生物制藥工藝技術(shù)基礎(chǔ)

1、關(guān)于生物制藥工藝技術(shù)基礎(chǔ)第一張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月生化制藥的六個(gè)階段 1. 原料的選擇和預(yù)處理 2. 細(xì)胞的粉碎 3. 提取：從原料中經(jīng)溶劑分離有效成分，制成粗品的工 藝過(guò)程。 4. 純化：粗制品經(jīng)鹽析、有機(jī)溶劑沉淀、吸附、層析、 透析、超離心 、膜分離、結(jié)晶等步驟進(jìn)行精制的工藝 過(guò)程。 5. 濃縮、干燥及保存 6. 制劑：原料藥（精制品）經(jīng)精細(xì)加工制成片劑、針 劑、凍干劑、粉劑等供臨床應(yīng)用的各種劑型。第二張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié)生物材料與生物活性物質(zhì)一、 生物材料的來(lái)源概述：1.動(dòng)、植物、微生物的組織、器官、細(xì)胞與代謝產(chǎn)物是生產(chǎn)生物藥物的生物資源；2.

2、動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)與微生物發(fā)酵技術(shù)是獲得生物制藥原料的重要途徑；3. 基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)和酶工程技術(shù)是開(kāi)發(fā)生物制藥資源的新途徑。 第三張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（一）動(dòng)物臟器 主要來(lái)源是豬、牛、羊和家禽、魚(yú)類(lèi)等的臟器，包括胰臟、腦、胃粘膜、肝臟、脾臟、小腸、腦垂體和心臟等。1. 胰臟 位于胃的后方，橫于腹后壁，是動(dòng)物體內(nèi)不可替代的實(shí)質(zhì)性腺體之一。分泌胰島素和胰高血糖素，調(diào)節(jié)糖的代謝；還分泌各種消化酶，如胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶。已用胰臟提取的生物藥物有40多種。2. 腦 腦組織富含脂質(zhì)，腦組織中脂類(lèi)占13.5%，蛋白質(zhì)占8-10

3、%，脂類(lèi)物質(zhì)主要是磷脂、肌醇磷脂、神經(jīng)磷脂、腦苷脂、神經(jīng)節(jié)苷脂和膽固醇，還有神經(jīng)遞質(zhì)和多種神經(jīng)肽。第五張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3. 胃 其位置、形態(tài)因人而異，一般在左上腹，瘦長(zhǎng)型的人常為垂直的長(zhǎng)胃。為動(dòng)物的消化器官，主要分泌消化液，如胃蛋白酶、組織蛋白酶、膠原蛋白酶等。4. 肝臟 位于右上腹部，是機(jī)體內(nèi)最大的實(shí)質(zhì)性腺體，是機(jī)體的“生化反應(yīng)器”，含有復(fù)雜的酶系。已知的肝臟酶達(dá)數(shù)百種。用肝臟可制備肝注射液、肝水解物、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、造血因子等。5. 脾臟 位于胃的左后側(cè), 左側(cè)9-11肋骨內(nèi)側(cè)的一個(gè)長(zhǎng)圓形暗紅色器官, 是體內(nèi)最大的周?chē)馨推鞴?、免疫器官，已用于生產(chǎn)的藥物有脾水解物、

4、脾RNA和脾轉(zhuǎn)移因子。第六張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月6. 小腸 消化和吸收的主要場(chǎng)所，小腸的長(zhǎng)度在成人平均是5-7米，含有30多種胃腸道激素。7.腦垂體 懸垂于腦的底部，體積很小，總重量不到1克，但結(jié)構(gòu)復(fù)雜，包括腺垂體和神經(jīng)垂體兩部分，分泌的激素種類(lèi)多，作用廣泛，并能調(diào)節(jié)其他內(nèi)分泌腺的活動(dòng)。8.心臟 位于胸腔內(nèi)，膈肌的上方，二肺之間，是一個(gè)厚壁的肌性有腔器官，具有節(jié)律性的收縮能力。心臟含有豐富的糖元、激素和酶類(lèi)，用心臟為原料生產(chǎn)的藥物主要有細(xì)胞色素C、輔酶Q10和心血通注射液。 第七張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二）血液、分泌物和其他代謝物 以血液為原料可生產(chǎn)多種藥物

5、，如凝血酶、血紅蛋白、SOD、干擾素等。 其他，如尿液、膽汁、蛇毒、蜂毒也是重要的生物材料。第八張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（三）海洋生物 海洋生物約占全球生物的一半，估計(jì)多達(dá)5億種，是開(kāi)發(fā)新藥的重要寶庫(kù)。1. 海藻 已從藻類(lèi)生物中發(fā)現(xiàn)、提取了一些抗腫瘤、防治心血管疾病、治療慢性氣管炎、驅(qū)蟲(chóng)、抗放射線物質(zhì)等。2. 腔腸動(dòng)物 屬于原始多細(xì)胞動(dòng)物，已應(yīng)用的不多，已提取的有前列腺素類(lèi)、萜類(lèi)抗菌物質(zhì)、抗癌物質(zhì)。 第九張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3.節(jié)肢動(dòng)物 其中的某些甲殼動(dòng)物（包括蝦、蟹）可供藥用，從中提取的甲殼素可用于甲亢、腫瘤、肝炎、腎炎和糖尿病等的輔助治療，另外在食品工業(yè)

