寒濕痹片對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理改變

1、寒濕痹片對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理改變【摘要】目的：觀察寒濕痹片對tb誘導(dǎo)的大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎踝關(guān)節(jié)組織病理改變的影響。方法：將sd大鼠50只，隨機分成正常組、模型組、寒濕痹片高劑量組、寒濕痹片低劑量組、來氟米特組，每組10只。除正常組外，其余各組用熱殺死結(jié)核分枝桿菌h37ra(tb)與礦物油混勻，一次性經(jīng)尾根部皮下注射，誘導(dǎo)sd大鼠實驗性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)生，觀察各組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜、軟骨、關(guān)節(jié)腔、周圍軟組織炎癥反響等組織病理改變情況，進(jìn)展綜合評分。結(jié)果：與模型組比擬，寒濕痹片能顯著抑制炎癥細(xì)胞的浸潤和滑膜增生，減輕軟骨損傷程度(p0.01)。結(jié)論：寒濕痹片對實驗性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的滑膜增

2、生及關(guān)節(jié)炎癥具有顯著的抑制作用?！娟P(guān)鍵詞】寒濕痹片佐劑性關(guān)節(jié)炎病理effetsfhanshibinpathlgyfankletissueinrheuatidarthritisratshenyuya,tngli,uqifu,etal.tllegefsuthernedialuniversity,guangzhu(510515),hinaabstratbjetive:tstudytheeffetfhanshibi(atraditinalhinesepreparatin)npathlgialhangesfankletissueinrheuatidarthritisratinduedbytbinsdra

3、ts.ethds:thesdratsererandlydividedintthentrlgrup,delgrup,hanshipihighdse,andhanshipildsegrups;psitiventrlseregivenleflunide,10asesineah.theadjuvant-induedrheuatidarthritis(aa)inratsasestablishedbys.iunizatiniththeheat-killedybatrriutuberulsish37ra(tb)inineralil.thepathlgialhangesinanklesynvialebrane

4、,artilage,avityfjint,andinflaatryellinfiltratininsurrundingsfttissueeregraded.results:hanshibiinhibitedinflaatryellinfiltratinandsynviuhyperplasiaandlightenedthedegreefinjurynartilageinaaratsasparediththentrlgrup(p0.01).nlusin:hanshibiuldsignifiantlyinhibitsynviuhyperplasiaandinflaatinfjintnaaratsin

5、duedbytb.keyrdshanshibiadjuvant-induedarthritispathlgy類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheuatidarthritisra)是一種病因不明的自身免疫性疾病，其主要的病理變化包括關(guān)節(jié)炎性細(xì)胞浸潤、滑膜增生、關(guān)節(jié)軟骨及骨組織破壞。寒濕痹片是國家六類新藥痹病系列藥之一，為中華中醫(yī)藥學(xué)會風(fēng)濕病分會協(xié)定處方，主要由附子、制川烏、黃芪、桂枝、麻黃、白術(shù)、當(dāng)歸、白芍、威靈仙、細(xì)辛和甘草組成，主治寒濕痹阻證。臨床觀察1說明，寒濕痹片對改善關(guān)節(jié)疼痛、冷痛等病癥具有較好的療效。本研究旨在觀察寒濕痹片對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvantarthritis,aa)模型踝關(guān)節(jié)組織病

6、理改變的影響。1實驗材料1.1動物sd大鼠60只，雄性，體重16010g，合格證號:2022-a051，由南方醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供。1.2藥物與試劑寒濕痹片(批號：20221101，由遼寧好護(hù)士藥業(yè)集團(tuán)提供);來氟米特(蘇州長征-欣凱制藥，批號：h20000550);heat-killedybateriutuberulsish37ra(tb)，購自美國diflabratries(detrit,i,usa);礦物油(ineralil)，購自美國siga公司，進(jìn)口分裝。其它化學(xué)試劑購自廣東化學(xué)試劑公司。1.3儀器lypusbh-2熒光顯微鏡，日本lypus公司消費;leiar2135型切片機，

7、德國leia公司消費。2實驗方法2.1tb誘導(dǎo)大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型的制備2,3準(zhǔn)確稱取tb，放入高壓消毒的研缽中，在無菌條件下，充分研磨，使tb的顏色由灰色變?yōu)榘咨缓髤⒓由倭康V物油，使tb與礦物油充分混合，再研磨，最后參加礦物油使?jié)舛鹊竭_(dá)5g/l，將該混懸液吸入特制玻璃注射器中，連接二只注射器與三通管上，使tb-礦物油混懸液充分混合均勻，備用。將動物固定在大鼠固定器上，剃掉尾根部的毛發(fā)，以75%酒精消毒，然后在尾根部經(jīng)皮下注射tb誘導(dǎo)劑1g/只，注射后，立即用消毒棉球壓住注射部位，防止液體滲出。2.2實驗分組及給藥sd大鼠60只，雄性，體重140160g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，剔除不合格動物，

