《基礎生物學實驗三》課程教學大綱

1、基礎生物學實驗三實驗教學大綱課程代碼：BIOS1009課程名稱：基礎生物學實驗（三） 英文名稱：Basic Experiment of Biology （） 實驗室名稱：生命科學基礎實驗中心課程學時：72實驗學時：72一、本課程實驗教學目的與要求通過本課程的學習，使學生加深對基本原理的理解，并通過基礎性實驗、綜合性、設計性實驗研究，培養(yǎng)學生的相關實驗操作技能和初步獨立進行科學研究的能力。要求學生掌握光學顯微鏡的基本結構和規(guī)范操作，熟練使用顯微鏡觀察分析各種細胞形態(tài)結構特征；掌握各種染色和制片方法及細胞化學技術，通過顯微鏡觀察了解各種細胞器、細胞組分的定位和分布特點；掌握細胞生理活動如物質跨膜運

2、輸、細胞融合和吞噬等的基本原理和實驗方法；了解細胞體外培養(yǎng)的基本原理和意義，掌握原代和傳代培養(yǎng)的無菌操作要點，熟悉細胞凍存和培養(yǎng)細胞觀察及活力鑒定等基本方法。掌握細胞遺傳學，經典遺傳學以及分子遺傳學原理與核型分析、染色制片技術、果蠅有性生殖雜交技術、遺傳物質DNA分離與提取等技術。能夠對實驗結果進行綜合分析并撰寫實驗報告。二、主要儀器設備及現(xiàn)有臺套數(shù) 普通光學顯微鏡100臺，倒置相差顯微鏡5臺，熒光倒置顯微鏡1臺，恒溫箱2臺，干燥箱2臺，水浴鍋1臺，CO2培養(yǎng)箱3臺，離心機6臺，冷凍離心機2臺，超凈工作臺10臺，高壓滅菌鍋1臺，純水儀1臺，超聲波清洗機1臺，液氮罐1臺，過濾器2臺，冰箱1臺，超

3、低溫冰箱1臺，分析天平2臺。生化培養(yǎng)箱1臺、PCR 儀1臺、電泳儀2臺、微量移液器30套，凝膠成像儀2臺，解剖鏡40臺。三、實驗課程內容和學時分配序號實驗項目名稱目的、要求實驗內容學時分配實驗類型每組人數(shù)必開、選開1光學顯微鏡的結構與使用了解光學顯微鏡的主要結構，掌握顯微鏡的規(guī)范操作要點；比較光鏡下人血和蛙血細胞的區(qū)別學習顯微鏡的基本組成和結構，掌握顯微鏡的規(guī)范使用方法；通過人血和蛙血標本熟悉顯微鏡操作3基礎性1必開2動物細胞的基本形態(tài)與顯微測量比較分析各類細胞的基本形態(tài)結構特征；掌握測微尺的使用和細胞大小測量的方法觀察小腸上皮、骨骼肌、肝細胞、脊髓灰質涂片等標本；制備蛙血涂片，測量蛙血細胞大

4、小3基礎性1必開3細胞器的顯示與觀察了解光鏡下線粒體、高爾基復合體和中心體等細胞器的形態(tài)和分布特點；掌握線粒體超活染色原理和方法觀察肝細胞、脊神經節(jié)切片、馬蛔蟲子宮切片等染色標本；人口腔上皮細胞的線粒體超活染色標本的制作和觀察3基礎性1必開4細胞膜的通透性掌握細胞膜的選擇通透性和細胞內外水分子交換的原理，了解等滲條件下不同溶質對溶血的發(fā)生和血影形成的影響觀察等滲條件下不同溶質對蛙紅細胞溶血時間的影響；觀察紅細胞血影的形成3基礎性2必開5植物細胞骨架的光學顯微鏡觀察掌握考馬斯亮藍法制備細胞骨架標本的實驗原理和方法；熟悉細胞骨架的類型、分布和作用洋蔥鱗莖內表皮細胞骨架標本的制備和觀察3基礎性1必開