6、上有重要用途，如用于廢水處理、食品添加劑、減肥。4.軟體動(dòng)物 包括螺、蚌類(lèi)和烏賊等，已從其中提取出一些具有抗病毒、抗腫瘤、抗菌、降血脂、止血、平喘作用的多糖、多肽、毒素等。5.棘皮動(dòng)物 包括海星、海膽、海參，關(guān)于海膽的研究很多，已提取到不少藥物，還發(fā)現(xiàn)了在化工方面的應(yīng)用。第十張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月6.魚(yú)類(lèi) 可制造多種藥物，最常用的是魚(yú)肝油。7.爬行動(dòng)物 海生爬行動(dòng)物有海蛇、海龜?shù)龋Ｉ叨疽汉卸喾N酶類(lèi)。8.海洋哺乳動(dòng)物 從鯨魚(yú)、海豚，可以提取多種藥物。第十一張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（四）植物 藥用植物品種繁多，除含有生物堿、強(qiáng)心苷、黃酮、皂苷、揮發(fā)油、樹(shù)脂、鞣

7、質(zhì)等有效藥理成分外，還含有氨基酸、蛋白質(zhì)、酶、激素、糖類(lèi)、脂類(lèi)、維生素等生化成分。如天花粉蛋白、菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶、凝集素、多糖等。第十二張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月藥用植物中的主要藥理成分：1.生物堿，是生物體中一類(lèi)含氮有機(jī)化合物的總稱，它們有類(lèi)似堿的性質(zhì)，能和酸結(jié)合成鹽。如麻黃堿、嗎啡。2.強(qiáng)心苷，是一類(lèi)對(duì)心肌有興奮作用，具有強(qiáng)心生理活性的成分，它們的分子中都有一個(gè)C17位被不飽和內(nèi)酯環(huán)所取代的甾體母核。如洋地黃毒苷。3.黃酮，系兩個(gè)芳環(huán)通過(guò)三碳鏈相互連結(jié)而成的一系列化合物，大多數(shù)具有顏色，在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷。銀杏中含銀杏素、異銀杏素、白果素等都是黃酮類(lèi)，它們具有

8、解痙、降壓、擴(kuò)張冠狀血管等藥理作用。第十三張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4.皂苷，是一類(lèi)比較復(fù)雜的化合物，它們的水溶液振搖時(shí)能產(chǎn)生大量持久的蜂窩狀泡沫，與肥皂相似，故名皂苷。它們有減低液體表面張力的作用，可以乳化油脂，用做去垢劑。人參中含皂苷總量約4%。5.揮發(fā)油，是具香味和揮發(fā)性、可隨水蒸氣蒸餾的易流動(dòng)的油狀液體。它們多數(shù)具有多方面的藥理作用，如解表、發(fā)汗、驅(qū)風(fēng)、鎮(zhèn)痛、殺蟲(chóng)、抗菌。薄荷、茴香、樟木、桂皮都含有揮發(fā)油。6.樹(shù)脂，常與揮發(fā)油、樹(shù)膠、有機(jī)酸等混合存在，與揮發(fā)油共存的稱油樹(shù)脂，與樹(shù)膠共存的稱膠樹(shù)脂，與芳香族酸共存的稱香樹(shù)脂。藥用的如松香、乳香、沒(méi)藥、安息香等 .第十四張，P

9、PT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月7.鞣質(zhì)，又稱丹寧，鞣酸，是存在于植物中的一類(lèi)分子較大的復(fù)雜多元酚類(lèi)化合物，可與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的沉淀，故能與生獸皮結(jié)合而形成致密、柔順、不易腐敗又難以透水的皮革，所以稱為鞣質(zhì)。茶葉、柿子中含有豐富的鞣質(zhì)。鞣質(zhì)可用于解毒、抗菌、治療燒傷（使創(chuàng)面收斂、干燥、結(jié)痂）。第十五張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（五）微生物 微生物資源非常豐富，其代謝產(chǎn)物有1300多種，已大量生產(chǎn)的才近100種，微生物酶有幾千種，已被應(yīng)用的才幾十種，可見(jiàn)其應(yīng)用前景廣闊。1. 細(xì)菌 常用細(xì)菌發(fā)酵法生產(chǎn)乳酸（消毒防腐藥，用于空氣消毒）、醋酸、丙酮、丁酸，它們?cè)卺t(yī)藥工業(yè)應(yīng)用很廣。利

10、用細(xì)菌生產(chǎn)氨基酸、有機(jī)酸、糖類(lèi)、核苷酸類(lèi)、維生素、酶，發(fā)展?jié)摿艽蟆Ｓ冒ＯＪ洗竽c桿菌生產(chǎn)的天冬酰胺酶是治療腫瘤的第一個(gè)酶制劑。第十六張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2. 放線菌 是最重要的抗生素產(chǎn)生菌，已有的1000多種抗生素產(chǎn)自放線菌；還利用放線菌生產(chǎn)氨基酸、核苷酸類(lèi)、維生素、酶。3. 真菌 可以利用真菌生產(chǎn)酶、有機(jī)酸、氨基酸、核酸、維生素、促生素、多糖；還可以直接利用真菌本身作為藥物，如靈芝、銀耳、冬蟲(chóng)夏草。4. 酵母菌 可生產(chǎn)維生素、蛋白質(zhì)、多肽和核酸等。第十七張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（六）開(kāi)發(fā)生物新資源1.動(dòng)植物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)2.應(yīng)用基因工程技術(shù)，生產(chǎn)各種生物

11、活性物質(zhì)，尤其適合于在自然界中含量低、活性高的一些微量物質(zhì)的生產(chǎn)。第十八張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、 生物活性物質(zhì)的存在方式（一）生物活性物質(zhì)的存在方式與其生物功能 生物活性物質(zhì)分為“胞內(nèi)”與“胞外”兩種存在部位。 存在于細(xì)胞內(nèi)的生物活性物質(zhì)有些游離在胞漿中，有些結(jié)合于質(zhì)膜或器膜上，或存在于細(xì)胞器內(nèi)。 對(duì)于胞內(nèi)物質(zhì)的提取要先破碎細(xì)胞；對(duì)于膜上物質(zhì)則要選擇適當(dāng)?shù)娜軇┦蛊鋸哪ど先芙庀聛?lái)。第十九張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二）生物分子間的作用力 生物分子間主要是通過(guò)一些非共價(jià)鍵，如氫鍵、鹽鍵、金屬鍵、范德華力、疏水鍵、堿基堆積力所維系，其鍵能較弱； 生物大分子的空間高級(jí)

