2022年體外診斷試劑生產及質量控制技術指導原則-生物芯片類試劑生產

1、體外診斷試劑生產及質量掌握技術指導原就 生物芯片類試劑生產及質量掌握技術指導原就（報批稿）本指導原就所定義的生物芯片診斷試劑是指將多個生物探針（包括DNA片段,寡核苷酸、抗原、抗體,組織,細胞等）按預先設計的排列方式固定在特制的基質（包括玻璃 片,尼龍膜,硝酸纖維素膜等）上,用特定的方法提取生物靶分子并進行標記,然后與固 定在基質上的生物探針特異性的結合,再用相應的檢測設備（如激光掃描儀、CCD 檢測儀 等）和分析方法（包括軟件）進行檢測、記錄、分析,實現(xiàn)對生物靶分子的定性或定量檢測的試劑；依據(jù)芯片制作的主要原料和方法,生物芯片可分為核酸芯片、蛋白芯片、細胞芯片、組 織芯片等；本指導原就是針對

2、核酸和蛋白為檢測靶分子生物芯片的生產及質量掌握技術指 導原就,其它類型靶分子檢測的芯片診斷試劑可參考本指導原就；國家食品藥品監(jiān)督治理部門將依據(jù)科學技術發(fā)展的需要,適時組織修訂；一、基本原就（一）試劑研制、生產用各種原料、輔料等應制定相應的質量標準,并符合有關法規(guī)的要求；（二）試劑生產企業(yè)應具備相應的專業(yè)技術人員、儀器設備以及相宜的生產環(huán)境,獲得醫(yī)療器械生產許可證；同時,應依據(jù)體外診斷試劑生產實施細就（試行）的要求 建立相應的質量治理體系,形成文件和記錄,加以實施并保持有效運行；仍應通過體外 診 斷 試 劑 生 產 企 業(yè) 質 量 管 理 體 系 考 核 評 定 標 準 （ 試 行 ） 的 考

3、核 ；（三）生物芯片類試劑在研制時,應當依據(jù)科學、規(guī)范的原就組織研發(fā),各反應條件的選擇和確定應符合基本的科學原理；（四）試劑研制、生產過程中所用的物料及工藝,應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜；（五）生產和質量掌握的總體目標：保證試劑使用安全、質量穩(wěn)固、工藝可控、檢測有效二、原材料質量控；制（一）核酸檢測芯片核酸芯片檢測時,從生物樣本中提取的核酸可用熒光標記、金標記和酶標記；檢測方法 包括光譜學方法和化學顯色；下面為熒光標記芯片技術指導原就,采納金標記和酶聯(lián)顯色等 的 生 物 芯 片 診 斷 試 劑 可 參 照 核 酸 芯 片 和 蛋 白 芯 片 相 關 部 分 ；1、主要生物原料核酸檢測芯

4、片的主要生物原料包括模板DNA 、dNTPs、引物、探針、標記物等；主要生物原料如為企業(yè)自己生產,其工藝必需相對穩(wěn)固,企業(yè)應依據(jù)工藝要求對這類生物原料進 行質量檢驗,以保證其達到規(guī)定的質量標準；如購買,其供應商要求相對固定,不能隨便 變更供應商,同時,供應商應供應相應的質量保證證明和相應的質檢報告,達到生產規(guī)定 的質量標準；假如主要原料（包括工藝）或其供應商有變更,應依據(jù)國家相關法規(guī)的要求進重組行變更申請；（1）模板DNA DNA ：經測序驗證,關鍵堿基或序列沒有錯誤；1TE 溶解,濃度為100ng/ l以上 , -20 保 存 ； 作 為 陽 性 參 考 品 時 , 其 稀 釋 度 由 企

5、業(yè) 根 據(jù) 產 品 標 準 確 定 ；1 / 6 （2）dNTPs（dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP）HPLC 純 , PCR 級 , 無 DNase 、 RNase 污 染 , -20 以 下 保 存 ；（3）引 物生產中的引物原材料為凍干粉,PAGE 純或 HPLC 純；用標準 DNA 模板擴增,電泳檢測,譜帶單一,大小正確,與對比引物比較,產物量一樣；符合視為合格引物,-20以下保 存；（4）探 針（用 于 陣 列 制 備）重組 DNA, 凍干粉（或 1TE 溶解液）：至少滿意一個批次的用量,酶切鑒定分析圖譜；PCR 產物,凍干粉（或 1TE 溶解液）：至少滿意一個批次的

