多糖藥物檢測(cè)方法規(guī)范

1、關(guān)于多糖藥物檢測(cè)方法規(guī)范第一張，PPT共十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、硫酸軟骨素的含量測(cè)定酸性粘多糖，維持組織和免疫機(jī)能（1）長(zhǎng)期應(yīng)用于防治冠心病、心絞痛、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化、心肌缺血等疾病，無明顯的毒副作用。在動(dòng)脈和靜脈壁上沉積的脂肪等脂質(zhì)可以被有效地去除或減少，能顯著降低血漿膽固醇。（2） 用于治療神經(jīng)痛、神經(jīng)性偏頭痛、關(guān)節(jié)痛等。 （3）預(yù)防和治療鏈霉素引起的聽覺障礙，效果顯著。 （4）應(yīng)用于化妝品以及外傷傷口的愈合劑等。（5）鯊魚軟骨中的軟骨素有抗腫瘤的作用。（ 6）硫酸軟骨素還用于滴眼劑。第二張，PPT共十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月家畜、鯊魚類動(dòng)物是主要的軟骨來源。但家畜的軟骨產(chǎn)量很低

2、， 鯊魚多是靠天然捕獲。因此, 需要進(jìn)一步尋求其它易得而又穩(wěn)定的軟骨來源,。鱘魚的軟骨含量相當(dāng)高, 而且鱘魚養(yǎng)殖技術(shù)已成熟。以匙吻鱘的軟骨為原料, 用稀堿- 酶相結(jié)合的方法提取硫酸軟骨素匙吻鱘軟骨80 恒溫蒸煮6 h洗凈冷凍80 烘干粉碎料液比16， 3 %堿提取，提取溫度40 濾液胰蛋白酶酶降解（用量1 0001.5，酶解溫度45 ）氯仿萃取棄氯仿層95 %乙醇沉淀（沉淀時(shí)的pH7.0 ）過濾 60 干燥成品硫酸軟骨素提取率為36.52 %、純度為97 %、蛋白質(zhì)含量為0.075 %、水分為10.52 %。第三張，PPT共十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月檢測(cè)方法（1）比色法適量樣品用6M HCL

3、 酸水解2小時(shí)，中和 與乙酰丙酮反應(yīng)25分鐘，生成色原物質(zhì)，冷卻，然后再與無醛乙醇60反應(yīng)1小時(shí)，525nm 處測(cè)定吸光度,鹽酸氨基葡萄糖做對(duì)照(2)紫外法 樣品與硫酸95共熱水解1小時(shí),288nm 處測(cè)吸光值。 需做標(biāo)準(zhǔn)曲線第四張，PPT共十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（3）毛細(xì)細(xì)管電泳測(cè)定硫酸軟骨素毛細(xì)管電泳條件：毛細(xì)管內(nèi)徑50m ；有效長(zhǎng)度50cm 緩沖鹽：50m M磷酸二氫鉀溶液，pH=3.5 進(jìn)樣量：5sec, 0.5 毫升 分離電壓：28kV樣品處理：稱取各種待測(cè)樣品約1.0g，用10mL乙腈分散，定容至100mL。氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線（5.070mg/mL-0.507mg/mL）：y

4、=8338.7x+1607.7， R2=0.9999硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)曲線（4.731 mg/mL-0.473mg/mL）：y=344781x+58652， R2=0.9958第五張，PPT共十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月香菇多糖的測(cè)定 香菇多糖是主鏈?zhǔn)牵?3）糖苷鏈連接的葡聚糖。 用這種多糖以2mg/kg劑量腹腔注射已移植腫瘤的大鼠連續(xù)5天，結(jié)果表明它對(duì)肉瘤的抑制率達(dá)83%，而相同劑量的經(jīng)切支水解后得到的較小分子香菇多糖對(duì)肉瘤的抑制量更高，達(dá)97%以上。 第六張，PPT共十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月機(jī)理：有人合成了含有同位素的香菇多糖，并在移植了腫瘤的小鼠身上做示蹤試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)它不具備直接殺傷腫

5、瘤細(xì)胞的能力。隨后的大量試驗(yàn)表明它是作為調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)的T細(xì)胞促進(jìn)劑，通過刺激抗體的產(chǎn)生提高機(jī)體的免疫能力，從而達(dá)到抵抗腫瘤的作用。香菇多糖注射液(治慢性肝炎及腫瘤治療的輔助藥); 香菇多糖的測(cè)定多糖水解成單糖進(jìn)行測(cè)定（滴定法）含量=樣品水解后單糖總含量- 未水解樣品中單糖的含量第七張，PPT共十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月香菇多糖的提取方法1.預(yù)處理：取干香菇，搗碎。2.提取：將搗碎的干香菇，在攪拌的條件下加67倍量水混勻，加熱至90，攪拌保溫60 min。 降溫至40時(shí)轉(zhuǎn)移到40水浴保溫，p H64，攪拌反應(yīng)60 min，然后迅速升溫到90-100，滅活1min降溫后紗布過濾，收集濾液。3