12、結(jié)構(gòu)也是由非共價(jià)鍵結(jié)合的，因此分離時(shí)應(yīng)十分小心，確保立體結(jié)構(gòu)不受破壞。 通常在十分溫和條件下操作。第二十張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、生物活性物質(zhì)的存在特點(diǎn)（一）生物材料組成的復(fù)雜性 不同生物含有不同種類(lèi)的活性物質(zhì)。 同種生物，由于細(xì)胞的類(lèi)型、年齡、分化程度的不同都會(huì)改變活性物質(zhì)的組成。 如：胸腺激素只能從幼齡動(dòng)物中提??；絨毛膜促性腺激素(HCG)只能從孕婦尿中提取。第二十一張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二）生物活性物質(zhì)存在的特點(diǎn)1.生物活性物質(zhì)在生物體材料中含量較低、雜質(zhì)含量很高。 例如：胰島素在胰臟中的含量約為萬(wàn)分之二，膽汁中的膽紅素含量為萬(wàn)分之五至八。2.生物材

13、料中的生化組成數(shù)量大，種類(lèi)多，目的物與雜質(zhì)的理化性質(zhì)接近，分離純化困難。第二十二張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月四、 生物材料的準(zhǔn)備 （一) 生物材料的選取 選擇原則：有效成分含量高，原料新鮮、無(wú)污染；來(lái)源豐富、易得；原料產(chǎn)地較近，價(jià)格低廉；原料中雜質(zhì)含量少，便于分離純化等。 1. 有效成分的含量(1)生物品種：催乳素以哺乳動(dòng)物為材料 (2)合適的組織器官 ：免疫球蛋白以血液為原料 (3)生物的生長(zhǎng)期2. 雜質(zhì)情況3. 來(lái)源第二十三張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 （二） 生物材料的采集、預(yù)處理與保存采集：必須快速、及時(shí)速凍、低溫保存。預(yù)處理：1、動(dòng)物組織先要剔除結(jié)締組織、脂肪

14、組織等非活性部分；植物種子去殼除脂；微生物要進(jìn)行菌體與發(fā)酵液分離等基本操作。便于貯存和運(yùn)輸。2、冷凍法預(yù)處理：有些材料要冷凍保存或低溫保存，以便抑制微生物和酶的作用。3、有機(jī)溶劑除去部分水分：用丙酮或乙醇進(jìn)行脫水和脫脂，有利于貯存。保存方法：有速凍、凍干、或浸存于丙酮與甘油中。第二十四張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 細(xì)胞破碎 在提取前先將大塊的原料粉碎或絞碎成適度的粒度，或?qū)⒓?xì)胞破碎，使胞內(nèi)活性物質(zhì)充分釋放到溶液中，有利于提取或吸附。 動(dòng)物臟器組織：常用絞肉機(jī)機(jī)械法粉碎； 植物肉質(zhì)組織：常用磨碎法； 微生物：常用自溶、冷熱交替、加砂研磨、超聲、加壓等 處理方法。 第二十五張，P

15、PT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1.機(jī)械法：組織搗碎機(jī)、勻漿器、研缽、球磨機(jī)、萬(wàn)能粉碎機(jī)、絞肉機(jī)、擊碎機(jī)、刨片機(jī)。 動(dòng)物組織多在冰凍狀態(tài)絞碎、溶漿。2.物理法 A、反復(fù)凍融法：把待破碎的樣品冷至-20-15 ，使 之凝固，然后緩慢的溶解，如此反復(fù)操作，大部分動(dòng)物 細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的顆?？梢云扑椤?B、冷熱交替法：將材料投入沸水中，在90左右維持?jǐn)?shù) 分鐘，立即置于冰浴中，使之迅速冷卻，絕大部分細(xì)胞 被破壞。此法多用于細(xì)菌或病毒中提取蛋白和核酸。 第二十六張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 C、超聲波處理法：多用于微生物材料，處理的效果與 樣品濃度、使用頻率有 關(guān)。用大腸桿菌制備各種酶 時(shí)，常

16、用50100 mg/L菌體濃度，在110KC頻率下 處理1015 min。操作時(shí)注意避免溶液中氣泡的存在。 D、加壓破碎法：加氣壓或水壓，達(dá)0.5934.32 MPa (210350kgf/cm2)的壓力時(shí)， 可使90%以上細(xì)胞被 壓碎。多用于微生物酶制劑的工業(yè)制備。第二十七張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3. 化學(xué)法： 用稀酸、稀堿、濃鹽、有機(jī)溶劑、表面活性劑處理細(xì)胞。4. 生化法： A. 自溶法：將新鮮的生物材料存放在一定的pH和適當(dāng)溫度下，利用組織細(xì)胞中自身的酶系將細(xì)胞破壞，使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來(lái)的方法。自溶的溫度，動(dòng)物材料在0-4 ，微生物在室溫下。自溶時(shí)，需加少量的防腐劑，甲苯

17、、氯仿，以防止外界細(xì)菌的污染。 * 由于自溶時(shí)間較長(zhǎng)，不易控制，故制造具有活性的核酸和蛋白質(zhì)時(shí)比較少用。 第二十八張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4. 生化法： A. 自溶法：將新鮮的生物材料存放在一定的pH和適當(dāng)溫度下，利用組織細(xì)胞中自身的酶系將細(xì)胞破壞，使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來(lái)的方法。自溶的溫度，動(dòng)物材料在0-4 ，微生物在室溫下。自溶時(shí)，需加少量的防腐劑，甲苯、氯仿，以防止外界細(xì)菌的污染。 * 由于自溶時(shí)間較長(zhǎng)，不易控制，故制造具有活性的核酸和蛋白質(zhì)時(shí)比較少用。 第二十九張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 B. 溶菌酶處理法：溶菌酶是專(zhuān)一地破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的酶。多用于微生物。如用

