竹節(jié)人參對缺氧耐受小鼠興奮性氨基酸的影響

1、竹節(jié)人參對缺氧耐受小鼠興奮性氨基酸的影響【摘要】目的討論竹節(jié)人參對小鼠缺氧耐受形成中腦組織興奮性氨基酸(EAA)含量的影響。方法將小鼠用竹節(jié)人參處理后，建立小鼠急性重復(fù)缺氧耐受模型，觀察竹節(jié)人參對缺氧耐受形成中腦組織中的谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)的影響。結(jié)果竹節(jié)人參對正常腦組織EAA含量無影響，可使缺氧耐受形成中腦組織Glu，Asp含量降低，對GABA，Gly無明顯影響。結(jié)論竹節(jié)人參能明顯降低缺氧腦組織中EAA含量，從而發(fā)揮對腦損傷的保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】竹節(jié)人參；缺氧耐受；興奮性氨基酸；腦組織Abstrat:bjetiveTstudythee

2、ffetfPanaxjapniusnthententsftheexitatryainaid(EAA)inthebraintissuefuseiththenditinfenduratinfxygendefiieny.ethdsAftertreatedithPanaxjapnius,theauteendurabledelfxygendefiienyasestablishedinie.Thententsfglutaate(Glu),asparate(Asp),gaa-ainbutyriaid(GABA)andglyine(Gly)inthebraintissueereassayedbyHple.Re

3、sultsRihPanaxjapniushadnapparenteffetnEAAntentsfnralbraintissue,butitulddereasethententsfGluandASPinieiththenditinfenduratinfxygendefiieny,ithadnapparenteffetnthententsfGAGBandGly.nlusinRihPanaxjapniusandereasetheEAAntentsinthebraintissueandprtettheinjuredbrain.Keyrds:Panaxjapnius;Enduranefxygendefi

4、ieny;ExitatryAinAid;Tissuefbrain竹節(jié)人參Panaxjapnius.A.ey含有多種氨基酸如門冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、組氨酸、甘氨酸、丙氨酸人參皂苷、三七皂苷等成分1，2，兼有人參和三七兩藥之成效，具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、活血化淤等的作用3。而生長在有“中國硒都之稱的湖北恩施深山叢林中的竹節(jié)人參，由于其富硒而使藥效獨(dú)特，療效顯著?，F(xiàn)已大規(guī)模種植，資源極為豐富，家種竹節(jié)人參具有野生竹節(jié)人參一樣的藥用價(jià)值4。本實(shí)驗(yàn)以小鼠為對象，建立急性重復(fù)缺氧模型，旨在研究竹節(jié)人參對缺氧耐受小鼠腦組織中興奮性氨基酸(exitatryainaid,EAA)的影響，為深度開發(fā)湖北恩施富硒竹節(jié)人參提

5、供理論根據(jù)。1器材1.1試劑和儀器谷氨酸(glutaateGlu)、天冬氨酸(asparateAsp)、-氨基丁酸(gaa-ainbutyriaidGABA)、甘氨酸(glyineGly)標(biāo)準(zhǔn)品均為美國Siga公司產(chǎn)品，純度為99.99%，其它試劑均為國產(chǎn)分析純。TG328A型電子分析天平；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；DL-50型超級恒溫器；GL-20G高速冷凍離心機(jī)；L-10高效液相色譜儀(日本島津)。1.2動物昆明種小鼠80只，體重20.02.1g，雌雄各半，由湖北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供。1.3竹節(jié)人參注射劑的制備竹節(jié)人參購自恩施中藥材公司。取根粗粉用水煎煮后采用沉淀法制備成注射劑由本院中藥制劑實(shí)

6、驗(yàn)室制備。相當(dāng)生藥含量為2g/l，用時(shí)以生理鹽水稀釋成0.4g/l。2方法2.1實(shí)驗(yàn)分組及處理隨機(jī)將昆明種小鼠分為8組：正常對照組、竹節(jié)人參對照組、1次缺氧模型組、1次缺氧竹節(jié)人參組、2次缺氧模型組、2次缺氧竹節(jié)人參組、3次缺氧模型組、3次缺氧竹節(jié)人參組，每組10只。竹節(jié)人參對照組、1次缺氧竹節(jié)人參組、2次缺氧竹節(jié)人參組、3次缺氧竹節(jié)人參組小鼠均腹腔注射藥物10l/kg，正常對照組、1次缺氧模型組、2次缺氧模型組和3次缺氧模型組小鼠均腹腔注射等量生理鹽水。1次/d，連續(xù)給藥2d，試驗(yàn)前30in給藥1次。2.2急性重復(fù)缺氧模型的建立將上述藥物處理后的小鼠，除正常對照組和竹節(jié)人參對照組外，按急性重

