中藥鑒定DNA分子標記在中藥品種鑒定中的運用

1、DNA分子標識在中藥品種判定中利用指導(dǎo)老師：謝冬梅老師小組組員：趙維波 劉萬冬 朱婷 周孟凡 周悅 4月14日第1頁匯報內(nèi)容1、研究背景2、DNA分子標識介紹3、DNA分子標識技術(shù)方法介紹4、在中藥品種判定中利用5、小結(jié)6、展望第2頁1 研究背景中藥準確判定包括到人民生命安全和切身利益。傳統(tǒng)判定方法存在著不一樣程度不足，近年來，伴隨分子生物學技術(shù)進步，DNA 分子標識新技術(shù)不停涌現(xiàn)，DNA 分子標識技術(shù)憑借著特異性強、準確、快速、微量、可靠等特點，在中藥品種判定中展現(xiàn)了遼闊應(yīng)用前景。第3頁2 DNA分子標識介紹分子標識定義：廣義分子標識是指可遺傳并可檢測DNA序列或蛋白質(zhì)。狹義分子標識是指能反

2、應(yīng)生物個體或種群間基因組中某種差異特異性DNA片段。分子標識類別：依據(jù)目標基因所在細胞器不一樣可分為核DNA 標識、線粒體DNA標識和葉綠體DNA標識。適合用于動物起源進化、親緣關(guān)系、遺傳變異、物種判別等研究線粒體DNA適合用于高等植物親緣關(guān)系、物種判別等研究核DNA與葉綠體DNA第4頁3 DNA分子標識技術(shù)定義：DNA分子標識技術(shù)， 也稱DNA分子診療技術(shù)，是指經(jīng)過直接分析遺傳物質(zhì)多態(tài)性來診療生物內(nèi)在基因排布規(guī)律及其外在性狀表現(xiàn)規(guī)律技術(shù)。第5頁DNA分子標識技術(shù)特點不受組織類別、發(fā)育階段等影響。取材不受限制。不受環(huán)境影響。因為環(huán)境只影響基因表示轉(zhuǎn)錄與翻譯，而不影響基因結(jié)構(gòu)。數(shù)量多且多態(tài)性高。

3、含有共顯性，能夠判別純種和雜合基因。簡單、快速、易于自動化。第6頁慣用DNA分標識技術(shù)分類基本原理技術(shù)名稱特點適用范圍以電泳技術(shù)和 分子雜交技術(shù)為關(guān)鍵DNA 標識技術(shù)RFLP 分子標識技術(shù) 具極大豐富性、共顯性、具穩(wěn)定性、分析簡單等研究屬種, 甚至品種親緣關(guān)系、系統(tǒng)發(fā)育與演化以電泳技術(shù)和PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)DNA 分子標識技術(shù)RAPD 分子標識技術(shù)含有廣泛性和通用性、簡便易行研究種、亞種,判別栽培種與野生種AFLP 標識技術(shù)多態(tài)性強,穩(wěn)定性強,重復(fù)性高重復(fù)次序標識技術(shù)信息量大, 結(jié)果重復(fù)性好DNA 序列直接測定法DNA 序列直接測定技術(shù)簡便快速研究植物分類判別和親緣關(guān)系第7頁DNA分子標識技術(shù)原

4、理以RAPD為例簡明介紹DNA分子標識技術(shù)原理、操作過程及結(jié)果分析。原理：RAPD是建立在PCR基礎(chǔ)之上一個可對整個未知序列基因組進行多態(tài)性分析分子技術(shù)。其以基因組DNA為模板，以單個人工合成隨機多態(tài)核苷酸序列為引物，在熱穩(wěn)定DNA聚合酶作用下，進行PCR擴增。擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖或聚丙烯酰胺電泳分離、溴化乙錠染色后，在紫外透視儀上檢測多態(tài)性。擴增產(chǎn)物多態(tài)性反應(yīng)了基因組多態(tài)性。第8頁操作過程第9頁結(jié)果分析DNA的提取模板DNA濃度和質(zhì)量的檢測電泳檢測用EB處理、觀察、拍照系統(tǒng)分析第10頁DNA分子標識技術(shù)利用情況方法：以慣用中藥材名稱和分子標識技術(shù)為關(guān)鍵詞，搜索CNKI文庫中漢字文件，并進行分類統(tǒng)