18、噬菌體感染大腸桿菌細(xì)胞制造DNA時(shí)，采用pH 8.0的0.1 mol/L Tris-0.01 mol/L EDTA 制成 2 億個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，然后加 入100g1 mg的溶菌酶，在37 oC保溫10 min，細(xì)菌胞壁即被破壞。第三十張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、提取方法1. 用酸、堿、鹽水溶液提取用于提取各種水溶性、鹽溶性的生化物質(zhì)，這類(lèi)溶劑提供了一定的離子強(qiáng)度、pH值及相當(dāng)?shù)木彌_能力。某些與細(xì)胞結(jié)構(gòu)結(jié)合牢固的生物大分子，在提取時(shí)采用高濃度鹽溶液（如4mol/L鹽酸胍，8 mol/L脲或其他變性劑，這種方法稱“鹽解”）。 第三節(jié) 生物活性物質(zhì)的提取第三十一張，PPT共八十頁(yè)

19、，創(chuàng)作于2022年6月2.用表面活性劑提取 表面活性劑分子兼有親水與疏水基團(tuán)，在分布于水-油界面時(shí)有分散、乳化和增溶作用。 表面活性劑可分為陰離子型、陽(yáng)離子型、中性與非離子型。 離子型表面活性劑作用強(qiáng)，但易引起蛋白質(zhì)等生物大分子的變性； 非離子型表面活性劑變性作用小，適合于用水、鹽系統(tǒng)無(wú)法提取的蛋白質(zhì)或酶的提取。 陰離子表面活性劑SDS可以破壞核酸與蛋白質(zhì)的離子鍵合，對(duì)核酸酶又有一定抑制作用，因此常用于核酸的提取。第三十二張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月表面活性劑的親油、親水性能的強(qiáng)弱，通常以親水親油平衡值（H.L.B）表示： H.L.B=親水基的親水性/親油基的親油性 生物提取常用的

20、表面活性劑，其H.L.B多在10-20之間。 經(jīng)表面活性劑處理后，它的存在對(duì)酶蛋白等的進(jìn)一步純化帶來(lái)一定困難，如鹽析時(shí)很難使蛋白質(zhì)沉淀，因此需先除去。離子型表面活性劑可用離子交換層析法除去；非離子型表面活性劑可用親脂性葡聚糖凝膠層析法除去；其他表面活性劑可用分子篩層析法除去。第三十三張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3.有機(jī)溶劑提?。?）固-液提取，常用于水不溶性的脂類(lèi)、脂蛋白、膜蛋白結(jié)合酶等的提取。包括單一溶劑分離法、多種溶劑組合分離法。 常用的有機(jī)溶劑：極性溶劑，甲醇、乙醇、丙酮、丁醇。 非極性溶劑，乙醚、氯仿、苯。 選用有機(jī)溶劑，一般采用“相似相溶”原則。 采用有機(jī)溶劑，既能抑制微

21、生物的生長(zhǎng)和某些酶的作用，防止目的物降解失活，也能阻止大量無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)的溶出，有利于進(jìn)一步純化。第三十四張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）液-液萃取概念：利用溶質(zhì)在兩個(gè)互不混溶的溶劑中溶解度的差異，將溶質(zhì)從一個(gè)溶劑相向另一個(gè)溶劑相轉(zhuǎn)移的操作。影響因素： 目的物在兩相的分配比（分配系數(shù)K）； 有機(jī)溶劑的用量。 K增大，提取效率增大。 K值較小時(shí)，可以適當(dāng)增加有機(jī)溶劑的用量，采用多次提取。第三十五張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月溶劑萃取的注意事項(xiàng)：1. pH值，酸性物質(zhì)在酸性條件下萃?。?堿性物質(zhì)在堿性條件下萃?。?氨基酸等兩性電解質(zhì)，則采用在等電點(diǎn)進(jìn)行提取。2.鹽析，在提取液中

22、加入適量中性鹽，促使生化物質(zhì)轉(zhuǎn)入有機(jī)相，從而提高萃取率。并且，鹽析作用能減少有機(jī)溶劑在水中的溶解度，使提取液中的水分含量減少。3.溫度，室溫或低溫下操作。因?yàn)闇囟壬?，既使生物材料不穩(wěn)定，又易使有機(jī)溶劑揮發(fā)。 4. 乳化，乳化層出現(xiàn)使有機(jī)相與水相分層困難。消除乳化的方法包括過(guò)濾、離心、輕輕攪動(dòng)、改變兩相的比例、加熱、加電解質(zhì)（NaCl, NaOH, HCl）、加吸附劑（CaCO3）。第三十六張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月液-液萃取時(shí)，溶劑的選擇：l具有較高選擇性，即K值較大。l在萃取后，溶質(zhì)與溶劑容易分離與回收。l兩種溶劑的密度相差較大，以減少乳化作用。l無(wú)毒，不易燃燒，價(jià)廉。第三十

23、七張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月超臨界萃取優(yōu)點(diǎn)：節(jié)能，可使用生理惰性溶劑在低溫下分離組分，有利于生物材料活性的保持，原理：在某一溫度和壓力時(shí)，氣體和液體的物理特性趨于相同，兩相變?yōu)橐幌?，此時(shí)就稱為臨界點(diǎn)。物質(zhì)的臨界點(diǎn)常數(shù)包括：臨界溫度、臨界壓力和臨界密度。對(duì)于CO2而言，分別為31.1、7.3 Mpa和0.47 g/mL。當(dāng)溫度和壓力高于上述值時(shí)，物質(zhì)處于液體和氣體的中間狀態(tài)，在這種狀態(tài)下的流體稱為超臨界流體。超臨界流體最常用的萃取劑是CO2。第三十八張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月超臨界流體的特性：它們的物理特性和傳質(zhì)特性介于液體和氣體之間，適于作為萃取溶劑。超臨界流體具有

