臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立醫(yī)學(xué)

1、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學(xué)精品臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學(xué)精品From福建省臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化培訓(xùn)暨技術(shù)人員培訓(xùn)班衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心 李金明From福建省臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室Contents PCR技術(shù)介紹； 質(zhì)量管理體系的建立； 質(zhì)量保證； 質(zhì)控規(guī)則；Contents PCR技術(shù)介紹；PCR技術(shù)高溫Target SequenceTarget Sequence較低溫度Primer 1Primer 2Target Sequence最適溫度123PCR技術(shù)高溫Target SequenceTarget S實(shí)時(shí)熒光定量PCR模板起始濃度越高，熒光信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到

2、域值所需的循環(huán)數(shù)越少，即Ct值越小。 熒光值未知濃度樣本循環(huán)數(shù)n循環(huán)數(shù)n熒光值已知濃度系列標(biāo)準(zhǔn)品模板起始濃度的常用對(duì)數(shù)與Ct值呈負(fù)線性關(guān)系。log起始濃度Ct值標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)時(shí)熒光定量PCR模板起始濃度越高，熒光信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到域值所需無(wú)基因無(wú)核酸的重要性嚴(yán)格分區(qū)（一區(qū)二區(qū)三區(qū)）；開窗通風(fēng)；用次氯酸鈉擦洗地面和臺(tái)面，甚至墻面；增長(zhǎng)紫外照射的時(shí)間；用75%乙醇空中噴霧；實(shí)驗(yàn)前的處理程序和實(shí)驗(yàn)后的處理程序；無(wú)基因無(wú)核酸的重要性嚴(yán)格分區(qū)（一區(qū)二區(qū)三區(qū)）；核酸污染的來(lái)源臨床標(biāo)本中存在的大量待測(cè)微生物科研中得到的質(zhì)粒克隆以前分析研究的特定微生物大量存在于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的特定微生物以前擴(kuò)增產(chǎn)物的殘留污染。這也是PCR

3、實(shí)驗(yàn)室最容易產(chǎn)生的，將造成假陽(yáng)性的“污染”。 Next核酸污染的來(lái)源臨床標(biāo)本中存在的大量待測(cè)微生物Next質(zhì)量體系文件的編寫基本原則：最有效+符合實(shí)際；三大特性：法規(guī)性：一旦批準(zhǔn)必須認(rèn)真執(zhí)行；唯一性：一個(gè)檢驗(yàn)活動(dòng)只能有唯一的操作程序；適用性：要符合實(shí)際，具有可操作性；SOP包含的內(nèi)容：5W+1H；SOP呈現(xiàn)方式：圖片+文字；質(zhì)量體系文件的編寫基本原則：最有效+符合實(shí)際；PCR實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量體系文件檢測(cè)項(xiàng)目的性能驗(yàn)證；項(xiàng)目檢測(cè)的SOP;儀器和設(shè)備的操作SOP；儀器和設(shè)備的維護(hù)SOP； 人員的技術(shù)檔案；各種記錄表格；PCR實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量體系文件檢測(cè)項(xiàng)目的性能驗(yàn)證；表格記錄表格記錄臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量

4、管理體系的建立-醫(yī)學(xué)精品臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學(xué)精品臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學(xué)精品儀器設(shè)備的維護(hù)校準(zhǔn)SOP日維護(hù)周維護(hù)定期維護(hù)劑量單位校準(zhǔn)廠家校準(zhǔn)儀器設(shè)備的維護(hù)校準(zhǔn)SOP日維護(hù)人員的技術(shù)檔案記錄一人一個(gè)檔案；個(gè)人基本情況；培訓(xùn)證和上崗證；論文、著作、成果等；培訓(xùn)考核記錄等；人員的技術(shù)檔案記錄一人一個(gè)檔案；儀器設(shè)備的技術(shù)檔案一臺(tái)儀器一個(gè)檔案；儀器的基本情況；儀器的使用說(shuō)明書；儀器校準(zhǔn)的記錄；維修維護(hù)的記錄等；Next儀器設(shè)備的技術(shù)檔案一臺(tái)儀器一個(gè)檔案；Next室內(nèi)質(zhì)量控制由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度；旨在監(jiān)測(cè)和控制本實(shí)驗(yàn)

