實(shí)驗(yàn)必背知識(shí)

1、海門實(shí)驗(yàn)學(xué)校2013屆高三 查漏補(bǔ)缺 回歸基礎(chǔ)- PAGE 9 -實(shí)驗(yàn)必背知識(shí)一、檢測(cè)生物組織中的還原糖、脂肪和蛋白質(zhì)1、實(shí)驗(yàn)原理：還原糖與斐林試劑，水浴加熱，會(huì)生成磚紅色沉淀。脂肪可以被蘇丹 = 3 * ROMAN 染液染成橘黃色，或被蘇丹 = 4 * ROMAN IV染液染成紅色。蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。2、實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)：斐林試劑（甲液：0.1g/mlNaOH，乙液：0.05g/ml CuSO4）混合使用 雙縮脲試劑（A液：0.1g/mlNaOH ，B液：0.01g/ml CuSO4）分開使用 還原糖是鑒定需要水浴加熱 脂肪的鑒定需要顯微鏡3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其分析：還原糖的鑒定：結(jié)果：

2、有磚紅色沉淀； 分析：組織樣液中有還原糖脂肪的鑒定：結(jié)果：有橘黃色或紅色；分析：花生組織中有脂肪蛋白質(zhì)的鑒定：結(jié)果：溶液呈紫色； 分析：組織樣液中有蛋白質(zhì)二、觀察植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離和復(fù)原1、實(shí)驗(yàn)原理：原生質(zhì)層相當(dāng)于一層半透膜，當(dāng)原生質(zhì)層兩側(cè)的液體具有濃度差時(shí)，細(xì)胞就會(huì)發(fā)生滲透作用失水或吸水，細(xì)胞壁的伸縮性比原生質(zhì)層的伸縮性小。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其分析：結(jié)果：質(zhì)壁分離（液泡變小，顏色變深）； 分析：細(xì)胞液濃度外界溶液濃度 質(zhì)壁分離復(fù)原（液泡變大，顏色變淺）：分析：細(xì)胞液濃度外界溶液濃度 質(zhì)壁分離不能復(fù)原； 分析：外界溶液濃度太高，細(xì)胞已經(jīng)死亡三、探究影響酶活性的因素1、實(shí)驗(yàn)原理：溫度或pH等能夠影響

3、酶的催化活性，在一定范圍內(nèi)，隨著溫度或pH的升高酶活性升高；越過這一范圍酶活性下降，甚至失活。2、方法步驟 = 1 * ROMAN I探究溫度對(duì)酶活性的影響步驟項(xiàng)目試管1試管2試管31加入可溶性淀粉溶液2mL2mL2mL2放置在不同溫度環(huán)境下5分鐘0100603加入新配置的-淀粉酶溶液（已在相應(yīng)溫度下保溫一段時(shí)間）1mL1mL1mL4完成反應(yīng)5min5滴入碘液2滴2滴2滴觀察結(jié)果變藍(lán)變藍(lán)不變藍(lán)注： = 1 * GB3 實(shí)驗(yàn)室使用的-淀粉酶最適溫度為5070； = 2 * GB3 由于H2O2不穩(wěn)定，因此探究溫度對(duì)酶活性影響，不選擇H2O2作為反應(yīng)物。由于斐林試劑要水浴加熱，所以探究T對(duì)酶活性影

4、響時(shí)，用碘液作為鑒定試劑。為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，酶和反應(yīng)底物分別在相應(yīng)溫度下保溫一段時(shí)間，再混合反應(yīng)。 = 2 * ROMAN II探究pH對(duì)酶活性的影響步驟項(xiàng)目試管1試管2試管31加入過氧化氫溶液2mL2mL2mL2加入蒸餾水1mL-3加入鹽酸-1mL-4加入NaOH溶液-1mL5滴加肝臟研磨液2滴2滴2滴637水浴5min5min5min7檢驗(yàn)放入帶火星的木條不能夠復(fù)燃能夠復(fù)燃不能夠復(fù)燃試管內(nèi)氣泡產(chǎn)生量很少少很少3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其分析 (1)說明溫度過高和過低均不利于酶活性的發(fā)揮，在適宜溫度下酶的活性才最高(2)產(chǎn)生氣泡多的試管中酶活性越高。只有在適宜PH條件下酶的活性才最高注： = 1