24、與液體同樣的凝集力，溶解力。超臨界流體的密度比氣體大得多，與液體較為接近，因此超臨界流體萃取具有很高的萃取速度。隨著溫度和壓力的連續(xù)變化，超臨界流體對(duì)物質(zhì)的萃取具有選擇性。萃取后易分離，其擴(kuò)散系數(shù)接近于氣體，是通常液體的近百倍。超臨界流體的粘度大大低于液體的粘度，有利于物質(zhì)的擴(kuò)散，節(jié)能效果明顯。超臨界流體的萃取過(guò)程：分為萃取階段和分離階段。第三十九張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、提取效率 任何提取的提取效率都不可能達(dá)到100%，無(wú)論采用什么提取方法，在生物材料中總要?dú)埩舨糠帜康奈?，殘留量的多少取決于所選擇的溶劑系統(tǒng)的種類(lèi)、用量、提取次數(shù)及操作條件，它們的數(shù)量關(guān)系可以“殘留量公式”表

25、示如下： 式中，X0為目的物總量, g； K為目的物在固相/液相的分配系數(shù)； L為溶劑體積, ml ； W為生物材料重量,g； n為提取次數(shù)。第四十張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月由上式可見(jiàn)：1. 對(duì)于所選的溶劑系統(tǒng)而言，目的物在材料中的分配系數(shù)愈大，提取后的殘留物質(zhì)就愈多。2. 所用的溶劑愈多，殘留量愈少。3. 提取次數(shù)愈多，殘留量愈少。 實(shí)際工作中，溶劑的用量與提取次數(shù)有一定的限制，一般生產(chǎn)上多用2-3次提取，溶劑用量為生物材料的2-5倍。第四十一張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、影響提取效率的因素1. 溫度 大多數(shù)不耐熱的生物活性物質(zhì)一般在0-10進(jìn)行提取。某些較耐熱的

26、生化成分，如多糖類(lèi)，可于5090加熱提取。2. 酸堿度 多數(shù)生化物質(zhì)在中性條件下較穩(wěn)定，所以提取用的溶劑系統(tǒng)一般pH值控制在4-9范圍內(nèi)，并且注意避免在目的物的等電點(diǎn)附近進(jìn)行提取。第四十二張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3. 鹽濃度 鹽離子的存在能減弱生物分子間離子鍵及氫鍵的作用力，稀鹽溶液對(duì)蛋白質(zhì)等生物大分子有助溶作用。鹽溶：一些不溶于純水的球蛋白在稀鹽中能增加溶解度，這是由于鹽離子作用于生物大分子表面，增加了表面電荷，使之極性增加，水合作用增強(qiáng)，促使形成穩(wěn)定的雙電層，此現(xiàn)象稱為“鹽溶”作用。常用的稀鹽提取液： NaCl溶液(0.1-0.15 mol/L)； 磷酸鹽緩沖液（0.02-

27、0.05 mol/L)； 焦磷酸鈉緩沖液（0.02-0.05 mol/L)； 醋酸鹽緩沖液（0.10-0.15 mol/L)； 檸檬酸緩沖液（0.02-0.05 mol/L)。第四十三張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 四、提取方法的選擇關(guān)鍵：針對(duì)生物材料和目的物的性質(zhì)選擇合適的溶劑系統(tǒng)與提取條件。重點(diǎn)了解目的物與主要雜質(zhì)在溶解度方面的差異以及它們的穩(wěn)定性。在提取過(guò)程中，盡量增加目的物的溶出度，盡可能減少雜質(zhì)的溶出度，同時(shí)重視生物材料及目的物在提取過(guò)程中的活性變化。第四十四張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月活性物質(zhì)的保護(hù)措施1. 采用緩沖系統(tǒng) 2. 添加保護(hù)劑防止活性基團(tuán)受破壞3.

28、 抑制水解酶的作用4.其他保護(hù)措施 避免紫外光、強(qiáng)烈攪拌、過(guò)酸、過(guò)堿或高溫第四十五張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四節(jié)生化物質(zhì)的分離純化方法一、 生物制藥中分離、制備方法的特點(diǎn)1.生物材料組成復(fù)雜無(wú)固定操作方法可循；2.含量極微分離操作步驟多，不易獲得高收率；3.活性成分離開(kāi)生物體后，易變性，破壞分離進(jìn)程必須十分小心；4.分離幾乎都在溶液中進(jìn)行按經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行，嚴(yán)格控制；5.分離多采用溫和的“多階式”方式進(jìn)行，即“逐級(jí)分離”。操作時(shí)間長(zhǎng)，手續(xù)繁瑣。6. 生物產(chǎn)品最后均一性的評(píng)估，要采用多種方法。 第四十六張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、生物制藥中分離制備方法的基本原理1. 根據(jù)

29、分子形狀和大小不同進(jìn)行分離，如差速離心、超離心、膜分離、超濾、凝膠過(guò)濾；2.根據(jù)分子電離性質(zhì)（帶電性）的差異，如離子交換、電泳、等電聚焦；3. 根據(jù)分子極性大小及溶解度不同，如溶劑提取法、逆流分配、分配層析、鹽析、等電點(diǎn)沉淀、有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀；4.根據(jù)物質(zhì)吸附性質(zhì)的不同，如選擇性吸附與吸附層析；5.根據(jù)配體特異性，如親和層析。第四十七張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、生物制藥中常用的分離純化方法1. 鹽析法； 2.有機(jī)溶劑沉淀法； 3. 等電點(diǎn)沉淀法； 4.膜分離法； 5.離子交換層析； 6. 凝膠層析； 7. 親和層析。第四十八張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、鹽析法 利