5、室工作的精密度，提高本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作中批內(nèi)和批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測(cè)定工作的結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作；改善測(cè)定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，即對(duì)試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、核酸提取、測(cè)定方法和儀器操作寫出并嚴(yán)格執(zhí)行“標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）”。室內(nèi)質(zhì)量控制由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)本采集、運(yùn)送和保存中的關(guān)鍵點(diǎn):容器密閉、一次性、無(wú)菌、無(wú)核酸酶及擴(kuò)增抑制物；采集方法人員訓(xùn)練有素、防污染、保存時(shí)間和溫度；合格標(biāo)本容器完整、量夠、時(shí)間符合要求、外觀符合要求、要猜到病原體等；室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)本采集、運(yùn)送和保存中的關(guān)鍵點(diǎn):第49-51頁(yè)第49-51

6、頁(yè)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學(xué)精品臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學(xué)精品為客觀比較一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機(jī)構(gòu)，采取一定的辦法，連續(xù)和客觀地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果具有可比性，這是對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作和實(shí)驗(yàn)方法的回顧性評(píng)價(jià)，而不是用來(lái)決定在實(shí)時(shí)的測(cè)定結(jié)果的可接受性。室間質(zhì)量評(píng)價(jià)為客觀比較一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機(jī)構(gòu)，采臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學(xué)精品臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立-醫(yī)學(xué)精品室間質(zhì)評(píng)的檔案袋申請(qǐng)表；接收記錄；保存記錄；實(shí)驗(yàn)記錄；結(jié)果上報(bào)表；結(jié)果匯報(bào)表；分析和改進(jìn)內(nèi)容；Nex

7、t室間質(zhì)評(píng)的檔案袋申請(qǐng)表；Next質(zhì)控規(guī)則質(zhì)控規(guī)則的功能：判斷測(cè)定批的失控還是在控；失控處理： 查出原因；采取措施；保證消除；不再出現(xiàn)；納入標(biāo)準(zhǔn)；防止同樣的問(wèn)題出現(xiàn)第二次是質(zhì)量管理的“精髓”。質(zhì)控規(guī)則質(zhì)控規(guī)則的功能：判斷測(cè)定批的失控還是在控；防止同樣的符 號(hào) 定 義12S 一個(gè)質(zhì)控測(cè)定值超出2s控制限。13S 一個(gè)質(zhì)控測(cè)定值超出3s控制限。22S 兩個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)超出+2s或2s控制限。R4S 同一批測(cè)定中，兩個(gè)不同濃度質(zhì)控物的測(cè)定值之間的 差值超出4s控制限。41S 四個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)超出+1s或1s控制限。7T 七個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值呈現(xiàn)一個(gè)向上或向下的趨勢(shì)變 化。10X 十個(gè)

8、連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)處于均值的同一側(cè)。質(zhì)控規(guī)則的符號(hào)及其定義符 號(hào) 定 “即刻法”和Levey-Jennings質(zhì)控圖法“即刻法” 的實(shí)質(zhì)是一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，即Grubs異常值取舍法 ；只要有3個(gè)以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。Levey-Jennings質(zhì)控圖法：穩(wěn)定條件下，20個(gè)室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果不應(yīng)有多于1個(gè)結(jié)果超過(guò)2SD限度；在1000個(gè)測(cè)定結(jié)果中超過(guò)3SD的結(jié)果不多于3個(gè)。質(zhì)控方法“即刻法”和Levey-Jennings質(zhì)控圖法質(zhì)控方法“即刻法”在剛開始進(jìn)行質(zhì)控時(shí)，可以采用“即刻法”進(jìn)行質(zhì)控，當(dāng)日常有效測(cè)定次數(shù)超過(guò)20次時(shí)，轉(zhuǎn)入使用Levey-Jennings 質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控的方法進(jìn)行質(zhì)控?！凹纯谭ā痹趧傞_始進(jìn)行質(zhì)控時(shí)，可以采用“即刻法”進(jìn)行質(zhì)控，當(dāng)Levey-Jennings質(zhì)控圖Levey-