8、余下大鼠50只，隨機分為空白對照組、模型組、陽性對照組、寒濕痹片高劑量組和寒濕痹片低劑量組共5組，每組10只。空白對照組和模型組每天灌胃生理鹽水2l/只;陽性對照組灌胃來氟米特(leflunide，lef)5g/kg;寒濕痹片高劑量及低劑量組分別灌胃寒濕痹片混懸液3.2g/kg體重及1.6g/kg體重。實驗周期為28天。2.3病理組織學(xué)檢查方法4實驗完畢后處死動物，取其踝關(guān)節(jié)置-80冰箱內(nèi)冷凍，10小時后取出，縱向沿中間切開成兩半，放入脫鈣劑脫鈣劑成分：濃鹽酸福爾馬林蒸餾水(21088)中脫鈣后常規(guī)石蠟包埋，切片厚5，經(jīng)he染色后，觀察關(guān)節(jié)滑膜被覆上皮有無細(xì)胞變性、增生，間質(zhì)有無炎性細(xì)胞浸潤及

9、肉芽組織形成;關(guān)節(jié)腔有無減小或閉塞，關(guān)節(jié)軟骨有無破壞或纖維化;關(guān)節(jié)周圍皮下組織有無炎細(xì)胞浸潤或纖維化，根據(jù)關(guān)節(jié)各部位病變輕重程度，依次定量為1分(輕度或少量)、2分(中度或多量)、3分(重度或大量)、4分(極重度)，無病變組織定為0分。關(guān)節(jié)周圍皮下組織病變以半量計算。累加所有分?jǐn)?shù)，得出總分，計算出各組每只動物的均分，分值越高提示損傷越嚴(yán)重，反之說明經(jīng)藥物治療后損傷減輕，治療有效。2.4統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均用s表示，采用spss13.0統(tǒng)計軟件ne-ayanvalsd法進(jìn)展統(tǒng)計處理。3實驗結(jié)果3.1各組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜組織病理改變正常組所有大鼠關(guān)節(jié)外表被覆薄層透明軟骨，細(xì)胞排列整齊，關(guān)節(jié)面光滑，軟

10、骨內(nèi)無血管和神經(jīng)。關(guān)節(jié)囊由結(jié)締組織構(gòu)成，囊腔光滑，外表覆有14層滑膜細(xì)胞。軟骨下為骨組織，由松質(zhì)骨組成。關(guān)節(jié)周圍由肌腱橫紋肌結(jié)締組織組成，外表被有復(fù)層鱗狀上皮，未見明顯病理變化。見圖1。模型組9只大鼠關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞有輕中度變性與輕極重度增生，呈短絨毛狀或指突狀伸入關(guān)節(jié)腔內(nèi)。滑膜有少量到多量炎細(xì)胞浸潤，并有少量到多量肉芽組織形成。關(guān)節(jié)腔內(nèi)未見炎性滲出物，但9只大鼠關(guān)節(jié)軟骨有輕度到極重度破壞、外表有纖維結(jié)締組織增生，1只大鼠纖維結(jié)締組織增生明顯，導(dǎo)致關(guān)節(jié)腔消失。周圍軟組織有中重度炎細(xì)胞浸潤，炎細(xì)胞以類上皮細(xì)胞為主，并形成結(jié)核結(jié)節(jié)樣病變，外周有淋巴細(xì)胞浸潤。4只大鼠尚有中性粒細(xì)胞呈灶性集聚，形成部分小

11、膿腫。見圖2。1只動物未見明顯的病理變化。寒濕痹片高劑量組7只大鼠關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞輕中度變性、增生。輕度的(4只)表現(xiàn)為滑膜細(xì)胞層次增多，中度(2只)或重度(1只)增生時呈絨毛狀或指突狀伸入關(guān)節(jié)腔內(nèi)。此外，3只大鼠滑膜有少量炎細(xì)胞浸潤，其中1只大鼠有少量肉芽組織形成。關(guān)節(jié)腔內(nèi)未見炎性滲出物，但3只大鼠關(guān)節(jié)軟骨有輕度破壞，4只大鼠有中度極重度破壞，外表有纖維結(jié)締組織增生。周圍軟組織炎癥反響輕度3只，中度3只，重度1只，炎細(xì)胞浸潤以類上皮細(xì)胞為主，并形成結(jié)核結(jié)節(jié)樣病變，外周有淋巴細(xì)胞浸潤。3只大鼠未見明顯病理變化。見圖3。寒濕痹片低劑量組9只大鼠關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞輕中度變性、增生。輕度的(5只)表現(xiàn)為滑膜細(xì)

