酶活力計(jì)算公式

1、固態(tài)發(fā)酵漆酶活性測(cè)定：酶液制?。?g發(fā)酵樣品以1:20（ W/V）比例用蒸餾水懸浮，200 r/min 搖 3h，之后 5000 r/min 離心20min。 （上清用0.45 m 濾紙過(guò)濾，于-20保存濾液，取能整除的濾液體積用于漆酶活性測(cè)定。）酶活反應(yīng)體系3.0mL（ 2.3mL 0.2mol/L 醋酸 -醋酸鈉緩沖液；pH=4.50.5mL粗酶液稀釋液；0.2mL 1mmol/L 的 ABTS）420nm處測(cè)定吸光值的變化。此實(shí)驗(yàn)固態(tài)發(fā)酵漆酶活性計(jì)算公式：U(/g) TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark3 o Current Document N V總OD

2、 420 103100mLU(/g)V酶36000 T L 0.5mL 5gN：酶液稀釋倍數(shù)總 : 漆酶酶活測(cè)定反應(yīng)體體系的終體積（mL）酶 : 反應(yīng)添加的酶液體積（mL）OD420: t 時(shí)間內(nèi)反應(yīng)液在420nm 處吸光度的增加值36000: 420nm處 ABTS 氧化態(tài)的摩爾吸光系數(shù)（L/mol cm）T：反應(yīng)時(shí)間（min）L 為比色皿的直徑（cm） 。100mL/（0.5mL 5g）：固態(tài)變成液態(tài)的稀釋倍數(shù)0.5mL0.5mLU（/ g）N：酶液稀釋倍數(shù)液態(tài)發(fā)酵漆酶活性測(cè)定：酶活反應(yīng)體系3.0mL（ 2.3mL 0.2mol/L 醋酸 -醋酸鈉緩沖液；pH=4.5粗酶液稀釋液；0.2m

3、L 1mmol/L 的 ABTS) TOC o 1-5 h z NV總OD420103總V酶36000 T LV 總 : 漆酶酶活測(cè)定反應(yīng)體體系的終體積（mL）V 酶 : 反應(yīng)添加的酶液體積（mL） OD420: t 時(shí)間內(nèi)反應(yīng)液在420nm 處吸光度的增加值36000: 420nm處 ABTS 氧化態(tài)的摩爾吸光系數(shù)（L/mol cm）T：反應(yīng)時(shí)間（min）L 為比色皿的直徑（cm） 。固態(tài)發(fā)酵錳過(guò)氧化物酶(MnP)活性測(cè)定：酶液制?。捍置敢褐苽浒l(fā)酵過(guò)程中每隔2 d 取 5 g 發(fā)酵物于250 mL 三角瓶中， 加入100 mL H2O， 在 200 r / min 的搖床中振蕩提取3 h，

4、之后 5000 r/min離心20min。 (用濾紙過(guò)濾后，取濾液用于測(cè)定MnP 酶活性。 )在 4 mL 反應(yīng)體系中含50 mmol/L( pH 4 5) 的乳酸鈉緩沖液3. 4 mL， 1.6 mmol/L 的硫酸錳溶液0. 1 mL， 酶液 0. 4 mL， 預(yù)熱至 37 時(shí)， 加 1. 6 mmol/ L 的 H2O2溶液0. 1 mL 啟動(dòng)反應(yīng)。在238 nm 紫外光處，測(cè)定反應(yīng)4 min 內(nèi)OD238差值。在對(duì)照組中，以煮沸滅活15 min 酶液代替原酶液，以蒸餾水代替H2O2溶液，其他反應(yīng)物不變。每分鐘使1 mol/L的 Mn2 +轉(zhuǎn)化為Mn3 +所需的酶量為 1 個(gè)酶活力單位(

5、 U) 。 ( 238 = 6.5mM-1.cm-1)此實(shí)驗(yàn)固態(tài)發(fā)酵MnP 活性計(jì)算公式： TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark12 o Current Document N V總OD238 103100mLU(/mL) 總 238V酶6500 T L 0.4mL 5gN：酶液稀釋倍數(shù)總 : 漆酶酶活測(cè)定反應(yīng)體體系的終體積(mL)酶 : 反應(yīng)添加的酶液體積(mL) OD420: t 時(shí)間內(nèi)反應(yīng)液在420nm 處吸光度的增加值6500: 238nm 處 Mn2 +轉(zhuǎn)化為Mn3 +摩爾吸光系數(shù)(L/mol cm)T：反應(yīng)時(shí)間(min)L：比色皿的直徑(cm)100m