5、6液泡系和線粒體的活體染色掌握動植物細胞針對液泡系和線粒體的活體染色的原理和相關技術蛙胸骨劍突軟骨細胞液泡系的活體染色；洋蔥表皮細胞液泡和線粒體的活體染色3基礎性1必開7細胞化學技術定位核酸和蛋白質掌握細胞化學技術定位細胞組分的一般方法；掌握細胞內DNA和RNA、酸性蛋白和堿性蛋白的分布特點和原位顯示方法甲基綠-哌洛寧染色差異顯示蛙紅細胞的DNA和RNA的定位；酸性固綠和堿性固綠分別染色顯示酸性蛋白和堿性蛋白的定位3綜合性1必開8細胞的吞噬活動觀察掌握巨噬細胞分化和吞噬活動的基本原理；了解小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞血細胞的實驗方法收集小鼠腹腔液，顯微鏡下觀察巨噬細胞吞噬臺盼藍顆粒和雞血細胞的活動3

6、設計性2必開9雞血細胞的體外融合了解細胞融合的基本原理和應用；熟悉PEG法誘導細胞融合的實驗方法PEG法誘導雞血細胞融合，顯微鏡下觀察融合過程3綜合性2選開10動物細胞的原代培養(yǎng)掌握細胞培養(yǎng)的基本原理和培養(yǎng)細胞的基本特性；掌握原代細胞培養(yǎng)的一般方法和步驟及無菌操作技術介紹細胞培養(yǎng)的基本原理和培養(yǎng)細胞的基本特性；細胞培養(yǎng)的準備工作，原代培養(yǎng)方法，無菌操作要點；練習小鼠胎兒成纖維細胞或巨噬細胞的分離培養(yǎng)6設計性3選開11動物細胞的傳代培養(yǎng)掌握細胞傳代的基本原理和方法，鞏固無菌操作理念；掌握培養(yǎng)細胞的觀察方法培養(yǎng)細胞的觀察，污染的鑒定，細胞的消化傳代3綜合性3必開12培養(yǎng)細胞的凍存和復蘇了解細胞凍存

7、的意義，掌握培養(yǎng)細胞的凍存與復蘇的原理和方法細胞的消化和凍存；凍存細胞的解凍和培養(yǎng)3綜合性3選開13細胞計數(shù)及活力測定掌握使用血球計數(shù)板測定細胞密度的方法；掌握臺盼藍染色等方法鑒定細胞死活和活力的原理和方法細胞消化和計數(shù)；臺盼藍染色鑒定細胞死活；MTT法測定細胞活力3綜合性3選開14免疫熒光細胞化學染色掌握免疫熒光細胞化學基本原理及其在細胞生物學研究中的意義；掌握免疫熒光染色的基本程序針對培養(yǎng)細胞的某種特定抗原的免疫熒光染色及顯微鏡觀察6設計性3選開15細胞減數(shù)分裂染色體的制片及觀察了解植物花粉、動物精子形成中的減數(shù)分裂各時期的細別特征及染色體變化，掌握壓片、涂片、染色等技術玉米花粉母細胞涂片

8、及觀察3基礎性1必開16孚爾根核染色制片與觀察學習植物組織的固定、細胞的解離和壓片技術，了解有絲分裂的全過程及其染色體的動態(tài)變化特征大蒜根尖細胞有絲分裂觀察3基礎性1必開17果蠅形態(tài)、生活史及雌雄識別了解果蠅生活史及其飼養(yǎng)管理，鑒別果蠅的雌雄，觀察野生型及突變型性狀果蠅生活周期及各發(fā)育階段的形態(tài)特征、雌雄果蠅的鑒別及常見突變性狀的觀察3基礎性1必開18果蠅唾腺染色體制片及觀察掌握果蠅幼蟲唾腺剝取的技術和制作唾腺染色體標本的方法，觀察多線染色體的形態(tài)特征學習果蠅幼蟲染色體制備方法，了解果蠅唾腺染色體的形態(tài)學及遺傳學特征3綜合性1必開19果蠅雜交實驗驗證孟德爾分離規(guī)律、自由組合定律，學習繪制遺傳學

