二輪復(fù)習(xí)單克隆抗體的過程課件

1、單克隆抗體溫故知新：1.細(xì)胞工程的兩大類型？各自的技術(shù)手段及其原理是？2.核移植的兩大類型？其中提供細(xì)胞質(zhì)的為去核的卵母細(xì)胞，為什么選去核的卵母細(xì)胞？3.動(dòng)物細(xì)胞融合的實(shí)質(zhì)，原理和方法？融合后的細(xì)胞叫？體積大，易操作；含有使細(xì)胞核的全能性容易表達(dá)的物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)條件植物細(xì)胞工程： 植物組織培養(yǎng)（細(xì)胞的全能性） 植物體細(xì)胞雜交 （細(xì)胞的全能性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性）動(dòng)物細(xì)胞工程： 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（細(xì)胞增殖） 核移植（動(dòng)物細(xì)胞核的全能性） 動(dòng)物細(xì)胞融合（細(xì)胞膜的流動(dòng)性） 單克隆抗體 （細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖）傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷1.傳統(tǒng)的生產(chǎn)方法: 向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，然后從動(dòng)物

2、血清中分離所需要的抗體。 2.缺陷：產(chǎn)量低、純度低，而且制備的抗體特異性差。 主要分布血清，還有的分布在組織液，外分泌液一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無限增殖雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體既能在體外大量繁殖，又能產(chǎn)生特異性抗體單克隆抗體漿細(xì)胞第一次篩選用特定的選擇培養(yǎng)基帥選出雜交瘤細(xì)胞融合 在培養(yǎng)基中加入氨基嘌呤，收集增殖細(xì)胞！3種雜交細(xì)胞：B-B融合細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞 瘤-瘤融合細(xì)胞未融合的細(xì)胞：?jiǎn)蝹€(gè)的B細(xì)胞、單個(gè)的骨髓瘤細(xì)胞這五種細(xì)胞中， 沒有分裂能力，逐漸衰老死亡； 的DNA復(fù)制只有D途徑， 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途徑阻斷，也逐漸衰老死亡，

3、但的DNA復(fù)制有D、S兩條途徑，雖然D途徑被氨基嘌呤阻斷，但是還可以通過 S 途徑進(jìn)行DNA的復(fù)制，使細(xì)胞有分裂能力。 通常采用有限稀釋法，將篩選出來的雜交瘤細(xì)胞多倍稀釋，接種在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不多于一個(gè)，再由這些單細(xì)胞克隆生長(zhǎng)，然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。最終選出分泌預(yù)定特異抗體的雜交細(xì)胞株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。再篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞陽性孔方法抗原-抗體雜交法用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，稀釋度要保證每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞。 抗原抗體雜交法檢測(cè)呈陽性反應(yīng)如何得到大量的單克隆抗體？單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)： 特異性強(qiáng)，靈敏度高，并可以大量

4、制備。單克隆抗體第二次篩選雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外或體內(nèi)培養(yǎng)第一次篩選骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合特異性雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系提取經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備過程：特點(diǎn)：既能大量繁殖又能產(chǎn)生專一抗體特點(diǎn)：特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備注射抗原免疫高考熱點(diǎn)：1.此過程中的B淋巴細(xì)胞是經(jīng)過免疫的，實(shí)際上就是漿細(xì)胞。2.融合后形成的雜交細(xì)胞有多種，考慮兩兩融合，共有三種： B-B、B-瘤(雜交瘤細(xì)胞) 、瘤-瘤 3.單克隆抗體制備中用到的技術(shù)手段：動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。 4.原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖 5.整個(gè)制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選?第一次篩選用特定的選擇培

5、養(yǎng)基， 篩選出雜交瘤細(xì)胞（多種） 第二次用多孔培養(yǎng)板， 篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。單克隆確有單個(gè)細(xì)胞克隆的含義，只不過克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。4、單抗隆抗體的應(yīng)用作為診斷試劑定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病 用于體外診斷人類和動(dòng)植物疾病及病原鑒定，純度高、特異性強(qiáng)，具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。用于治療疾病和運(yùn)載藥物 利用同位素標(biāo)記單抗，在特定組織成像 制成生物導(dǎo)彈，將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在的位置，在原位殺死癌細(xì)胞，療效高、副作用小?！吧飳?dǎo)彈”單克隆抗體藥物 導(dǎo)向 殺死癌細(xì)胞單克隆抗體的制備1、怎樣獲得能分泌專一抗體的B淋巴細(xì)胞？2、從何處獲得較多的B淋巴細(xì)胞？3、用什么方法可以使B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合？4、怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞？5、篩選出的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體都一樣嗎？6、怎樣獲得只產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞？7、怎樣獲得大量的單一抗體？反復(fù)注射特定的抗原，免疫小鼠。小鼠的脾臟PEG、滅活的病毒等利用