6、用量,PCR 電泳鑒定圖譜；合成寡核苷酸：PAGE 純或 HPLC 純,至少滿意一個批次的用量,供應當產品的 PAGE電 泳 分 析 圖 譜 或 HPLC 分 析 圖 譜；探 針 序 列 的 正 確 性 ： 應 用 克 隆 鑒 定 的 標 準 DNA 雜 交 鑒 定 或 測 序 鑒 定 ；純度和濃度檢測：采納電泳方法,電泳圖譜沒有雜帶,目的條帶的強度與已知濃度的標準 DNA 條帶進行參比運算其強度；純度較高的DNA ,可用紫外分光光度計進行定量；檢驗合格后入庫5,避光、-20標以下保存；（）記物含 有 激 發(fā) 光 波 長 和 發(fā) 射 光 波 長 介 于280.680nm 的 所 有 熒 光 分

7、 子 , HPLC 純 ；（6）Taq DNA 聚 合 酶SDS檢測,純度95%,具有 DNA 聚合酶活性,無核酸內切酶活性；具熱穩(wěn)固性 , 94 保 溫 1 小 時 后 仍 保 持 50 活 性 ； 產 品 -20 保 存 ；（7）尿 嘧 啶 糖 基 化 酶（UNG）具尿嘧啶糖基化酶活性,無核酸外切酶及核酸內切酶活性；1U UNG 37處理 3 分鐘后 , 103 拷 貝 以 下 含 U 模 板 被 降 解 后 不 能 產 生 擴 增 產 物 ； 產 品 -20 保 存 ；（8）RT 酶具 有 逆 轉 錄 活 性,無 核 酸 內 切 酶 活 性,-20保 存；（9）RT-PCR 酶具逆轉錄酶

8、活性和 DNA 聚合酶活性,無核酸內切酶活性,具熱穩(wěn)固性,94 1 小時后仍 保 持 50% 活 性；產 品-20保 存；（10）緩 沖 液各 類 酶 制 品 所 需 的 反 應 緩 沖 液 由 廠 家 隨 酶 制 品 提 供 , -20 保 存 ；2、主要生物輔料主要生物輔料包括酶類（蛋白酶、核酸酶等）、核酸提取試劑、魚精DNA 、封閉用蛋白、雜交液等,企業(yè)應建立相應的質量標準；主要生物輔料如為企業(yè)自己生產（配制）,其工藝必需相對穩(wěn)固,并依據(jù)工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗,以保證其達到規(guī)定的質量標準；如購買,其供應商要求相對固定,不能隨便變更供應商,同時,供應商應提供 相 應 的 質 量

9、 保 證 證 明 和 相 應 的 質 檢 報 告 , 達 到 生 產 規(guī) 定 的 質 量 標 準 ；3、主要化學殘原輔料化學原材料的質量標準參照中國生物制品主要原輔材料質控標準（2022 年版）分析純級別進行檢驗；主要的檢測指標包括：溶液外觀、一般鹽類檢測、溶液pH 值、溶解情況、干燥失重、熾灼渣等；主要化學原材料的供應商要求相對固定,不得隨便發(fā)生變更；化學原材料在購入時,原材料的生產商必需供應當批次化學原材料的質量保證材料和質檢報告,其質量標準應達到生2 / 6 產所4需、的質量他標物準；其料（1）載玻片外 觀 ： 明 亮 處 用 肉 眼 觀 察 無 缺 刻 , 無 劃 傷 等 ； 規(guī) 格

10、按 設 計 要 求 ；激 光 掃 描 儀 掃 描 （ 波 長 為 芯 片 檢 測 波 長 ） ： 包 被 層 基 本 均 勻 ；（2）試管、吸頭、試劑瓶等一 次 性 使 用 , 由 生 產 廠 家 提 供 質 量 保 證 , 達 到 設 計 要 求 ；（3）其他：包括試劑瓶標簽、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等,應參 照國家食品藥品監(jiān)督治理局頒布的體外診斷試劑說明書編寫指導原就和醫(yī)療器械說明書、標簽和包裝標識 管理規(guī)定建立相應質量標準 ；（二）蛋要白生檢物測芯片1主原料與生產的產品質量最親密相關的生物原料包括各種自然抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類生物原科