9、圖的原理和方法，學習伴性遺傳的正、反交差別，掌握伴性遺傳的特點及實驗數(shù)據的統(tǒng)計處理單因子獨立分配、雙因子自由組合、伴性遺傳、基因的連鎖交換與基因定位驗證6綜合性3必開20微生物基因組DNA的提取掌握DNA提取的原理，學習微生物基因組DNA的快速提取微生物總DNA提取與鑒定3設計性1必開21環(huán)介導等溫擴增法鑒定目的基因掌握等溫核酸擴增的原理，學習環(huán)介導等溫擴增目的基因的方法設計特定引物2對，通過對目的基因（如病原生物基因組）的擴增、電泳觀察，直觀地了解擴增結果3設計性1必開22人群中味盲基因頻率的分析掌握人群中味盲基因頻率的分析方法，加深對群體遺傳學中遺傳平衡定律的認識調查班級人群中味盲和非味盲

10、比例，統(tǒng)計基因與基因頻率3綜合性1選開23蠶豆根尖微核檢測技術了解染色體畸變的類型、原理及其遺傳學意義，掌握蠶豆根尖監(jiān)測環(huán)境污染的一般方法蠶豆根尖細胞微核的形成及其檢測3設計性1選開24植物多倍體的誘發(fā)及細別學鑒定學習應用秋水仙素溶液誘發(fā)植物多倍體，掌握多倍體的細胞學鑒定方法化學誘變劑及其對細胞分裂的影響3設計性1選開25人體性染色質體的觀察通過人口腔黏膜細胞性染色質體的觀察進一步理解有關異染色質、功能性異染色質、X染色體失活等相關知識，學習性染色體的制備、觀察與分析的方法性染色體標本片的制備方法；人體性染色質體的觀察與分析3設計性1選開26DNA限制酶酶切圖譜構建與分析學習DNA限制性酶酶切

11、作圖原理與技術學習DNA限制性酶酶切作圖原理與技術6綜合性2必開27分子標記技術及其遺傳多態(tài)性分析學習隨機擴增DNA片段長度分析技術學習DNA分子標記及其遺傳多態(tài)性分析技術。6綜合性2選開28植物細胞總RNA的提取學習并掌握分離植物細胞組織中的RNA植物總RNA的提取與鑒定3設計性1選開29骨髓細胞染色體制片與觀察學習小鼠骨髓細胞染色體標本的制片技術，觀察其染色體數(shù)目、結構及其特征學習小鼠染色體制備方法，了解其染色體的形態(tài)學及遺傳學特征6設計性2選開30基因槍法轉基因技術學習用基因槍法將目的基因導入受體細胞的技術將金粉在供體DNA中浸泡，然后用基因槍將這些粒子打入細胞、組織或器官中，觀察瞬時表

12、達結果3綜合性6選開31電子克隆技術依托生物信息學方法，學習利用RT-PCR快速地獲得部分乃至全長cDNA序列的方法根據目前已完成基因組計劃的不同生物，通過某特定基因序列，基于不同生物信息及生物信息軟件，電子克隆該生物體的特定基因3綜合性2選開四、考核方式1、實驗報告：每次實驗結束都要提交一份實驗報告。實驗報告要用蘇州大學實驗報告紙（報告冊），用2H鉛筆繪圖，標注線須用直尺畫在圖的右方。實驗原理在理解的基礎上簡要書寫?？山Y合具體的實驗現(xiàn)象和問題對實驗結果進行討論。實驗報告的內容包括：（1）學生姓名、學號；（2）題目；（3）目的要求；（4）實驗用具: 主要儀器名稱、用具名稱、試劑名稱；（5）實驗

13、原理：簡明扼要；（6）實驗內容：包括主要實驗步驟及注意事項、觀察到的現(xiàn)象等；（7）作業(yè)及討論：按實驗要求繪圖；寫出實驗結果；對實驗中出現(xiàn)的問題及想法進行討論2、考核方式：（1）實驗課的考核方式：包括實際操作和閉卷筆試。（2）實驗課考核成績確定：總成績100，平時成績20%，包括實驗出勤、實驗報告、實際操作規(guī)范性及課堂提問；期末考試包括實際操作和閉卷筆試，前者占總成績20%后者占總成績60%。總成績=平時成績20%（考勤20%+實驗操作40%+實驗報告40%）+期末考試實驗操作20%+ 閉卷考試60%。五、實驗教材、參考書1、教材：，主編生物學實驗指導叢書細胞生物學與遺傳學實驗指導. 主編.蘇州大學出版社.