中藥鑒定DNA分子標(biāo)記在中藥品種鑒定中的運(yùn)用

1、DNA分子標(biāo)識(shí)在中藥品種判定中利用指導(dǎo)老師：謝冬梅老師小組組員：趙維波 劉萬(wàn)冬 朱婷 周孟凡 周悅 4月14日第1頁(yè)匯報(bào)內(nèi)容1、研究背景2、DNA分子標(biāo)識(shí)介紹3、DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)方法介紹4、在中藥品種判定中利用5、小結(jié)6、展望第2頁(yè)1 研究背景中藥準(zhǔn)確判定包括到人民生命安全和切身利益。傳統(tǒng)判定方法存在著不一樣程度不足，近年來(lái)，伴隨分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)步，DNA 分子標(biāo)識(shí)新技術(shù)不停涌現(xiàn)，DNA 分子標(biāo)識(shí)技術(shù)憑借著特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確、快速、微量、可靠等特點(diǎn)，在中藥品種判定中展現(xiàn)了遼闊應(yīng)用前景。第3頁(yè)2 DNA分子標(biāo)識(shí)介紹分子標(biāo)識(shí)定義：廣義分子標(biāo)識(shí)是指可遺傳并可檢測(cè)DNA序列或蛋白質(zhì)。狹義分子標(biāo)識(shí)是指能反

2、應(yīng)生物個(gè)體或種群間基因組中某種差異特異性DNA片段。分子標(biāo)識(shí)類(lèi)別：依據(jù)目標(biāo)基因所在細(xì)胞器不一樣可分為核DNA 標(biāo)識(shí)、線粒體DNA標(biāo)識(shí)和葉綠體DNA標(biāo)識(shí)。適合用于動(dòng)物起源進(jìn)化、親緣關(guān)系、遺傳變異、物種判別等研究線粒體DNA適合用于高等植物親緣關(guān)系、物種判別等研究核DNA與葉綠體DNA第4頁(yè)3 DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)定義：DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)， 也稱(chēng)DNA分子診療技術(shù)，是指經(jīng)過(guò)直接分析遺傳物質(zhì)多態(tài)性來(lái)診療生物內(nèi)在基因排布規(guī)律及其外在性狀表現(xiàn)規(guī)律技術(shù)。第5頁(yè)DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)特點(diǎn)不受組織類(lèi)別、發(fā)育階段等影響。取材不受限制。不受環(huán)境影響。因?yàn)榄h(huán)境只影響基因表示轉(zhuǎn)錄與翻譯，而不影響基因結(jié)構(gòu)。數(shù)量多且多態(tài)性高。

3、含有共顯性，能夠判別純種和雜合基因。簡(jiǎn)單、快速、易于自動(dòng)化。第6頁(yè)慣用DNA分標(biāo)識(shí)技術(shù)分類(lèi)基本原理技術(shù)名稱(chēng)特點(diǎn)適用范圍以電泳技術(shù)和 分子雜交技術(shù)為關(guān)鍵DNA 標(biāo)識(shí)技術(shù)RFLP 分子標(biāo)識(shí)技術(shù) 具極大豐富性、共顯性、具穩(wěn)定性、分析簡(jiǎn)單等研究屬種, 甚至品種親緣關(guān)系、系統(tǒng)發(fā)育與演化以電泳技術(shù)和PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)DNA 分子標(biāo)識(shí)技術(shù)RAPD 分子標(biāo)識(shí)技術(shù)含有廣泛性和通用性、簡(jiǎn)便易行研究種、亞種,判別栽培種與野生種AFLP 標(biāo)識(shí)技術(shù)多態(tài)性強(qiáng),穩(wěn)定性強(qiáng),重復(fù)性高重復(fù)次序標(biāo)識(shí)技術(shù)信息量大, 結(jié)果重復(fù)性好DNA 序列直接測(cè)定法DNA 序列直接測(cè)定技術(shù)簡(jiǎn)便快速研究植物分類(lèi)判別和親緣關(guān)系第7頁(yè)DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)原

4、理以RAPD為例簡(jiǎn)明介紹DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)原理、操作過(guò)程及結(jié)果分析。原理：RAPD是建立在PCR基礎(chǔ)之上一個(gè)可對(duì)整個(gè)未知序列基因組進(jìn)行多態(tài)性分析分子技術(shù)。其以基因組DNA為模板，以單個(gè)人工合成隨機(jī)多態(tài)核苷酸序列為引物，在熱穩(wěn)定DNA聚合酶作用下，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖或聚丙烯酰胺電泳分離、溴化乙錠染色后，在紫外透視儀上檢測(cè)多態(tài)性。擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)性反應(yīng)了基因組多態(tài)性。第8頁(yè)操作過(guò)程第9頁(yè)結(jié)果分析DNA的提取模板DNA濃度和質(zhì)量的檢測(cè)電泳檢測(cè)用EB處理、觀察、拍照系統(tǒng)分析第10頁(yè)DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)利用情況方法：以慣用中藥材名稱(chēng)和分子標(biāo)識(shí)技術(shù)為關(guān)鍵詞，搜索CNKI文庫(kù)中漢字文件，并進(jìn)行分類(lèi)統(tǒng)