30、用不同的蛋白質(zhì)在高濃度鹽溶液中，溶解度不同程度的降低來(lái)進(jìn)行分離純化。在低鹽濃度下，溶解度隨著鹽濃度升高而增加，稱鹽溶作用；當(dāng)鹽濃度不斷升高時(shí)，不同蛋白質(zhì)的溶解度又以不同程度下降并先后析出沉淀，稱鹽析作用。 優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備和條件要求低，安全應(yīng)用范圍廣泛。在高鹽情況下，蛋白質(zhì)不易發(fā)生變化，一般在室溫下操作。 缺點(diǎn)：分級(jí)分離能力不高。 常用的中性鹽：硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉。 第四十九張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月鹽析時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題： （1）鹽飽和度：由于蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)不同，鹽析要求的飽和度也不同。要按工藝要求，正確計(jì)算飽和度。 （2）pH 值的選擇：蛋白質(zhì)在pI時(shí)的溶解

31、度最小。因此，進(jìn)行鹽析時(shí)的pH，要選擇在被分離蛋白質(zhì)的pI附近。 （3）蛋白質(zhì)濃度：在相同條件下，蛋白質(zhì)濃度越大越易沉淀，使用鹽的飽和度極限也愈低。蛋白質(zhì)濃度愈高，其他蛋白質(zhì)共沉作用也愈強(qiáng)，這是不希望的。選擇適當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)濃度，可避免共沉的干擾。第五十張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 （4）溫度：一般在室溫下進(jìn)行，濃鹽對(duì)蛋白質(zhì)有保護(hù)作用。但對(duì)溫度敏感的，要在低溫下進(jìn)行。 常在0-4 范圍內(nèi)迅速操作。如尿激酶。 （5）鹽析沉淀物的脫鹽：鹽析的沉淀分離后，經(jīng)脫鹽才能獲得純品。最常用的脫鹽方法是透析，時(shí)間一般較長(zhǎng)，應(yīng)常換透析液，注意防止污染。第五十一張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 2

32、、有機(jī)溶劑沉淀法 利用不同蛋白質(zhì)在不同濃度的有機(jī)溶劑中的溶解度差異而分離目的蛋白質(zhì)的方法。蛋白質(zhì)的沉淀與溶解，與溶劑的介電常數(shù)有關(guān)。降低溶液的介電常數(shù)，使其溶解度變小，同時(shí)，還破壞蛋白質(zhì)的水化膜而使蛋白質(zhì)沉淀析出。 第五十二張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月幾種溶劑的介電常數(shù)溶劑名稱 20 時(shí)的介電常數(shù) 溶劑名稱 20 時(shí)的介電常數(shù) 乙醚 4.33 甲醇 33 丙酮 21.4 水 80 乙醇 24 2.5 mol/L甘氨酸水溶液 137介電常數(shù)與靜電力的關(guān)系： F=Q1Q2/Kr2 式中： K介電常數(shù)。指帶相反電荷的微粒之間的靜電引力。 F相距為r的2個(gè)帶電量分別為Q1、Q2點(diǎn)電荷相互作

33、用的靜電引力。經(jīng)驗(yàn)：如30-40%乙醇沉淀的物質(zhì)，改用丙酮時(shí)，其體積分?jǐn)?shù)可減少10%左右。即可用 2030%的丙酮； 而70- 80%乙醇沉淀的物質(zhì)，可用5060%的丙酮即可。注：水有較高的介電常數(shù)，具有很好的溶劑性能，是一種廣譜溶劑。有機(jī)溶劑法比鹽析法分辨力強(qiáng)，沉淀也好過(guò)濾，易干燥，但對(duì)有些生物活性物質(zhì)能引起失活和變性。應(yīng)用時(shí)還要注意揮發(fā)和火災(zāi)等。第五十三張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月有機(jī)沉淀法應(yīng)注意的問(wèn)題： （1）控制工藝過(guò)程的溫度：整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)在低溫下進(jìn)行，而且最好是同一溫度。 （2）防止溶劑局部濃度過(guò)高：加入有機(jī)溶劑時(shí)攪拌要均勻，速度要適當(dāng)，避免局部濃度過(guò)高，引起沉淀物的破

34、壞、變性或失活。 （3）及時(shí)處理沉淀物：沉淀物經(jīng)過(guò)濾或離心后，要立即用水或緩沖液溶解，降低有機(jī)溶劑的濃度。 （4）pH的選擇：在待沉淀蛋白質(zhì)的pI附近。 （5）有機(jī)溶劑是酶和蛋白質(zhì)的變性因素，尤其是對(duì)敏感酶類(lèi)。第五十四張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3、等電點(diǎn)沉淀法 利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)的溶解度最低，而各種蛋白質(zhì)又具有不同的等電點(diǎn)的特性進(jìn)行分離的工藝過(guò)程。 由于各種蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)，仍有一定的溶解度而沉淀不完全，多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)又都十分接近，所以單獨(dú)使用效果不理想，分辨力差，多用于提取后除雜蛋白。實(shí)際生產(chǎn)中常與有機(jī)溶劑沉淀法、鹽析法聯(lián)合使用。第五十五張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022