6、L/(0.4mL 5g)：固態(tài)變成液態(tài)的稀釋倍數(shù)液態(tài)發(fā)酵錳過(guò)氧化物酶（MnP）活性測(cè)定：錳過(guò)氧化物酶（MnP）活性測(cè)定在 4 mL 反應(yīng)體系中含50 mmol/L（ pH 4 5） 的乳酸鈉緩沖液3. 4 mL， 1.6 mmol/L 的硫酸錳溶液0. 1 mL， 酶液 0. 4 mL， 預(yù)熱至 37 時(shí)， 加 1. 6 mmol/ L 的H2O2溶液0. 1 mL 啟動(dòng)反應(yīng)。在238 nm 紫外光處，測(cè)定反應(yīng)4 min 內(nèi)OD238差值。在對(duì)照組中，以煮沸滅活15 min 酶液代替原酶液，以蒸餾水代替H2O2溶液，其他反應(yīng)物不變。每分鐘使1 mol/L的Mn2 +轉(zhuǎn)化為Mn3 +所需的酶量為

7、 1 個(gè)酶活力單位（ U） 。 （ 238 = 6.5Mm-1.cm-1）此實(shí)驗(yàn)固態(tài)發(fā)酵MnP 活性計(jì)算公式：U(/ mL)N V OD 10 3U(/ mL) TOC o 1-5 h z 總238V酶6500 T LN：酶液稀釋倍數(shù)V 總 : 漆酶酶活測(cè)定反應(yīng)體體系的終體積（mL）V 酶 : 反應(yīng)添加的酶液體積（mL） OD420: t 時(shí)間內(nèi)反應(yīng)液在420nm 處吸光度的增加值6500: 238nm處 Mn2 +轉(zhuǎn)化為Mn3 +摩爾吸光系數(shù)（L/mol cm）T：反應(yīng)時(shí)間（min）L：比色皿的直徑（cm）LiPLiP）活性測(cè)定：酶液制?。?g 發(fā)酵樣品以1:20（ W/V） 比例用蒸餾水懸

8、浮，200 r/min 搖 3h，之后 5000 r/min 離心20min。 （上清用0.45m 濾紙過(guò)濾，于-20保存濾液，取能整除的濾液體積用于木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活性測(cè)定。）測(cè)酶活：3mL 反應(yīng)混合液包括3.4mL 酒石酸鈉（250mM， pH 3.0） ， 0.1mL10mM 藜蘆醇， 0.4mL 酶樣品。在30 1下溫浴5min 后，于反應(yīng)加入0.1mL10mM H2O2啟動(dòng)酶促反應(yīng)，以煮沸滅活15 min 酶液代替原酶液，以蒸餾水代替H2O2溶液作對(duì)照，測(cè) OD310（3 10= 9.3 103M-1cm-1）處反應(yīng)5min 前后反應(yīng)液吸光度的變化。一個(gè)酶活力單位（U）的定義：每mi

9、n 氧化藜蘆醇生成1 M 藜蘆醛消耗的酶量。此實(shí)驗(yàn)固態(tài)發(fā)酵LiP 活性計(jì)算公式：3 TOC o 1-5 h z N V總OD31010100mLU（/ mL）V酶9300 T L 0.4mL 5gN：酶液稀釋倍數(shù)總 : 漆酶酶活測(cè)定反應(yīng)體體系的終體積（mL）酶 : 反應(yīng)添加的酶液體積（mL） OD420: t 時(shí)間內(nèi)反應(yīng)液在420nm 處吸光度的增加值9300: 310nm 處摩爾吸光系數(shù)（L/mol cm）T：反應(yīng)時(shí)間（min）L：比色皿的直徑（cm）100mL/（0.4mL 5g）：固態(tài)變成液態(tài)的稀釋倍數(shù)液態(tài)發(fā)酵木質(zhì)素過(guò)氧化物酶（液態(tài)發(fā)酵木質(zhì)素過(guò)氧化物酶（LiP）活性測(cè)定：測(cè)酶活：3mL 反應(yīng)混合液包括3.4mL 酒石酸鈉（250mM， pH 3.0） ， 0.1mL10mM 藜蘆醇，0.4mL 酶樣品。在30 1下溫浴5min 后，于反應(yīng)加入0.1mL10mM H2O2啟動(dòng)酶促反應(yīng)，以煮沸滅活15 min 酶液代替原酶液，以蒸餾水代替H2O2溶液作對(duì)照，測(cè) OD310（ 310= 9.3 3M10-1cm-1）處反應(yīng)5min 前后反應(yīng)液吸光度的變化。一個(gè)酶活力單位（U）的定義：每min 氧化藜蘆醇生成1 M 藜蘆醛消耗的酶量。此實(shí)驗(yàn)固態(tài)發(fā)酵LiP 活性計(jì)算公式：U(/mL)NVU(/mL)NV總OD310103V酶93