6、.濃縮：將以上濾液濃縮至l/5體積。4.沉淀：將濃縮液加1倍量乙醇，然后靜置過夜。過濾得沉淀物，濾液再加3倍量乙醇，得沉淀物。第八張，PPT共十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月5.二次沉淀：將沉淀物置于搪瓷缸中，加約70倍量的水，攪拌均勻，在猛烈攪拌下，滴加0.2mol/L氫氧化十六烷基三甲基胺水溶液，逐步調(diào)PH至12.8時(shí)產(chǎn)生大量沉淀，離心，沉淀用乙醇洗滌，收集沉淀。6.除蛋白：沉淀用氯仿、正丁醇洗滌去蛋白，水層加3倍量乙醇沉淀，收集沉淀。7.洗滌：沉淀依次用甲醇、乙醚洗滌，收集沉淀。8.干燥：將沉淀置真空干燥器干燥，即為香菇多糖。第九張，PPT共十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月靈孢多糖 靈芝，又稱萬

7、年蕈、靈芝草，為靈芝屬真菌, 有著悠久的藥用歷史。目前，有關(guān)靈芝活性元素的研究主要集在：靈芝多糖類、靈芝三萜類等成分上。 靈芝多糖可抑制腫瘤細(xì)胞的無限、快速分裂能力，還具有提高機(jī)體免疫力，提高機(jī)體耐缺氧能力，降血糖降血脂作用。靈芝多糖產(chǎn)品：靈芝多糖片、靈芝復(fù)方糖漿等(主要用于腫瘤輔助治療，慢性氣管炎、高血壓、神經(jīng)衰弱、糖尿病、高血脂等);第十張，PPT共十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月檢測(cè)方法(1)對(duì)照品溶液的制備 取葡萄糖，加水制成1.0mg/ml的溶液。(2)供試品溶液的制備 取本品3.0ml，加水定容至200ml。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1.0ml，2.0ml，4.0ml，6

8、.0ml，和8.0ml，加水定容至100ml。各精密量取1.0ml，分別置具塞試管中，置冰浴中，分別加入蒽酮試劑5.0ml，搖勻，各試管加完后浸入沸水浴中，加熱1min后，加塞。自水浴重新沸騰起，開始計(jì)時(shí)，10min后取出，用自來水冷卻，室溫放置10min，立即在620nm分別測(cè)定吸光度，以測(cè)得的吸光度對(duì)相應(yīng)的濃度計(jì)算回歸方程，相關(guān)系數(shù)不得低于0.99。(4)含量測(cè)定（含多糖以葡萄糖計(jì)） 精密量取供試品1.0ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下自“分別置具試管中”起，依法同步操作，測(cè)定吸光度，由回歸方程計(jì)算多糖含量。第十一張，PPT共十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月肝素的檢測(cè)1.結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 肝素分子是有六糖或

9、八糖重復(fù)單位組成的線形分子，含2-硫酸艾杜糖醛酸6-硫酸-N-硫酸氨基葡萄糖及葡萄糖醛酸等殘基。由不同鏈長(zhǎng)的許多組分組成。 肝素的N-硫酸基對(duì)酸水解敏感，與氧化劑反應(yīng)，能被降解成酸性產(chǎn)物。肝素呈弱酸性，某聚陰離子與各種陽(yáng)離子反應(yīng)生成鹽，與堿性染料反應(yīng)，對(duì)染料的光吸收有影響。第十二張，PPT共十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2.效價(jià)的測(cè)定（1）天青A法 含氨基堿性染料（天青A、甲苯胺藍(lán)、天青）有一定最大吸收，結(jié)合了肝素后，則最大吸收向短波移動(dòng)。使用天青A比色測(cè)定肝素效價(jià)。 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密量取肝素標(biāo)準(zhǔn)液（1.2U/ml）1ml 2ml 3ml 4ml 5ml 各以蒸餾水補(bǔ)足到5ml，在各加巴以妥緩沖液（PH=6.8）1ml及0.1%西黃耆膠溶液1ml，0.018%天青A溶液1ml，搖勻后，于505nm處測(cè)吸光度。以效價(jià)單位為