35、年6月4、膜分離法 膜分離技術(shù)包括超濾、反滲透析、電滲析、微孔過(guò)濾、氣體滲析和超精密過(guò)濾。 （1）超濾：根據(jù)溶質(zhì)分子和懸浮粒子是否通過(guò)多孔膜來(lái)進(jìn)行篩分。在液壓的驅(qū)動(dòng)下，能通過(guò)超濾膜的分離粒子的范圍，一般在0.0010.01m。即利用一種特制的膜對(duì)溶液中的各種溶質(zhì)分子進(jìn)行選擇性過(guò)濾。優(yōu)點(diǎn)：成本低、操作方便、條件溫和、能較好地保持藥物活性、回收率高。適用于酶和蛋白質(zhì)藥物的分離、濃縮、脫鹽、提純、除菌、除病毒和熱原。 第五十六張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）反滲透：以高分子透過(guò)性薄膜為分離介質(zhì)，在超過(guò)溶液滲透壓力的情況下，使溶液中的溶劑透過(guò)薄膜，同時(shí)使溶質(zhì)和不溶物阻截在膜前。這一過(guò)程類(lèi)

36、似于滲透,但方向相反，即溶劑從高濃度一側(cè)傳遞到濃度低的一側(cè)，故稱反滲透。 特點(diǎn)：能耗少，體積小，適應(yīng)大規(guī)模生產(chǎn)。（3）微孔濾膜：由高分子材料制成的薄膜過(guò)濾介質(zhì)，可以過(guò)濾一般介質(zhì)不能截留的細(xì)菌和微粒。膜的孔徑在0.2-10 m。（4）超精密過(guò)濾：以聚乙烯醇為主體的中空多孔濾膜，分級(jí)性能在超濾膜與微孔濾膜之間。為0.010.2 m。用于水的精制、循環(huán)水的凈化、除懸浮固體粒子以及糖液、酶液的精制。第五十七張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月5、離子交換層析 采用不溶性高分子化合物作為離子交換劑，分離純化各種生化物質(zhì)?；驹恚弘x子交換樹(shù)脂在水中能溶脹，溶脹后，其分子中的極性基團(tuán)（活性基團(tuán)），具有

37、可擴(kuò)散的離子，能與溶液中的離子起交換作用；非極性基團(tuán)作為樹(shù)脂的骨架，使樹(shù)脂不溶于水并具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，為離子交換的進(jìn)行及溶液和樹(shù)脂的分離創(chuàng)造了條件。離子交換層析包括吸附、吸收、穿透、擴(kuò)散、離子交換、離子親和力等物理化學(xué)過(guò)程。 第五十八張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月樹(shù)脂種類(lèi)和理化性能： （1）強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂：功能團(tuán)為磺酸基，pH一般沒(méi)有限制。 （2）弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂：功能團(tuán)為羧基、酚基。在酸性溶液中不發(fā)生交換，pH愈大交換能力愈強(qiáng)。 （3）強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂：功能團(tuán)為三甲基季胺基團(tuán)。pH沒(méi)有限制。 （4）弱堿性陰離子交換樹(shù)脂：功能團(tuán)為伯胺基、仲胺基、叔胺基。 pH愈低交換能力愈

38、大。第五十九張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 影響交換速度的因素： （1）樹(shù)脂顆粒的大?。侯w粒小，表面積大，能促進(jìn)內(nèi)部和外部擴(kuò)散。 （2）攪拌和流速：加快攪拌速度或加大液體流速，都能減少樹(shù)脂外液膜的厚度，從而使液相擴(kuò)散速度增加。 （3）離子濃度：交換速度隨離子濃度的上升而增加，達(dá)到一定濃度后交換速度不再升高。 （4）離子的水化半徑：水化半徑小的易被吸附。 （5）樹(shù)脂酸堿性的強(qiáng)弱和溶液的pH： （6）交聯(lián)度大小：交聯(lián)度愈小，樹(shù)脂愈易膨脹，交換速度愈快。但交聯(lián)度小的樹(shù)脂選擇性較差。 （7）有機(jī)溶劑的影響：當(dāng)有有機(jī)溶劑存在時(shí)，會(huì)降低樹(shù)脂對(duì)有機(jī)離子的選擇性，而容易吸附無(wú)機(jī)離子。 第六十張，PP

39、T共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月6、凝膠層析 指化合物隨流動(dòng)相流經(jīng)裝有凝膠的固定相的層析柱時(shí)，因其各種物質(zhì)分子大小不同而被分離的技術(shù)。又稱凝膠過(guò)濾、凝膠滲透過(guò)濾、分子篩過(guò)濾、阻滯擴(kuò)散層析、排阻層析。 優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，分離效果好，回收率高，分離條件緩和，不使活性物質(zhì)失活變性，凝膠可重復(fù)使用，無(wú)需再生處理。 缺點(diǎn)：分離速度慢。 廣泛用于分離氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶及多糖等藥物。第六十一張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月幾種常用的凝膠： （1）葡聚糖凝膠：基本骨架是1-6糖苷鍵。由葡聚糖和甘油以醚橋形式交聯(lián)而成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。最著名的商品為Sephadex葡聚糖凝膠，珠狀顆粒物，化學(xué)性質(zhì)

40、穩(wěn)定，不溶于水、弱酸、堿和鹽溶液。低溫時(shí)，在0.1 mol/L鹽酸中保持1-2 h不改變性質(zhì)；室溫時(shí)，在 0.01 mol/L鹽酸中放置半年也不改變；在0.25 mol/L的氫氧化鈉中，60 兩個(gè)月沒(méi)有發(fā)改變。可在120 加熱30 min滅菌而不破壞，但高于 120 即變黃。濕狀貯存易發(fā)霉，若長(zhǎng)期不用，需加防腐劑。 第六十二張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）聚丙烯酰胺凝膠：由碳-碳骨架構(gòu)成。完全為惰性。穩(wěn)定性比葡聚糖凝膠好，洗脫時(shí)不會(huì)有凝膠物質(zhì)下來(lái)。缺點(diǎn)：不耐酸。遇酸時(shí)酰胺鍵會(huì)水解為羧基，使凝膠帶有一定的離子交換基團(tuán)。（3）瓊脂糖凝膠：天然凝膠，不是共價(jià)交聯(lián)，是以氫鍵交聯(lián)?？障抖纫?/p>

