反相高效液相色譜法對(duì)茯苓飲片指紋圖譜的研究

1、反相高效液相色譜法對(duì)茯苓飲片指紋圖譜的研究【摘要】目的建立茯苓飲片的指紋圖譜。方法采用高效液相色譜法測(cè)定，乙腈-0.05%磷酸水，梯度洗脫，流速：1.0l/in，柱溫：30，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：242n。結(jié)果茯苓飲片中有11個(gè)共有峰被確定為指紋峰，采用“hrafingerV0.9beta軟件評(píng)價(jià)12批茯苓飲片指紋圖譜的相似性，相關(guān)系數(shù)法大于0.8403，夾角余弦法大于0.9068。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便，穩(wěn)定，精細(xì)度高，重復(fù)性好，可用于茯苓飲片的鑒別，可以有效控制飲片質(zhì)量?！娟P(guān)鍵詞】茯苓飲片；高效液相色譜法；指紋圖譜Abstrat：bjetiveTestablishHPLfingerprintfPriash

2、erbs.ethdsHPLasndutedandthebilephasensistedfaetnitrile-0.05%phsphriaid-ateraselutedingradientelutin.Theflrateas1.0l/in.Thelunteperatureasat30andthedetetinavelengthas242n.ResultsTheelevennpeaksfPriasherbseredeterinedasfingerprintpeaks.SiilarityasanalyzedbyhrafingerV0.9betafingerprintanalysissftare.Th

3、eresultsshedthatsiilarityasrethan84.03%byrrelatineffiientethdandsiilarityasrethan90.68%bysineethd.nlusinThisethdissiple,stableandreprduible.ItanbeusedtidentifyandeffetivelyntrlqualityfPriasherbs.Keyrds：Priasherbs；HPL；Fingerprint茯苓為多孔菌科真菌茯苓Prias(Sh.)lf的枯燥菌核1，具有利水滲濕、健脾安神之成效。主要用于小便不利、水腫；脾虛腹瀉、日久不止；痰飲停溜、

4、食欲不振；驚悸、失眠等癥。對(duì)于茯苓的指紋圖譜研究，段啟等2曾對(duì)不同產(chǎn)地茯苓藥材進(jìn)展過(guò)高效液相色譜HPL指紋圖譜研究，而對(duì)于茯苓飲片尤其是經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化炮制加工的飲片HPL指紋圖譜研究未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化炮制工藝加工的茯苓飲片進(jìn)展了指紋圖譜研究，以期對(duì)其質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供有效方法3。1儀器與試藥1.1儀器L-20AT高效液相色譜儀日本島津；大連伊利特Hypersil-DS(4.6250)高效液相色譜柱；工作站：B-102；檢測(cè)器：SPD-20A；TP600超聲波提取器北京天鵬電子新技術(shù)；BS210S型電子天平北京塞多利斯公司。1.2試劑乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為雙蒸水經(jīng)0.45微

5、孔濾膜濾過(guò)，其他試劑均為分析純。1.3藥材茯苓藥材分別采集于宛西制藥GAP基地、河南商城等地共12批樣品來(lái)源及編號(hào)見(jiàn)表1。按照本課題組研究的標(biāo)準(zhǔn)化炮制工藝進(jìn)展浸泡、潤(rùn)蒸并切制成不同規(guī)格。表1樣品來(lái)源及編號(hào)略2方法與結(jié)果2.1色譜條件大連伊利特Hypersil-DS(4.6250)高效液相色譜柱；檢測(cè)器：SPD-20A；工作站：B-102；流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸水，梯度洗脫見(jiàn)表2；流速：1.0l/in；柱溫：30；檢測(cè)波長(zhǎng)：242n。表2流動(dòng)相梯度洗脫程序略2.2供試品溶液的制備取茯苓飲片，粉碎，過(guò)40目篩。取粉末約1.0g，精細(xì)稱(chēng)定，置于具塞錐形瓶中，加95%乙醇25l，超聲提取20in