5、* GB3 先加底物，再加酸或堿，最后加酶。四、葉綠體中色素的提取和分離1、實(shí)驗(yàn)原理：提取原理：色素能溶解在無水乙醇中，可用無水乙醇提取色素；分離原理：不同的色素在層析液中的溶解度不同，溶解度高的在濾紙上擴(kuò)散得快，反之則慢，達(dá)到將色素分離的目的。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：加入二氧化硅有助于研磨充分，加入碳酸鈣是防止研磨中色素被破壞。應(yīng)注意不能讓濾液細(xì)線觸及層析液，防止色素色素溶入層析液。（橙黃色） 最快（溶解度最大）（黃色）（藍(lán)綠色） 最寬（最多）（黃綠色） 最慢（溶解度最?。?、實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)：無水乙醇的用途是提?。ㄈ芙猓┤~綠體中的色素，層析液的的用途是分離葉綠體中的色素；石英砂的作用是為了研磨充分，碳

6、酸鈣的作用是防止研磨時(shí)葉綠體中的色素受到破壞；層析液不能沒及濾液線；濾液細(xì)線要細(xì)且直，而且干燥后要重復(fù)劃幾次；五、探究酵母菌細(xì)胞呼吸的方式1、實(shí)驗(yàn)原理： = 1 * GB3 酵母菌屬于兼性厭氧微生物，有氧時(shí)進(jìn)行有氧呼吸將葡萄糖徹底分解成二氧化碳和水，并釋放大量能量，無氧時(shí)進(jìn)行無氧呼吸將葡萄糖分解成酒精和二氧化碳，釋放較少的能量。 = 2 * GB3 CO2可使澄清的石灰水變渾濁，也可以使溴麝香草酚藍(lán)水溶液由藍(lán)變綠再變黃。根據(jù)石灰水混濁程度或溴麝香草酚藍(lán)水溶液變成黃色的時(shí)間長短，可以檢測(cè)酵母菌培養(yǎng)液中CO2的產(chǎn)生情況。 = 3 * GB3 橙色的重鉻酸鉀溶液，在酸性條件下可與乙醇發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，變

7、成灰綠色。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其分析：結(jié)果： = 1 * GB3 甲、乙兩裝置中石灰水都變渾濁，且甲中渾濁程度高且速度快；分析：酵母菌在有氧呼吸條件下產(chǎn)生的CO2比無氧呼吸條件下產(chǎn)生的多且快； = 2 * GB3 2號(hào)試管中溶液由橙色變成灰綠色，1號(hào)試管不變色；分析：酵母菌在無氧條件下分解葡萄糖產(chǎn)生酒精六、觀察植物細(xì)胞的有絲分裂1、實(shí)驗(yàn)原理： = 1 * GB2 高等植物的分生組織有絲分裂較旺盛。 = 2 * GB2 有絲分裂各個(gè)時(shí)期細(xì)胞內(nèi)染色體的形態(tài)和行為變化不同，可用高倍顯微鏡根據(jù)各個(gè)時(shí)期內(nèi)染色體的變化情況，識(shí)別該細(xì)胞處于哪個(gè)時(shí)期。 = 3 * GB2 細(xì)胞核內(nèi)的染色體易被堿性染料（如龍膽紫、醋

8、酸洋紅）染成深色。2、方法步驟：取材：取根尖2-3 解離液：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為為15%的鹽酸和體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精混合液（1：1）解離 目的：使組織中的細(xì)胞分離開 時(shí)間：3-5min 漂洗液：清水漂洗 目的：洗去解離液，便于染色 時(shí)間：10 min 染液：0.01g/mL或0.02g/mL的龍膽紫溶液或醋酸洋紅液染色 目的：使染色體（質(zhì)）著色 時(shí)間：3-5min 用鑷子將根尖弄碎，蓋上蓋玻片，復(fù)加一塊載玻片用拇指輕壓制片 目的：使細(xì)胞分散開來觀察 = 1 * ROMAN I低倍鏡觀察：找到分生區(qū)細(xì)胞，其特點(diǎn)是細(xì)胞呈正方形，排列緊密，有分裂細(xì)胞 = 2 * ROMAN II高倍鏡觀察：在低倍鏡觀察的基