11、；這類原料可用于點膜、標記相關酶、納米金、光學基團及中和反應用抗原或抗體等；使用前應依據(jù)工藝要求對這類生物原料進行質量檢驗,以保證其達到規(guī)定的質量標準；主要生物原料如為企業(yè)自己生產,其工藝必需相對穩(wěn)固；如購買,其供應商要求相對固定,不能隨便變更供應商,假如主要原料（包括工藝）或其供應商有變更,應依據(jù)國家相關法規(guī)的要求變更申請；主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：外觀肉眼觀看,大部分生物原料為澄清均一液體,不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或 者 為 白 色 粉 末 , 不 含 其 他 顏 色 雜 質 ； 特 殊 生 物 原 料 應 具 備 相 應 外 觀 標 準 ；純度和分子量生物原料經SD

12、S電泳后,利用電泳掃描儀進行分析；也可用其他相宜的方法,如高效液相法等進行分析；依據(jù)所檢測生物原料的分子量挑選相宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳；一般每個電泳道加樣量為5 g；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色；染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量,純度應達到相應的質量標準,分子量大小應在正確的條帶位置；蛋白濃度蛋白濃度可通過Lowry 法、 280nm 光吸取法、雙縮脲法或其它相宜方法進行檢測；價效效價的測定一般依據(jù)蛋白含量測定結果,通過倍比稀釋法進行；效價應達到規(guī)定的要求功能性實；驗功能性試驗是指生物原料用于試劑盒實際生產中的情形,一般考查使用該原料的試劑的 靈 敏 度 、

13、特 異 性 和 穩(wěn) 定 性 等 , 并 比 較 其 與 上 批 次 原 料 的 相 關 性 ；2主要生物輔料生物輔料指的是在生產過程中作為蛋白愛護劑用途的一類生物原料,主要包括小牛血 清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等；這些生物原料的質量標準應符合中國生物制品主要原輔材料質控標準（2022 年版）規(guī)定的質量標準要求,并且要適合于企業(yè)生產；異：建議作以下檢驗牛血清或羊血清外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體,無溶血或物3 / 6 無菌試驗：將血清直接 37放置 7 天,放在光明處觀看,不得顯現(xiàn)混濁或沉淀；總 蛋 白 含 量： 用 雙 縮 脲 法 測 定, 標 準 為 不 小 于 32mg/ml；球蛋

14、白含量：取待測血清 1ml,采納飽和硫酸銨法進行沉淀；沉淀溶于 0.85%NaCl 溶液至 1ml,用 Lowry 法 測 定 蛋 白 含 量 不 能 大 于 2mg/ml； 牛 血 清 白 蛋 白：外觀：應為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末,無吸潮,無結塊,無肉眼可見的其它雜質 顆 粒；溶解性：將牛血清白蛋白配成 10%溶液,溶解時間在 18-26時應不大于 15 分鐘； p值 應 為 6.5.7.1；總 蛋 白 含 量 ： 用 雙 縮 脲 法 測 定 , 其 標 準 為 不 小 于 干 重 的 95 ；總蛋白中的 BSA 含量：采納硝酸纖維素膜電泳法,其標準為不小于總蛋白含量的 95%；BS

15、A 的 凈 含 量 ： 總蛋白 含 量 乘 總 蛋 白 中的 BSA 含 量 ,其 標 準 為 不小 于 90% ； 酪 蛋 白：應 符 合 生 產 所 需 的 質 量 標 準； 標 記 用 酶應在產品的質量標準中明示所使用的標記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）,同時應依據(jù)不同生產廠家的檢驗方法和質量標準進行檢驗,酶的純度3.0RZ 值（OD403nm/OD280nm）應大于；對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等,仍應進行功能性試驗,即以其為 原 料 配 制 一 定 濃 度 的 稀 釋 液 作 為 樣 品 , 進 行 測 定 , 均 不 得 出 現(xiàn) 非 特 異 性 反

16、應 ；生 物 輔 料 的 供 應 商 同 樣 要 求 相 對 固 定 , 不 得 隨 意 變 更 供 應 商 ；3化學原輔料參照中國生物制品主要原輔材料質控標準（的檢測指標包括：溶液外觀、一般鹽類、溶液2022 年版）分析純級別進行檢驗；主要 pH 值、溶解情形、干燥失重、熾灼殘渣等；主要化學原材料的供應商要求相對固定,不得隨便發(fā)生變更；化學原材料在購入時,原材料的生產商必需供應當批次化學原材料的質量保證材料和質檢報告,其質量標準應達到生產4所需的其質量基標物準；他料質以硝酸纖維素膜為例：孔徑符合設計要求（0.45 m、0.22 m等）、均一性（厚度及毛細遷移速度20）、尺寸（與標識吻合）由產