6、，過(guò)濾，殘?jiān)?5%乙醇重復(fù)提取兩次，合并濾液并揮干乙醇，用色譜甲醇定容于10l容量瓶中，臨用前用0.45微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。2.3方法學(xué)考察2.3.1精細(xì)度實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱(chēng)取編號(hào)3藥材，制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，共有峰的相對(duì)保存時(shí)間RSD0.452%，相對(duì)峰面積RSD2.084%，結(jié)果說(shuō)明儀器精細(xì)度良好。2.3.2穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱(chēng)取編號(hào)3藥材，制備供試品溶液，24h內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣5次，共有峰的相對(duì)保存時(shí)間RSD0.636%，相對(duì)峰面積RSD1.166%，結(jié)果說(shuō)明常溫下茯苓藥材的供試品溶液24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.3.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱(chēng)取編號(hào)3藥材5份，制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣，共有峰的相對(duì)

7、保存時(shí)間RSD0.454%，相對(duì)峰面積RSD2.122%，結(jié)果說(shuō)明重復(fù)性良好。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4茯苓飲片HPL指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)2.4.1指紋圖譜選擇及特征峰的標(biāo)定4測(cè)定12批茯苓飲片60in內(nèi)指紋圖譜，獲得11個(gè)共有峰，由指紋圖譜可以看出10號(hào)峰峰面積積分百分比擬大，別離度及峰形較好，因此選擇10號(hào)峰作為參照峰，標(biāo)號(hào)為S，其他特征峰依次標(biāo)號(hào)為1，2，3，S，11。根據(jù)結(jié)果采用“hrafingerV0.9beta軟件建立了茯苓飲片的色譜指紋圖譜共有形式和茯苓飲片色譜疊加圖結(jié)果見(jiàn)圖12。2.4.2茯苓飲片指紋圖譜特征峰相對(duì)保存時(shí)間和相對(duì)峰面積采用12批茯苓飲片的指紋圖譜，選用10號(hào)峰作

8、為參照峰，選取12批樣品的共有峰共11個(gè)，計(jì)算相對(duì)保存時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果見(jiàn)表34。表312批茯苓飲片共有峰相對(duì)保存時(shí)間，表412批茯苓飲片共有峰相對(duì)峰面積略。2.4.3指紋圖譜相似度的計(jì)算采用“hrafingerV0.9beta軟件對(duì)12批茯苓飲片指紋圖譜進(jìn)展處理得到茯苓飲片相似度分析結(jié)果。結(jié)果見(jiàn)表5。表5茯苓飲片指紋圖譜相似度分析結(jié)果略3討論實(shí)驗(yàn)中考察了超聲提取的時(shí)間和溶劑，用醋酸乙酯、丙酮作為溶劑所得提取液的指紋圖譜上特征峰數(shù)目較少，且峰形較差；用正丁醇、95%乙醇和甲醇作為溶劑所得提取液的指紋圖譜無(wú)明顯的差異，特征峰數(shù)目較多，且峰形較好，但考慮到甲醇有較大的毒性，正丁醇由于粘度大，過(guò)

9、濾困難，應(yīng)選用95%乙醇作為提取溶劑。超聲不同的時(shí)間所得供試品溶液的指紋圖譜無(wú)明顯差異，但超聲20in提取供試品溶液所得的指紋圖譜特征峰的峰面積之和大于超聲30in，超聲40in的峰面積之和，同時(shí)考慮到提取時(shí)間較短，應(yīng)選用超聲時(shí)間為20in。從12批茯苓飲片的分析結(jié)果來(lái)看，樣本整體相似度較高，其中樣本11的相似度偏低，其主要原因可能是樣品11來(lái)自于新疆茯苓藥材，地理位置、氣候、土壤等因素的差異造成茯苓藥材成分的差異，從而導(dǎo)致炮制加工的茯苓飲片存在差異，但是差異不是很顯著相關(guān)系數(shù)法大于0.8403，夾角余弦法大于0.9068。本研究根據(jù)12批茯苓飲片檢測(cè)結(jié)果，選擇11個(gè)共有峰標(biāo)定茯苓飲片的指紋圖譜，具有良好的系統(tǒng)性、特征性和重現(xiàn)性。經(jīng)過(guò)相似度評(píng)價(jià)，所選擇的12批茯苓飲片的指紋圖譜相似度較高，具有良好的相關(guān)性。該方法可靠、簡(jiǎn)便，可作為茯苓飲片質(zhì)量控制的參考方法?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，部S.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2022：166.2段啟，王躍生，王少軍，等.不同產(chǎn)地茯苓藥材高