同濟醫(yī)院檢驗科ISO15189體系文件20.異丙醇試驗

1、同濟大學(xué)附屬同濟醫(yī)院檢驗科血液組項目操作指導(dǎo)書TJYYJYKMY/XMZ120第2版標題: 異丙醇試驗第1章 第20節(jié)第 PAGE 3 頁 共 NUMPAGES 3 頁 目的：保證異丙醇試驗結(jié)果的準確、可靠。 適用范圍：異丙醇試驗的檢測 項目名稱：異丙醇試驗 檢測方法：沉淀法5 原理：在17%異丙醇溶液中加入血紅蛋白液,置于37度環(huán)境中,正常血紅蛋白40分鐘后開始出現(xiàn)混濁,甚至沉淀.而不穩(wěn)定血紅蛋白在非極性的異丙醇溶液中分子內(nèi)部結(jié)合力減低,穩(wěn)定性降低,通常在5分鐘內(nèi)就開始混濁,20分鐘內(nèi)形成絮狀沉淀.6. 試劑6.1 品牌：Tris 上海試劑二廠Hcl 上海振興化工廠異丙醇 宜興化學(xué)試劑廠6.

2、2 貨號：Tris 13-2010365487IIHcl 13-001-0806-303II異丙醇 610756.3 包裝規(guī)格：Tris 500mL/瓶Hcl 500mL/瓶異丙醇 500mL/瓶6.4 內(nèi)含物：PH7.4 0.1mol/L Tris-HCL 緩沖液 Tris 1.21g H2O 80mL 1N Hcl調(diào)節(jié)至PH7.4 H2O加至 100mL170g/L異丙醇緩沖液: 異丙醇 17mL PH7.4 0.1mol/L Tris-HCL 緩沖液 83Ml 儀器：37度水溫箱 操作步驟：8.1 標本：前綴為05真空管采集的抗凝血。制備正常人及受檢者血紅蛋白液（同血紅蛋白電泳）。8.2

3、 取2支試管，一支為測定管，另一支為對照管。按下表操作：試劑（ml） 測定管 對照管 170g/L異丙醇緩沖液 2 2 加塞,置于37度水溫箱中預(yù)熱數(shù)分鐘 被檢者血紅蛋白液 0.2 / 正常人血紅蛋白液 / 0.28.3 混勻，加塞,置于37度水溫箱中,分別于5,10,20,30,40分鐘時觀察結(jié)果.8.4 結(jié)果判斷:強陽性反應(yīng):5分鐘內(nèi)出現(xiàn)混濁,20分鐘內(nèi)出現(xiàn)大塊沉淀陽性反應(yīng):40分鐘內(nèi)出現(xiàn)混濁,沉淀陰性反應(yīng):溫育40分鐘仍透明或混濁 線性范圍：無10. 參考范圍：陰性反應(yīng)11 臨床意義：11.1 不穩(wěn)定Hb病為強陽性11.2 HbH,HbE,HbF增高及G6PD缺陷患者,均可出現(xiàn)陽性.11.3 正常臍帶血強陽性,1個月后逐漸為陰性. 病人準備、標本要求：無溶血無脂血13 注意事項：13.1 170g/L異丙醇緩沖液PH不低于7.2,否則產(chǎn)生假陽性.13.2 嚴格控制溫度,保證試劑的預(yù)溫時間, 否則產(chǎn)生假陰性13.3 須作正常對照13.4 血紅蛋白液須新鮮13.5 HbF4%,可產(chǎn)生假陽性13.6 制備Hb溶液時盡量不要使用有機溶劑,在不得不使用有機溶劑時,則應(yīng)使用四氯化碳.13.7 制備Hb液時,須高速離心,以完全除去細胞膜殘渣,. 否則產(chǎn)生假陽性.13.8 Hb液濃度不低于75g/L,否則出現(xiàn)假陰性