嬰幼兒食品和乳品中乳清蛋白的測定（食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)）

1、PAGE 13GB/T 2012 PAGE I食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中乳清蛋白的測定范圍本標(biāo)準(zhǔn)第一法規(guī)定了應(yīng)用高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定乳清蛋白。 本標(biāo)準(zhǔn)第一法適用于除水解或酶解乳蛋白配方外的嬰幼兒配方食品、乳粉和乳中的非變性和熱變性的牛乳清蛋白的含量測定；本標(biāo)準(zhǔn)第二法適用于純牛乳基嬰幼兒配方乳品中乳清蛋白的測定。第一法 高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法原理試樣加入水后渦旋或超聲溶解，冷卻至室溫并定容，精確吸取一定量，并加入同位素內(nèi)標(biāo)，用二硫蘇糖醇（DTT）將蛋白質(zhì)分子中或間的二硫鍵打開，用碘代乙酰胺保護(hù)，加入過量的堿性胰蛋白酶，在37下經(jīng)酶解，選擇牛-乳白蛋白、-乳球蛋白的特異性肽段，經(jīng)反相

2、色譜分離，電噴霧離子源離子化，多反應(yīng)離子監(jiān)測（MRM）方式檢測，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。試劑和材料注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 碳酸氫銨（NH4HCO3）。3.1.2 二硫蘇糖醇（DTT）。3.1.3 碘代乙酰胺（IAA）。3.1.4 氯化鈣（CaCl2）。3.1.5 乙酸。3.1.6 甲酸：色譜純。3.1.7 乙腈：色譜純。3.1.8 牛胰蛋白酶3.2 試劑配制3.2.1 碳酸氫銨溶液：稱取3.95 g 碳酸氫銨固體，用水溶解并稀釋至100 mL；3.2.2 DTT溶液:稱取0.771 g DTT固體，用碳酸氫銨溶液溶解定容

3、至10 mL；3.2.3 IAA溶液：稱取0.925 g IAA固體，用碳酸氫銨溶液溶解定容至10 mL；3.2.4 CaCl2溶液：稱取0.111 g CaCl2固體，用水溶解并稀釋至10 mL；3.2.5 乙酸溶液：移取0.1 mL乙酸，用水稀釋至10 mL；3.2.6 牛胰蛋白酶溶液：稱取5 mg牛胰蛋白酶，用乙酸溶液溶解并定至10 mL；3.2.7 0.1% 甲酸的水溶液：準(zhǔn)確移取1.0 mL甲酸，加入超純水并定容至1000 mL；3.2.8 0.1% 甲酸的乙腈溶液：準(zhǔn)確移取1.0 mL甲酸，加入乙腈并定容至1000 mL；3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 牛-乳白蛋白特異肽段標(biāo)準(zhǔn)固體牛-乳

4、白蛋白特異肽段標(biāo)準(zhǔn)固體，純度不低于99.9 %；3.3.2 牛-乳白蛋白同位素標(biāo)記特異肽段固體 牛-乳白蛋白同位素標(biāo)記特異肽段固體，純度不低于98%；3.3.3 牛-乳白蛋白同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)固體牛-乳白蛋白同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)固體，純度不低于98%；3.3.4 牛-乳球蛋白特異肽段標(biāo)準(zhǔn)固體 牛-乳球蛋白特異肽段標(biāo)準(zhǔn)固體，純度不低于99.9 %；3.3.5 牛-乳球蛋白同位素標(biāo)記特異肽段固體 牛-乳球蛋白同位素標(biāo)記特異肽段固體，純度不低于98%；3.3.6 牛-乳球蛋白同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)固體牛-乳球蛋白同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)固體，純度不低于98%；3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 -乳白蛋白特異肽段標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：稱取

5、牛-乳白蛋白特異肽段粉末6.00 mg（準(zhǔn)確至0.01 mg）于10 mL容量瓶中，用水定容，配制成500 mol/L的儲備溶液。將溶液轉(zhuǎn)移到塑料瓶中，置于- 20電冰箱內(nèi)保存。3.4.2 -乳白蛋白同位素標(biāo)記特異肽段儲備溶液：稱取牛-乳白蛋白同位素特異肽段粉末 6.6 mg（準(zhǔn)確至0.1 mg）于10 mL容量瓶中，用水定容，配制成500 mol/L的儲備溶液。將溶液轉(zhuǎn)移到塑料瓶中，置于- 20電冰箱內(nèi)保存。3.4.3 -乳白蛋白同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)儲備溶液：稱取牛乳-乳白蛋白同位素內(nèi)標(biāo)粉末14.4 mg（準(zhǔn)確至0.1 mg）于10 mL容量瓶中，用水定容，配制成500 mol/L的儲備溶液。將溶

