清晰的染色體照片配對，測量 每條染色體的長臂，短臂根據臂比確定每條染色體類型