9、礎(chǔ)上換高倍鏡，直到看清細(xì)胞的物象為止 = 3 * ROMAN III仔細(xì)觀察：先找中期，再找前期、后期、末期，最后找間期，注意染色體特點(diǎn) = 4 * ROMAN IV移動(dòng)觀察：慢慢移動(dòng)裝片，完整地觀察各個(gè)時(shí)期3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其分析：視野中看到的細(xì)胞90%95%處于間期，所觀察到的細(xì)胞都是死細(xì)胞七、調(diào)查人群中的遺傳病實(shí)驗(yàn)1、方法：抽樣調(diào)查法2、調(diào)查注意： 調(diào)查時(shí)選取群體中發(fā)病率較高的單基因遺傳?。t綠色盲、白化病、高度近視）調(diào)查的群體要足夠大（可先分組實(shí)施，再將數(shù)據(jù)匯總處理）。 根據(jù)匯總數(shù)據(jù)，計(jì)算每種遺傳病的發(fā)病率。 在人群中調(diào)查遺傳病的發(fā)病率，在家族中調(diào)查遺傳病的遺傳方式。八、培養(yǎng)液中酵母種群數(shù)

10、量的動(dòng)態(tài)變化1、實(shí)驗(yàn)原理：（1）用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)酵母菌，種群的增長受培養(yǎng)液的成分、空間、pH、溫度、有害代謝產(chǎn)物等因素的影響。 （2）在理想的無限環(huán)境中，酵母菌種群的增長呈“J”型曲線；在有限的環(huán)境下，酵母菌種群的增長呈“S”型曲線。（3）在含糖的液體培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一個(gè)封閉容器內(nèi)的酵母菌種群，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)可以測(cè)定封閉容器內(nèi)的酵母菌種群隨時(shí)間而發(fā)生的數(shù)量變化。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其分析：（1）根據(jù)表格平均值作出培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量7天中的變化曲線。（2）培養(yǎng)液酵母菌種群數(shù)量隨時(shí)間呈S型增長變化。3、實(shí)驗(yàn)討論a.從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)之前，建議你將試管輕輕震蕩幾次，這是

11、為什么？使酵母菌在試管里分布均勻。b.本探究實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置對(duì)照嗎？為什么？不需要。該實(shí)驗(yàn)在時(shí)間上形成前后對(duì)照。c.需要做重復(fù)實(shí)驗(yàn)嗎？需要，提高數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。d.如果一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)采取怎樣的措施？增加稀釋的倍數(shù)。e. 對(duì)于壓在小方格界限上的酵母菌，應(yīng)遵循“取上不取下，取左不取右”的原則計(jì)數(shù)。注：血球計(jì)數(shù)板在使用時(shí)，先將蓋玻片放在計(jì)數(shù)室上，用吸管吸取培養(yǎng)液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入。九、探究植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)扦插枝條生根的作用1、實(shí)驗(yàn)原理：植物插條經(jīng)植物生長調(diào)節(jié)劑處理后，對(duì)植物插條的生根情況有很大的影響，而且用不同濃度、不同時(shí)間處理其影響程度亦不同。其影響存在一個(gè)最適濃

12、度，在此濃度下植物插條的生根數(shù)量最多，生長最快。2、結(jié)果分析：（1）分析不同插條的生根情況。不能生出不定根：有可能是枝條上沒有芽、枝條倒插等。都能生出不定根：促進(jìn)扦插枝條生根是指刺激枝條的下端生出不定根，而不是刺激根生長。不同的枝條可能生出的不定根的數(shù)目多少不一樣，如枝條上芽多，則產(chǎn)生的生長素就多，就容易促使不定根的萌發(fā)。（2）分析與本實(shí)驗(yàn)相關(guān)的其他因素。溫度要一致。設(shè)置重復(fù)組。即每組不能少于3個(gè)枝條。設(shè)置對(duì)照組，清水空白對(duì)照；設(shè)置濃度不同的幾個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間進(jìn)行相互對(duì)照。注意：處理插條：枝條的形態(tài)學(xué)上端為平面，下端要削成斜面，這樣在扦插后可增加吸收水分的面積，促進(jìn)成活。每一枝條留3-4個(gè)芽，所選