5、計。統(tǒng)計結(jié)果技術(shù)方法PCR擴增、測序RAPD-PCR擴增位點特異性PCRISSR-PCR其它總和篇數(shù)7817963116第11頁以PCR擴增、測序為判別方法部分慣用中藥分類藥材藥用部位藥材名稱藥材或飲片起源標識序列對應(yīng)判別藥材植物類植物類植物類植物類植物類植物類植物類植物類植物類植物類菌 類動物類動物類動物類動物類根基根莖類根及根莖類根及根莖類莖木類莖木類葉類皮類花類全草類果實及種子類巴戟天柴胡大黃雞血藤川木通石韋牡丹皮西紅花石斛地膚子靈芝烏鞘蛇阿膠海馬羚羊角巴戟天野生柴胡藥用大黃密花豆小木通、繡球藤石韋牡丹番紅花束花石斛地膚血芝烏鞘蛇驢皮小海馬羚羊角ITS標識序列ITS標識序列SRAP標識序

6、列ITS標識序列ITS標識序列葉綠體序列ITS標識序列ITS標識序列ITS標識序列ITS2標識序列18S RNA序列12S RNA序列12S RNA序列12S RNA序列特異性引物羊角藤、虎刺栽培柴胡掌葉大黃、唐古拉大黃香花崖豆藤、大血藤女萎、短尾鐵線蓮廬山石韋川赤芍、芍藥番紫花、菊花流蘇石斛荊芥、草木犀其它靈芝紅點錦蛇牛皮、馬皮三斑海馬山羊角第12頁標識選擇標識選擇是篩選取于中藥分子判別DNA標識前提。慣用于植物判別基因標識序列有：rbcL、ITS、matK、psbA-trnH、trnL-trnF 動物判別片段主要用COI基因片段。第13頁品種判定中標識序列應(yīng)用情況第14頁 4 在中藥品種判

7、定中利用在中藥種類分布在植物藥中分布第15頁在中藥品種判定中利用一、判定近緣中藥品種 相關(guān)學者對美洲東部西洋參、三葉人參進行基因分析后，發(fā)覺西洋參加東亞種人參、竹節(jié)參、三七含有更近親緣關(guān)系。二、判定動物類中藥品種 DNA標識技術(shù)不但能對動物藥整體、破碎組織進行準確判定，還能對動物粉末、體液、分泌物、排泄物入藥中藥或中藥制劑進行有效真?zhèn)闻卸ā?王建云利用PCR技術(shù)準確判別雞內(nèi)金和鴨內(nèi)金。第16頁在中藥品種判定中利用三、判定藥材地道性道地藥材與非道地藥材物種起源、形態(tài)、顯微及化學成份等特征上含有高度相同性,因而不易判定，而DNA分子標識技術(shù)從群居和分子水平上說明藥材地道性。陳永久利用RAPD技術(shù)研

8、究冬蟲夏草在不一樣群體間遺傳分化現(xiàn)象，同一地域樣品差異甚微而不一樣地域樣品差異甚大。第17頁在中藥品種判定中利用四、判定中藥野生與栽培品種 栽培品種在長久人工選擇與馴化作用，其生物性狀、品質(zhì)發(fā)生一定改變。而市場上以栽培品充當野生品現(xiàn)象屢見不鮮，僅靠傳統(tǒng)判別極難區(qū)分。DNA分子標識技術(shù)則展示其良好利用前景。馬小等用RAPD、AFLP標識對園參加山參研究發(fā)覺，該技術(shù)可用于栽培品與野生品判定。第18頁5 小結(jié)現(xiàn)實狀況DNA分子遺傳標識技術(shù)在中藥判定及其相關(guān)研究方面含有獨到優(yōu)勢和遼闊應(yīng)用前景,但當前尚處于探索階段。各種DNA分子遺傳技術(shù)均存在一定不足,有待深入規(guī)范和完善。中藥分子判定試驗中問題目標基因真實性與DNA同源性DNA分子標識技術(shù)穩(wěn)定性分子生物研究成本等。第19