41、契紙?zhí)堑臐舛葋?lái)改變，化學(xué)穩(wěn)定性不如葡聚糖凝膠。沒(méi)有干凝膠，必須在溶脹狀態(tài)保存，遇脫水劑、冷凍和一些有機(jī)溶劑即破壞，丙酮和乙醇對(duì)它無(wú)影響。在pH 4.5-9,溫度0-40 穩(wěn)定。對(duì)硼酸有吸附，不能用硼酸緩沖液。能分離幾萬(wàn)到幾千萬(wàn)相對(duì)分子質(zhì)量的物質(zhì)，彌補(bǔ)了葡聚糖和聚丙烯酰胺凝膠的不足。瑞典商品名Sepharose，美國(guó)稱Bio-Gel A,英國(guó)稱Sagavac. (4) 疏水性凝膠：常用的為聚甲基丙烯酸酯（Polymethacrylate）凝膠、聚苯乙烯凝膠（如Styrogel , Bio-Beads-S）第六十三張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月7、親和層析 生物活性物質(zhì)都有親和作用，如酶

42、與底物、激素與受體、核酸的互補(bǔ)鏈間，多糖與蛋白質(zhì)復(fù)合體。親和層析是利用生物大分子的特異親和力而設(shè)計(jì)的層析技術(shù)。可逆結(jié)合的特異性物質(zhì)稱為配基，與配基結(jié)合的層析介質(zhì)稱為載體。 親和層析能從粗提液中，通過(guò)一次簡(jiǎn)便處理，便可得到高純度的活性物質(zhì)，既可分離一些生物材料中含量極微的物質(zhì)，又能分離一些性質(zhì)十分相似的物質(zhì)。優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備要求不高，操作簡(jiǎn)便，適用范圍廣，特異性強(qiáng)，分離速度快，效果好，條件溫和。缺點(diǎn)：通用性較差，洗脫條件要求苛刻。 第六十四張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月幾種常用的載體： （1）纖維素：自然界中數(shù)量最大的大分子生物材料，取材十分方便。但由于其結(jié)構(gòu)緊密、均一性差，不利于大分子的滲

43、入?；罨蟪в须姾?，非特異性吸附較強(qiáng)，加上空間位阻等原因，其應(yīng)用不如凝膠載體廣泛。目前主要用于分離與核酸有關(guān)的物質(zhì)。如用寡聚脫氧胸腺核苷酸纖維素作固定相分離細(xì)胞提取液中的 mRNA.市售商品有：無(wú)定型微纖維、微晶纖維素、珠狀纖維素。第六十五張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）瓊脂糖凝膠：用于親和層析的主要為交聯(lián)珠狀凝膠。其瓊脂糖的質(zhì)量濃度為20 g/L(2%)、40 g/L(4%)、60 g/L(6%)幾種，相應(yīng)的商品稱為Sepharose 2B、4B、6B(Pharmacia)和Ultrogels A-2,A-4,A-6)。這類(lèi)載體能使吸附物質(zhì)保持活性，能迅速活化并接上各種功能基

44、團(tuán)，結(jié)構(gòu)疏松孔徑大，流速快。（3）葡聚糖凝膠：與瓊脂糖凝膠相比孔徑太小，特別是經(jīng)配基偶聯(lián)后，凝膠膨脹度會(huì)進(jìn)一步變小，所以應(yīng)用受到限制。（4）聚丙烯酰胺凝膠：碳-碳骨架，有丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成，具有網(wǎng)狀三維空間結(jié)構(gòu)。商品名為Biogel P。 注意避免接觸強(qiáng)氧化劑，配基偶聯(lián)后會(huì)使它的網(wǎng)格縮小，在一定程度上限制了它的應(yīng)用。 第六十六張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（5）多孔玻璃珠：化學(xué)和物理穩(wěn)定性好，機(jī)械強(qiáng)度高，不但能抵御酶及微生物的作用，還能耐受高溫滅菌和較劇烈的反應(yīng)條件。缺點(diǎn)：親水性不強(qiáng)，對(duì)蛋白質(zhì)尤其是堿性蛋白質(zhì)有非特異性吸附，而且可供連接的化學(xué)活性基團(tuán)也少。改良方法：為了

45、克服其缺點(diǎn)，市售Bio-Glass的商品都已事先連接了氨烷基（烷基胺）。用葡聚糖包被玻璃珠，則可改善其親水性，并增加化學(xué)活性基團(tuán)。用抗原涂布的玻璃珠已成功地分離了免疫淋巴細(xì)胞，在DNA連接的玻璃珠上純化了大腸桿菌的DNA和RNA聚合酶。 第六十七張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（6）其他載體：由聚丙烯酰胺和瓊脂糖混合組成的載體，商品名為Ultrogels ACA。它的特點(diǎn)是載體上既有羥基又有酰胺基，并且都能與配基單獨(dú)作用。但不能接觸強(qiáng)堿，以免酰胺水解，使用溫度不超過(guò)40 oC。 在丙烯酰胺和瓊脂糖的混合膠中加入7%的四氧化三鐵，則可制得一種稱為磁性膠（Magnogels ACA44）的載體。當(dāng)懸浮液中含有不均勻粒子時(shí)，依靠磁性能將載體與其他粒子分離。磁性膠載體常用于酶的免疫測(cè)定、熒光免疫測(cè)定、放射免疫測(cè)定、免疫吸收劑和細(xì)胞分離等的微量測(cè)定和制備。 第六十八張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月影響吸附親和力的幾個(gè)因素（吳梧桐P284）： （1）配基濃度； （2）空間障礙； （3）配基與載體的結(jié)合位點(diǎn)； （4）載體的孔徑； （5）微環(huán)境（化學(xué)因素），包括載體及“手臂”的電性、極性、次級(jí)鍵對(duì)配基親和力的影響。第六十九張，PPT共八十頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6