5、計(jì)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果技術(shù)方法PCR擴(kuò)增、測(cè)序RAPD-PCR擴(kuò)增位點(diǎn)特異性PCRISSR-PCR其它總和篇數(shù)7817963116第11頁(yè)以PCR擴(kuò)增、測(cè)序?yàn)榕袆e方法部分慣用中藥分類(lèi)藥材藥用部位藥材名稱(chēng)藥材或飲片起源標(biāo)識(shí)序列對(duì)應(yīng)判別藥材植物類(lèi)植物類(lèi)植物類(lèi)植物類(lèi)植物類(lèi)植物類(lèi)植物類(lèi)植物類(lèi)植物類(lèi)植物類(lèi)菌 類(lèi)動(dòng)物類(lèi)動(dòng)物類(lèi)動(dòng)物類(lèi)動(dòng)物類(lèi)根基根莖類(lèi)根及根莖類(lèi)根及根莖類(lèi)莖木類(lèi)莖木類(lèi)葉類(lèi)皮類(lèi)花類(lèi)全草類(lèi)果實(shí)及種子類(lèi)巴戟天柴胡大黃雞血藤川木通石韋牡丹皮西紅花石斛地膚子靈芝烏鞘蛇阿膠海馬羚羊角巴戟天野生柴胡藥用大黃密花豆小木通、繡球藤石韋牡丹番紅花束花石斛地膚血芝烏鞘蛇驢皮小海馬羚羊角ITS標(biāo)識(shí)序列ITS標(biāo)識(shí)序列SRAP標(biāo)識(shí)序

6、列ITS標(biāo)識(shí)序列ITS標(biāo)識(shí)序列葉綠體序列ITS標(biāo)識(shí)序列ITS標(biāo)識(shí)序列ITS標(biāo)識(shí)序列ITS2標(biāo)識(shí)序列18S RNA序列12S RNA序列12S RNA序列12S RNA序列特異性引物羊角藤、虎刺栽培柴胡掌葉大黃、唐古拉大黃香花崖豆藤、大血藤女萎、短尾鐵線蓮廬山石韋川赤芍、芍藥番紫花、菊花流蘇石斛荊芥、草木犀其它靈芝紅點(diǎn)錦蛇牛皮、馬皮三斑海馬山羊角第12頁(yè)標(biāo)識(shí)選擇標(biāo)識(shí)選擇是篩選取于中藥分子判別DNA標(biāo)識(shí)前提。慣用于植物判別基因標(biāo)識(shí)序列有：rbcL、ITS、matK、psbA-trnH、trnL-trnF 動(dòng)物判別片段主要用COI基因片段。第13頁(yè)品種判定中標(biāo)識(shí)序列應(yīng)用情況第14頁(yè) 4 在中藥品種判

7、定中利用在中藥種類(lèi)分布在植物藥中分布第15頁(yè)在中藥品種判定中利用一、判定近緣中藥品種 相關(guān)學(xué)者對(duì)美洲東部西洋參、三葉人參進(jìn)行基因分析后，發(fā)覺(jué)西洋參加?xùn)|亞種人參、竹節(jié)參、三七含有更近親緣關(guān)系。二、判定動(dòng)物類(lèi)中藥品種 DNA標(biāo)識(shí)技術(shù)不但能對(duì)動(dòng)物藥整體、破碎組織進(jìn)行準(zhǔn)確判定，還能對(duì)動(dòng)物粉末、體液、分泌物、排泄物入藥中藥或中藥制劑進(jìn)行有效真?zhèn)闻卸ā?王建云利用PCR技術(shù)準(zhǔn)確判別雞內(nèi)金和鴨內(nèi)金。第16頁(yè)在中藥品種判定中利用三、判定藥材地道性道地藥材與非道地藥材物種起源、形態(tài)、顯微及化學(xué)成份等特征上含有高度相同性,因而不易判定，而DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)從群居和分子水平上說(shuō)明藥材地道性。陳永久利用RAPD技術(shù)研

8、究冬蟲(chóng)夏草在不一樣群體間遺傳分化現(xiàn)象，同一地域樣品差異甚微而不一樣地域樣品差異甚大。第17頁(yè)在中藥品種判定中利用四、判定中藥野生與栽培品種 栽培品種在長(zhǎng)久人工選擇與馴化作用，其生物性狀、品質(zhì)發(fā)生一定改變。而市場(chǎng)上以栽培品充當(dāng)野生品現(xiàn)象屢見(jiàn)不鮮，僅靠傳統(tǒng)判別極難區(qū)分。DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)則展示其良好利用前景。馬小等用RAPD、AFLP標(biāo)識(shí)對(duì)園參加山參研究發(fā)覺(jué)，該技術(shù)可用于栽培品與野生品判定。第18頁(yè)5 小結(jié)現(xiàn)實(shí)狀況DNA分子遺傳標(biāo)識(shí)技術(shù)在中藥判定及其相關(guān)研究方面含有獨(dú)到優(yōu)勢(shì)和遼闊應(yīng)用前景,但當(dāng)前尚處于探索階段。各種DNA分子遺傳技術(shù)均存在一定不足,有待深入規(guī)范和完善。中藥分子判定試驗(yàn)中問(wèn)題目標(biāo)基因真實(shí)性與DNA同源性DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)穩(wěn)定性分子生物研究成本等。第19