7、復(fù)缺氧方法，分別置于含有新穎空氣，經(jīng)過標(biāo)定的150l廣口瓶內(nèi)。以橡皮塞密閉，記時(shí)，一旦出現(xiàn)喘氣呼吸，立即取出，并隨即轉(zhuǎn)移到另一相似體積，含有新穎空氣的廣口瓶內(nèi)，密閉，記時(shí)。依此類推至3次，實(shí)驗(yàn)室溫度202。2.3測定方法和指標(biāo)將急性重復(fù)缺氧處理后的小鼠處死，取出雙側(cè)腦組織，在冰臺上迅速別離雙側(cè)前腦皮質(zhì)和海馬，以冰生理鹽水沖洗后除去殘血，吸干后稱重，按19比例參加無水乙醇，以高速勻漿機(jī)在冰浴下制成10%腦勻漿液。勻漿條件為10s/次，停15s，共計(jì)4次。將勻漿液于3500r/in(4)離心5in，別離上清液，于-30保存待測。測試前標(biāo)本復(fù)溶，再1000r/in(4)離心10in，取上清液，檢測條

8、件及方法按hen等5建立的高效液相色譜儀法進(jìn)展，進(jìn)樣量為100l。檢測小鼠腦組織中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)的含量。2.4數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.5frinds統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)展處理，數(shù)據(jù)以s表示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用配對樣本t檢驗(yàn)。3結(jié)果3.1缺氧耐受小鼠腦中興奮性氨基酸Glu，Asp含量的變化第1，2，3次缺氧后，除2次缺氧模型組腦組織Glu的含量與正常對照組相比無明顯差異(P0.05)外，Glu和Asp的含量明顯升高(P0.01)，隨著缺氧次數(shù)的增加有明顯下降趨勢。各組間Glu和Asp含量也有一定的差異，且隨缺氧次數(shù)的增加，其差異愈明顯。

9、結(jié)果見表1。3.2竹節(jié)人參對缺氧耐受小鼠腦中興奮性氨基酸Glu，Asp含量的影響竹節(jié)人參對正常小鼠腦組織Glu，Asp含量影響不大(P0.05)。第1，2，3次缺氧后，除1次缺氧竹節(jié)人參組腦組織Glu的含量與正常對照組相比明顯升高(P0.01)外，Glu和Asp的含量無明顯差異(P0.05)，隨著缺氧次數(shù)的增加有下降趨勢結(jié)果見表1。3.3各組腦組織中抑制性氨基酸GABA，Gly含量的變化竹節(jié)人參對正常小鼠腦組織中GABA，Gly的含量影響不大(P0.05)。1次缺氧后，竹節(jié)人參組與缺氧組腦組織GABA與對照組相比有明顯升高(P0.05)，Gly的含量也有升高趨勢，隨缺氧次數(shù)的增加GABA和Gl

10、y的含量有回降趨勢P0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1。表1竹節(jié)人參對缺氧耐受小鼠氨基酸的影響(略)4討論氨基酸是生命的根底物質(zhì)，在人體的生長、發(fā)育、營養(yǎng)和代謝等生命活動中起著重要作用。EAA主要是指Glu和Asp，Glu是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量最高，分布最廣，作用最強(qiáng)的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)。大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)腦缺血缺氧損傷時(shí)，腦內(nèi)產(chǎn)生大量的EAA，作用其受體，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣超載及一系列的變化，最終使神經(jīng)細(xì)胞代謝衰竭而死亡。EAA升高的程度與腦損傷的程度有關(guān)，損傷越嚴(yán)重那么興奮性氨基酸升高越顯著，持續(xù)時(shí)間越長。在重復(fù)缺氧過程中，腦組織可能通過某種機(jī)制的調(diào)節(jié)，減少了興奮性氨基酸的生成，促進(jìn)了抑制性氨基酸的回降，從而促進(jìn)缺氧耐受的形成。腦缺氧過程中，自由基反響也是引起腦損傷的另一個(gè)重要因素，在正常情況下，不致引起病理效應(yīng)，但在腦缺氧情況下，自由基產(chǎn)生過多，超氧化物歧化酶superxidedisutase,SD含量明顯降低，引起細(xì)胞損傷，腦損傷越嚴(yán)重，SD降低愈明顯6。有研究說明竹節(jié)人參有抗疲勞7、抗炎、鎮(zhèn)痛作用，對垂體后葉素造成的小鼠心肌缺血損傷、大鼠胃缺血再灌注損傷有保護(hù)作用。本研究結(jié)果說明，竹節(jié)人參可對抗缺氧性腦損傷，防止缺氧時(shí)EAA的升高。竹節(jié)人參對缺氧所致小鼠腦損傷具有明顯的保護(hù)作用，其作用機(jī)理可能與對抗腦缺氧時(shí)EAA的升高及去除過多自由基等有關(guān)。【參考文獻(xiàn)】1陳永波，饒斌，沈艷芬.竹節(jié)人參