13、枝條的芽數(shù)盡量一樣多。處理方法：1）浸泡法：把插條的基部浸泡在配制好的濃度較低溶液中，深約3cm，處理幾小時(shí)至一天。 2）沾蘸法：把插條基部在濃度較高的藥液中蘸一下（約5s），深約1.5cm即可。可先設(shè)計(jì)一組梯度比較大的預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行摸索，再在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)細(xì)致的實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)的單一變量是生長素類似物的濃度，因變量是不同濃度生長素類似物處理后枝條生根情況，如生根條數(shù)，最長與最短根的長度等每一枝條留3-4個(gè)芽，【有芽是產(chǎn)生生長素，但你使用的是枝條，首先要確保它是活的，可以繼續(xù)生長】所選枝條的芽數(shù)盡量一樣多【保證所帶芽自身提供的生長素含量相同，也是無關(guān)變量的一種】用顯微鏡觀察多種多樣的細(xì)胞 注意：先

14、用低倍鏡觀察，找到對(duì)象，移至中央（偏哪向哪移），再換用高倍鏡觀察。 使用低倍鏡時(shí)用粗準(zhǔn)焦螺旋，使用高倍鏡時(shí)用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。 使用低倍鏡時(shí)視野較亮，使用高倍鏡時(shí)視野較暗，可調(diào)節(jié)反光鏡和光圈。 十一、觀察細(xì)胞的減數(shù)分裂 注意：選用雄性的精巢或花粉，不選用雌性的卵巢（因?yàn)榧?xì)胞數(shù)量少，分裂不連續(xù)）選修一、果酒制作的原理1、所需菌種：酵母菌；其代謝類型：兼性厭氧型。2、菌種的生活特點(diǎn)（1）在有氧條件下，進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖； 酶反應(yīng)式：C6H12O6 + 6CO2 + 6H2O6CO2 + 12H2O + 能量。（2）在無氧條件下，進(jìn)行無氧呼吸。 酶反應(yīng)式：C6H12O6 2C2H5OH + 2CO2

15、+ 少量能量（3）發(fā)酵條件溫度：18-25；時(shí)間：10-12天。自然發(fā)酵的菌種來源：附著在葡萄皮上是野生酵母菌。在缺氧、呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都受到抑制。二、果醋制作的原理1、所需菌種：醋酸菌；其代謝類型：好氧型。2、菌種的生活特點(diǎn)（1）當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；（2）當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變成乙醛，再將乙醛變?yōu)榇姿帷７磻?yīng)簡(jiǎn)式：C2H5OH + O2CH3COOH + H2O（3）發(fā)酵條件溫度：30-35；時(shí)間：7-8天。3、果酒、果醋的制作流程挑選葡萄 沖洗 榨汁 酒精發(fā)酵 醋酸發(fā)酵 果酒 果醋4、酒精可用酸性重鉻酸鉀檢驗(yàn)，

16、出現(xiàn)灰綠色。注意：1、教材P4旁欄思考題2、為了提高果酒的品質(zhì)，更好地抑制其他微生物的生長，可以直接在果汁中加入人工培養(yǎng)的酵母菌。三、腐乳的制作1、所需菌種：多種微生物參與豆腐的發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，起主要作用的是毛霉，其代謝類型是好氧型，其是一種真菌。2、菌種的作用特點(diǎn)（原理）：產(chǎn)生蛋白酶將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；產(chǎn)生 脂肪酶將脂肪水解成甘油和脂肪酸。3、腐乳制作的實(shí)驗(yàn)流程讓豆腐長出毛霉 加鹽腌制 加鹵汁裝瓶 密封腌制注意：1、教材P7旁欄思考題2、腐乳的制作過程中，加鹽的作用是殺菌、調(diào)味、使豆腐析水成型。3、配制鹵湯時(shí)，加酒的作用是殺菌和調(diào)味。酒的含量控制在12