17、廠家試供劑瓶,和干燥求劑生提質量保證達到規(guī)定要；其他：說明書、包裝外盒等應參照國家食品藥品監(jiān)督治理局頒布的體外診斷試劑說明書編寫指導原就和醫(yī)療 器械說明書、標簽和包裝標識治理規(guī)定建立相應質量掌握標準,如數(shù)量、規(guī)格等；三、試劑盒各組分的生產生物芯片主要包括DNA 芯片、蛋白芯片、組織芯片和細胞芯片等；生物芯片診斷試劑產品基本可分成二個部分,一部分是芯片,另一部分檢測用工作液；假如有配套的檢測儀器,仍需對儀器及處理芯軟件的應用加以說明；（一）片的生產芯 片 生 產 的 基 本 過 程 包 括 探 針 的 獲 取 方 法 , 純 化 , 點 樣 , 固 定 ；1探針獲取4 / 6 不同芯片,主要是探

18、針不同,生物芯片的探針主要包括以下幾類,其它探針可參考制定相應的技術及質量標準；指（1）DNA探針的獲取探針的形式包括PCR 產物、克隆DNA 、人工合成DNA 片段等；要求有生產程序和質量；標及檢測方法,要進行純化,有固定的純化程序（2）抗原的生產抗原獲得方法包括細胞培育、從生物材料中分別提取、基因工程表達以及合成肽等；基因工程表達產物又分3為純抗原蛋白、融合蛋白等；（）抗體抗體分單克隆抗體和多克隆抗體；抗體制備包括細胞培育,動物腹水,基因工程表達等方（4）式胞和組；細織包 括 細 胞 或 組 織 類 型 , 固 定 方 法 ； 組 織 材 料 包 括 固 定 , 包 埋 , 切 片 等 ；

19、2陣列的排列設計陣列的排列可以是依次排列、隨機排列、對角線排列以及其它排列方式,但設計時需考慮重3復次數(shù)點和對照等因制素；陣的作使 用 儀 器 的 需 要 確 定 型 號 , 程 序 ； 手 工 制 作 的 也 應 有 標 準 操 作 程 序 ；4固定：包括固定方式,固定條件等；應對芯片生產的過程進行相應的質量掌握,如點樣和固定過程的監(jiān)控、點樣均一性檢驗等（二）工作液配；制1芯片生產所需試劑,包括細胞培育基,探針制備試劑,陣列制作和固定試劑等； 2樣品處理試劑,芯片檢測靶分子分為核酸和蛋白質；檢測核酸的樣品處理試劑包括臨床取樣, DNA 提取或RNA 提取試劑,逆轉錄試劑,PCR 擴增試劑,核

20、酸標記試劑等；檢測 蛋 白 的 處 理 試 劑 包 括 取 樣 試 劑 , 蛋 白 稀 釋 液 以 及 特 殊 試 劑 等 ； 3反應液：檢測核酸時的反應液包括預雜交液,雜交液,洗脫液等；檢測蛋白時,包括封 閉 液 , 抗 原 / 抗 體 反 應 液 , 洗 脫 液 , 顯 色 液 , 顯 色 終 止 液 等 ；1（標三依據(jù)）包括數(shù)off據(jù)的確判依據(jù)；讀判斷準及,Cut 值定2數(shù)據(jù)判讀方式：人工仍是軟件判讀； 3假如是軟件判讀,應供應軟件判定的科學依據(jù)（包括生物學原理、數(shù)據(jù)獵取原理和判斷 實 驗 是 否 成 立 的 依 據(jù) ） 以 及 實 驗 測 試 的 原 始 報 告 （ 或 數(shù) 據(jù) ） ,

21、 并 需 要 說 明 ： 軟 件 的 來 源 ：購 買 或 自 己 編 制, 是 否 獲 得 注 冊 等 ； 軟 件 的 用 途 ： 包 括 對 數(shù) 據(jù) 的 分 析 、 存 儲 、 解 讀 、 含 義 等 ； 軟 件 的 使 用：基 本 的 使 用 程 序；四、半 成 品 質 量 控 制（一）抽 樣檢 驗 人 員 按 批 號 抽 取 檢 驗 需 要 數(shù) 量 的 半 成 品 , 作 好 標 記 , 待 檢 ；（二）半成品檢驗利用上一批檢驗合格的試劑盒的相應組分,對本批生產出的各種試劑盒組分分別進行檢驗,檢驗結果達到產品的質量標準；半成品檢驗,一般使用國家標準品（參考品）或經國家標準品（參考品）標化后的企業(yè)參考品進行；如某類試劑沒