臨床基因擴增實驗室質(zhì)量管理體系的建立醫(yī)學

1、臨床基因擴增實驗室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學精品臨床基因擴增實驗室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學精品From福建省臨床基因擴增檢驗實驗室規(guī)范化培訓暨技術(shù)人員培訓班衛(wèi)生部臨床檢驗中心 李金明From福建省臨床基因擴增檢驗實驗室Contents PCR技術(shù)介紹； 質(zhì)量管理體系的建立； 質(zhì)量保證； 質(zhì)控規(guī)則；Contents PCR技術(shù)介紹；PCR技術(shù)高溫Target SequenceTarget Sequence較低溫度Primer 1Primer 2Target Sequence最適溫度123PCR技術(shù)高溫Target SequenceTarget S實時熒光定量PCR模板起始濃度越高，熒光信號強度達到

2、域值所需的循環(huán)數(shù)越少，即Ct值越小。 熒光值未知濃度樣本循環(huán)數(shù)n循環(huán)數(shù)n熒光值已知濃度系列標準品模板起始濃度的常用對數(shù)與Ct值呈負線性關(guān)系。log起始濃度Ct值標準曲線實時熒光定量PCR模板起始濃度越高，熒光信號強度達到域值所需無基因無核酸的重要性嚴格分區(qū)（一區(qū)二區(qū)三區(qū)）；開窗通風；用次氯酸鈉擦洗地面和臺面，甚至墻面；增長紫外照射的時間；用75%乙醇空中噴霧；實驗前的處理程序和實驗后的處理程序；無基因無核酸的重要性嚴格分區(qū)（一區(qū)二區(qū)三區(qū)）；核酸污染的來源臨床標本中存在的大量待測微生物科研中得到的質(zhì)?？寺∫郧胺治鲅芯康奶囟ㄎ⑸锎罅看嬖谟趯嶒灜h(huán)境中的特定微生物以前擴增產(chǎn)物的殘留污染。這也是PCR

3、實驗室最容易產(chǎn)生的，將造成假陽性的“污染”。 Next核酸污染的來源臨床標本中存在的大量待測微生物Next質(zhì)量體系文件的編寫基本原則：最有效+符合實際；三大特性：法規(guī)性：一旦批準必須認真執(zhí)行；唯一性：一個檢驗活動只能有唯一的操作程序；適用性：要符合實際，具有可操作性；SOP包含的內(nèi)容：5W+1H；SOP呈現(xiàn)方式：圖片+文字；質(zhì)量體系文件的編寫基本原則：最有效+符合實際；PCR實驗室的質(zhì)量體系文件檢測項目的性能驗證；項目檢測的SOP;儀器和設備的操作SOP；儀器和設備的維護SOP； 人員的技術(shù)檔案；各種記錄表格；PCR實驗室的質(zhì)量體系文件檢測項目的性能驗證；表格記錄表格記錄臨床基因擴增實驗室質(zhì)量

4、管理體系的建立-醫(yī)學精品臨床基因擴增實驗室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學精品臨床基因擴增實驗室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學精品儀器設備的維護校準SOP日維護周維護定期維護劑量單位校準廠家校準儀器設備的維護校準SOP日維護人員的技術(shù)檔案記錄一人一個檔案；個人基本情況；培訓證和上崗證；論文、著作、成果等；培訓考核記錄等；人員的技術(shù)檔案記錄一人一個檔案；儀器設備的技術(shù)檔案一臺儀器一個檔案；儀器的基本情況；儀器的使用說明書；儀器校準的記錄；維修維護的記錄等；Next儀器設備的技術(shù)檔案一臺儀器一個檔案；Next室內(nèi)質(zhì)量控制由實驗室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度；旨在監(jiān)測和控制本實驗

5、室工作的精密度，提高本實驗室常規(guī)工作中批內(nèi)和批間樣本檢驗的一致性，以確定測定工作的結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作；改善測定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，即對試劑準備、標本采集、核酸提取、測定方法和儀器操作寫出并嚴格執(zhí)行“標準操作程序（SOP）”。室內(nèi)質(zhì)量控制由實驗室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本室內(nèi)質(zhì)量控制標本采集、運送和保存中的關(guān)鍵點:容器密閉、一次性、無菌、無核酸酶及擴增抑制物；采集方法人員訓練有素、防污染、保存時間和溫度；合格標本容器完整、量夠、時間符合要求、外觀符合要求、要猜到病原體等；室內(nèi)質(zhì)量控制標本采集、運送和保存中的關(guān)鍵點:第49-51頁第49-51

6、頁臨床基因擴增實驗室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學精品臨床基因擴增實驗室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學精品為客觀比較一個實驗室的測定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機構(gòu)，采取一定的辦法，連續(xù)和客觀地評價實驗室的測定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實驗室之間的結(jié)果具有可比性，這是對實驗室操作和實驗方法的回顧性評價，而不是用來決定在實時的測定結(jié)果的可接受性。室間質(zhì)量評價為客觀比較一個實驗室的測定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機構(gòu)，采臨床基因擴增實驗室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學精品臨床基因擴增實驗室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學精品室間質(zhì)評的檔案袋申請表；接收記錄；保存記錄；實驗記錄；結(jié)果上報表；結(jié)果匯報表；分析和改進內(nèi)容；Nex

7、t室間質(zhì)評的檔案袋申請表；Next質(zhì)控規(guī)則質(zhì)控規(guī)則的功能：判斷測定批的失控還是在控；失控處理： 查出原因；采取措施；保證消除；不再出現(xiàn)；納入標準；防止同樣的問題出現(xiàn)第二次是質(zhì)量管理的“精髓”。質(zhì)控規(guī)則質(zhì)控規(guī)則的功能：判斷測定批的失控還是在控；防止同樣的符 號 定 義12S 一個質(zhì)控測定值超出2s控制限。13S 一個質(zhì)控測定值超出3s控制限。22S 兩個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時超出+2s或2s控制限。R4S 同一批測定中，兩個不同濃度質(zhì)控物的測定值之間的 差值超出4s控制限。41S 四個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時超出+1s或1s控制限。7T 七個連續(xù)的質(zhì)控測定值呈現(xiàn)一個向上或向下的趨勢變 化。10X 十個

8、連續(xù)的質(zhì)控測定值同時處于均值的同一側(cè)。質(zhì)控規(guī)則的符號及其定義符 號 定 “即刻法”和Levey-Jennings質(zhì)控圖法“即刻法” 的實質(zhì)是一種統(tǒng)計學方法，即Grubs異常值取舍法 ；只要有3個以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。Levey-Jennings質(zhì)控圖法：穩(wěn)定條件下，20個室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果不應有多于1個結(jié)果超過2SD限度；在1000個測定結(jié)果中超過3SD的結(jié)果不多于3個。質(zhì)控方法“即刻法”和Levey-Jennings質(zhì)控圖法質(zhì)控方法“即刻法”在剛開始進行質(zhì)控時，可以采用“即刻法”進行質(zhì)控，當日常有效測定次數(shù)超過20次時，轉(zhuǎn)入使用Levey-Jennings 質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控的方法進行質(zhì)控?！凹纯谭ā痹趧傞_始進行質(zhì)控時，可以采用“即刻法”進行質(zhì)控，當Levey-Jennings質(zhì)控圖Levey-