17、%左右。4、鹵湯中的香辛料有殺菌、調(diào)味的作用。5、可以通過味道、形狀和色澤等方面來評(píng)價(jià)腐乳的質(zhì)量。四、加酶洗衣粉及酶制劑的種類1、加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉。2、常用的酶制劑包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶，其中效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。五、酵母細(xì)胞的固定化（一）固定化細(xì)胞技術(shù)1、概念：固定化酶和固定化細(xì)胞是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)。2、方法：包括包埋法、物理吸附法和化學(xué)結(jié)合法。3、酶更適合采用物理吸附法和化學(xué)結(jié)合法固定化，因?yàn)槊阜肿犹?，容易從包埋材料中漏出。?xì)胞多采用包埋法固定化。（二）制備固定化酵母細(xì)胞1、酵母細(xì)胞的活化 配置物質(zhì)的量濃度為

18、0.05mol/L的CaCl2溶液配置海藻酸鈉溶液海藻酸鈉溶液與活化的酵母細(xì)胞混合固定化酵母細(xì)胞2、可通過觀察凝膠珠的顏色和形狀來評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果凝膠珠顏色過淺、呈白色，說明海藻酸鈉溶液濃度過低或酵母細(xì)胞太少；如果形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形，則說明海藻酸鈉濃度過高。3、比較類型優(yōu)點(diǎn)不足直接使用酶催化效率高、低耗能、低污染對(duì)環(huán)境條件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很難回收，不能再次利用；提高了生產(chǎn)成本；混合在產(chǎn)物中的酶會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量固定化酶既能與反應(yīng)物接觸，又容易與產(chǎn)物分離；還可以反復(fù)利用一種酶只能催化一種化學(xué)反應(yīng)固定化細(xì)胞成本低，操作更容易大分子反應(yīng)物不易與酶接近，反應(yīng)效率降低七、DNA的粗

19、提取與鑒定（一）提取DNA的方法1、思路：利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。2、原理（1）利用DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl2中溶解度不同，鹽濃度為 0.14mol/L時(shí)，DNA的溶解度最??；DNA不溶于酒精，而蛋白質(zhì)溶于酒精，利用這一原理，可以將 DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。（2）利用DNA的耐受性：蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但對(duì)DNA無影響；大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60-80的高溫，而DNA在80以上才會(huì)變性；洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)DNA無影響。（二）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)一利用雞血細(xì)胞提取DNA并鑒定方法步驟加入物質(zhì)目的1、制

20、備雞血細(xì)胞檸檬酸鈉防止血液凝固2、提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)蒸餾水使細(xì)胞吸水漲破3、溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA2mol/L的NaCl溶液溶解DNA4、析出含DNA的黏稠物蒸餾水降低DNA溶解度，使DNA析出5、濾取含DNA的黏稠物去除溶解在鹽溶液中的雜質(zhì)6、將DNA的黏稠物再溶解2mol/L的NaCl溶液再次溶解DNA7、過濾含DNA的NaCl溶液去除不溶解在鹽溶液中的雜質(zhì)8、提取含雜質(zhì)較少的DNA加同體積95%的冷酒精提純DNA9、DNA的鑒定A：（1）向試管中加入2mol/L的NaCl溶液5ml （2）加入DNA （3）加入二苯胺4mlB：（1）向試管中加入2mol/L的NaCl溶液5ml （2）加入二苯胺4ml沸水浴加熱5分鐘DNA在水浴加熱的情況下，與二苯胺反應(yīng)呈藍(lán)色（三）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)二利用新鮮菜花提取DNA并鑒定ADNA的粗提?。?）準(zhǔn)備材料：將新鮮菜花和體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室，至少24小時(shí)。（2）取材：稱取30 g菜花，去梗取花，切碎。（3）研磨：將碎菜花放入研缽中，倒入10 mL研磨液（加洗滌劑和NaCl2），充分研磨10 min。（4）過濾：在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液濾入燒杯中，在4冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。（5）加冷酒精：將