12、胞層次增多，中度(2只)或重度(2只)增生時呈絨毛狀或指突狀伸入關(guān)節(jié)腔內(nèi)。此外，4只大鼠滑膜有少量炎細(xì)胞浸潤，其中1只大鼠有少量肉芽組織形成。關(guān)節(jié)腔內(nèi)未見炎性滲出物，但4只大鼠關(guān)節(jié)軟骨有輕度破壞，5只大鼠有中度到極重度破壞，外表有纖維結(jié)締組織增生。周圍軟組織炎癥反響輕度5只，中度2只，重度2只，炎細(xì)胞浸潤以類上皮細(xì)胞為主，并形成結(jié)核結(jié)節(jié)樣病變，外周有淋巴細(xì)胞浸潤。1只尚有中性粒細(xì)胞呈灶性集聚，形成部分小膿腫。1只動物未見明顯病理變化。見圖4。來氟米特組9只大鼠關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞輕度到中度變性、增生。輕度的(3只)表現(xiàn)為滑膜細(xì)胞層次增多，中度(4只)或重度(2只)增生時呈絨毛狀或指突狀伸入關(guān)節(jié)腔內(nèi)。此

13、外，6只大鼠滑膜有少量炎細(xì)胞浸潤，其中1只大鼠有少量肉芽組織形成。關(guān)節(jié)腔內(nèi)未見炎性滲出物，但3只大鼠關(guān)節(jié)軟骨有輕度破壞，6只大鼠有中度到極重度破壞，外表有纖維結(jié)締組織增生。周圍軟組織炎癥反響輕度4只，中度3只，重度2只，炎細(xì)胞浸潤以類上皮細(xì)胞為主，并形成結(jié)核結(jié)節(jié)樣病變，外周有淋巴細(xì)胞浸潤。1只動物未見明顯的病理變化。見圖5。3.2各組大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理改變程度評分比擬與模型組比擬，寒濕痹片高劑量組大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理改變明顯減輕(p0.01);低劑量組、來氟米特組也有不同程度的改善;寒濕痹片高劑量組優(yōu)于來氟米特組(p0.05)。見表1。表1各組大鼠踝關(guān)節(jié)病變程度評分比擬與模型組比擬，*p0.01

14、;與來氟米特組比擬，p0.054討論ra病因尚不清楚。本實驗采用的ra模型大鼠是公認(rèn)的反映ra發(fā)病機制的動物實驗?zāi)Ｐ停浣M織病理學(xué)改變包括滑膜的細(xì)胞增生和以組織細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤為主的滑膜炎并有血管翳形成;軟骨和骨的局灶性破壞可致關(guān)節(jié)纖維性強直，與人類ra具有部分相似性5。ra屬中醫(yī)“痹證范疇。其發(fā)病系營衛(wèi)不固，外感風(fēng)、寒、濕邪，導(dǎo)致氣血不暢，經(jīng)絡(luò)阻滯，痰瘀凝結(jié)為痹。病情反復(fù)發(fā)作，病程遷延，寒濕之邪郁久化熱傷陰，故病機寒熱錯雜。寒濕痹片重用附子、川烏溫經(jīng)通陽、散寒祛濕;當(dāng)歸、桂枝、麻黃、威靈仙、芍藥溫經(jīng)和營止痛，通經(jīng)絡(luò)，引藥直達(dá)病所;黃芪、白術(shù)益氣健脾滲濕;甘草調(diào)和諸藥。諸藥配合，能祛寒除濕，

15、溫通經(jīng)絡(luò)。本實驗結(jié)果顯示，與正常組比擬，模型組病變最重，多數(shù)大鼠踝關(guān)節(jié)有程度不等的病理改變，主要表現(xiàn)為踝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增生、炎性細(xì)胞浸潤;關(guān)節(jié)腔內(nèi)關(guān)節(jié)軟骨有中度到極重度破壞，外表有纖維結(jié)締組織增生，甚至導(dǎo)致關(guān)節(jié)腔閉塞;關(guān)節(jié)周圍軟組織見明顯的炎癥反響。寒濕痹片高劑量組大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理改變那么明顯減輕，表現(xiàn)為大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增生、炎性細(xì)胞浸潤均較輕，關(guān)節(jié)軟骨破壞較輕、纖維化不嚴(yán)重，未見關(guān)節(jié)面粘連，周圍軟組織炎癥反響多不嚴(yán)重。寒濕痹片低劑量組和來氟米特組也有一定的作用。提示寒濕痹片能有效抑制關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增生、炎性細(xì)胞浸潤，從而減輕關(guān)節(jié)滑膜炎癥反響，阻止關(guān)節(jié)內(nèi)和關(guān)節(jié)周圍組織破壞?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1王承德，姜泉，馮興華，等.寒濕痹片治療風(fēng)濕病寒濕痹阻證臨床研究j.中國中醫(yī)急癥，2022，17(2)：175.2perrsn.develpentfarthritis,periarth