抗體的應(yīng)用及選擇

1、抗體的應(yīng)用及選擇第1頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四凱基生物是專業(yè)從事生物試劑研發(fā)、生產(chǎn)、銷售和技術(shù)服務(wù)的國有公司凱基生物現(xiàn)具有四條產(chǎn)品線：生命科學(xué)通用工具庫、醫(yī)學(xué)研究工具庫、藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)工具庫、核質(zhì)與核信號研究工具庫，五千余種產(chǎn)品，上萬種品種規(guī)格供客戶選擇第2頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四抗體 (Ab):是B 細胞受抗原刺激后，分化為漿細胞合成并分泌的一類能與相應(yīng)抗原特異結(jié)合的球蛋白。第3頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四抗體的應(yīng)用醫(yī)療領(lǐng)域： 診斷： 已知抗體查未知抗原；血型、乙肝、SARS、腫瘤相關(guān)抗原等 已知抗原查

2、未知抗體；HIV、傷寒、自身免疫病等 預(yù)防： 應(yīng)急預(yù)防（破傷風(fēng)，Rh不合的新生兒溶血等） 治療： 感染、抗移植排斥、抗炎、抗腫瘤科研： western blot ELISA FACS IHC IP 第4頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四Western blot 第5頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四Primary antibody 選擇？第6頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四Secondary antibody酶標(biāo)二抗： 辣根過氧化酶（HRP)堿性磷酸酶（AP)葡萄糖氧化酶（GOT)種屬性:兔(與一抗來源相同）來源：山羊（不能與

3、抗原來源相同）第7頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四ELISA第8頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四與western blot 不同點二抗：必須能與抗原結(jié)合 但是不能與一抗（包被抗體）結(jié)合抗原：小鼠一抗：兔來源二抗：不能是兔來源的第9頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四第10頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四第11頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四免疫組化第12頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四傳統(tǒng)方法第13頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四即

4、用型快捷免疫組化 聚合物:辣根過氧化物酶標(biāo)羊抗鼠、兔（一抗）堿性磷酸酶酶標(biāo)抗鼠、兔（一抗） 第14頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四免疫組織化學(xué)的應(yīng)用1.確定細胞類型2.確定細胞類型3.確定細胞類型4.確定細胞類型5.確定腫瘤分期6.尋找感染病因.第15頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四FACS液流系統(tǒng)：將細胞單個壓入流動室激光發(fā)射器發(fā)出所需要的波長的激光前向散射光檢測器光學(xué)濾鏡側(cè)向散射光檢測器第16頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四目前流式儀可以檢測的類別細菌浮游生物紅細胞淋巴細胞中性粒細胞單核細胞DM：1um 15um第17

5、頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四熒光標(biāo)記法直接染色法：省時，一步染色特異性強可以同時進行多種顏色的染色間接染色法：熒光強度往往比較強熒光顏色可以隨時更換耗時非特異性染色干擾實驗結(jié)果，特別是陽性率低的時候。Biotin染色：特異性較強的熒光識別靈活選擇顏色只能使用一種帶生物素的抗體在全血中會有非特異性染色第18頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四熒光抗體的介紹用各種方法將單克隆抗體和流式儀能夠檢測到的熒光蛋白結(jié)合在一起就是流式操作中所用的熒光抗體第19頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四流式實驗流程介紹1，將熒光抗體和細胞一起培養(yǎng)2

6、，抗體結(jié)合到細胞表面所對應(yīng)的特殊抗原上3，過流式細胞儀的時候，在激發(fā)光的照射下，抗體的熒光部分發(fā)出熒光4，抗體發(fā)出的發(fā)射光被流式儀所收集第20頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四根據(jù)目前可見的三種激發(fā)光分藍色激發(fā)光405nm綠色激發(fā)光488nm紅色激發(fā)光635nm第21頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四第22頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四細胞結(jié)構(gòu)細胞大小細胞粒度細胞表面面積核漿比例DNA含量與細胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量染色體分析細胞功能細胞表面/胞漿/核的特異性抗原細胞活性細胞內(nèi)細胞因子酶活性激素結(jié)合位點細胞受體細胞凋亡在上

7、述信號基礎(chǔ)上的細胞分選流式細胞術(shù)的細胞學(xué)應(yīng)用第23頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四流式細胞儀的臨床應(yīng)用HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)白血病和淋巴瘤的免疫分型腫瘤的細胞周期和倍體分析網(wǎng)織紅細胞計數(shù)細胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測干細胞計數(shù)殘量白血病細胞檢查HLA-B27檢查血小板功能及相關(guān)疾病第24頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四流式細胞儀的科研應(yīng)用免疫功能研究癌癥病人的多藥耐藥性細胞動力學(xué)功能研究動物性別篩選海洋與環(huán)境微生物分析染色體分選第25頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四Annexin V-FITC/PI雙染色法第26

8、頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四 B淋巴細胞檢測淋巴細胞B淋巴細胞第27頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四Dynabeads （chip isolation activation)第28頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四第29頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四第30頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四抗體的選擇一抗：（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息（2）確定你的實驗類型，ELISA，WB，IHC，ICC，還是FACS。（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat二抗（1）種屬來源（2）標(biāo)記物的選擇第31頁，共34頁，2022年，5月20日，0點20分，星期四保存注意事項 收到抗體后12000rpm離心3min后再打開管蓋進行分裝和保存！ 大部分抗體是保存