6、液轉(zhuǎn)移到塑料瓶中，置于- 20電冰箱內(nèi)保存。3.4.4 -乳球蛋白特異肽段標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：稱取牛-乳球蛋白特異肽段粉末4.6mg（準(zhǔn)確至0.1 mg）于10 mL容量瓶中，用水定容，配制成500 mol/L的儲備溶液。將溶液轉(zhuǎn)移到塑料瓶中，置于- 20電冰箱內(nèi)保存。3.4.5 -乳球蛋白同位素標(biāo)記特異肽段儲備溶液：稱取牛-乳球蛋白同位素特異肽段粉末4.7 mg（準(zhǔn)確至0.1 mg）于10 mL容量瓶中，用水定容，配制成500 mol/L的儲備溶液。將溶液轉(zhuǎn)移到塑料瓶中，置于-20電冰箱內(nèi)保存。3.4.6 -乳球蛋白同位素內(nèi)標(biāo)儲備溶液：稱取牛-乳球蛋白同位素內(nèi)標(biāo)粉末16.7 mg（準(zhǔn)確至0.1 m

7、g）于10 mL容量瓶中，用水定容，配制成500 mol/L的儲備溶液。將溶液轉(zhuǎn)移到塑料瓶中，置于-20電冰箱內(nèi)保存。3.4.7 特異肽段標(biāo)準(zhǔn)中間混合溶液：分別準(zhǔn)確移取200 L牛-乳白蛋白、-乳球蛋白特異肽段標(biāo)準(zhǔn)儲備液于10 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，獲濃度為10 mol/L的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。 3.4.8 同位素標(biāo)記特異肽段中間混合溶液：分別準(zhǔn)確移取40 L牛-乳白蛋白、-乳球蛋白同位素標(biāo)記特異肽段儲備液于10 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，獲濃度為2 mol/L的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。3.4.9同位素內(nèi)標(biāo)中間混合溶液：分別準(zhǔn)確移取40 L牛-乳白蛋白、-乳球蛋白同位素內(nèi)標(biāo)儲備液于10 mL容量瓶

8、中，加水稀釋至刻度，獲濃度為2 mol/L的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。4 儀器和設(shè)備4.1 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：帶電噴霧離子源；質(zhì)量數(shù)范圍，12000質(zhì)荷比（m/z）；分辨率，0.1原子質(zhì)量單位（AMU）。4.2 色譜柱：硅烷基 C18柱，柱長100 mm，柱內(nèi)徑2.1 mm；填料粒徑1.7 m，孔徑30 nm（300 ）或相當(dāng)者。注：市場購入的色譜柱，將孔徑30 nm 標(biāo)識為300 。4.3 天平：感量0.01 g；0.0001 g。4.4 渦旋混合器：振蕩轉(zhuǎn)速不低于2400 轉(zhuǎn)/分鐘。4.5 超聲波振蕩器。4.6 恒溫水浴搖床。4.7 微量移液器：1 L 10 L、10 L 100 L、100 L

9、1000 L。4.8 具塞試管：10 mL。4.9 0.22 m微孔濾膜。4.10 5mL一次性注射器。5 分析步驟5.1試樣制備稱取固體試樣約2 g或液體試樣約10 g（精確至0.01g，內(nèi)含蛋白質(zhì)200 mg左右）于100 mL容量瓶中，用90 mL水將試樣充分溶解，置于渦旋混合器或超聲波振蕩器中短時(shí)溶解，并用水定容至刻度?；靹蚝鬁?zhǔn)確移取1.0 mL上述試樣定容至10 mL，再次混勻后準(zhǔn)確移取200 L試樣于2 mL離心管中，加入50 L同位素內(nèi)標(biāo)中間溶液、150 L碳酸氫銨溶液、10 L DTT溶液，混勻后置75 下恒溫水浴30 min；冷卻至室溫，加入30 L IAA溶液，暗處靜置30

10、 min；再加入10 L CaCl2溶液、50 L牛胰蛋白酶溶液，充分混勻后置于37恒溫水浴中酶解5小時(shí)。用10 L甲酸終止酶解，室溫下靜置15 min，加入490 L水，渦旋混勻，用0.22 m濾膜過濾，供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測。5.2 儀器參考條件5.2.1 液相色譜參考條件5.2.1.1 流動相A：0.1%甲酸水溶液；動相B：0.1%甲酸乙腈溶液。梯度洗脫：按表1給出的條件洗脫。表1 梯度洗脫條件（色譜分離）時(shí)間min流動相A流動相B梯度變化曲線095%5%00.895%5%11.290%10%62.583%17%62.677%23%63.877%23%14.00%100%64.80%1

11、00%15.095%5%65.2.1.2 流動相流動速度：0.3 mL/min。5.2.1.3 色譜柱柱溫：40 。5.2.1.4 試液溫度：10 。5.2.1.5 進(jìn)樣體積：5 L。5.2.2 質(zhì)譜參考條件5.2.2.1 儀器控制條件：毛細(xì)管電壓：3.5 kv，錐孔電壓：35 kv，脫溶劑溫度：500 ，脫溶劑氣流量：800 L/min，錐孔反吹氣流量：30 L/hr，碰撞室壓力：3.010-3 mbar；低端分辨率1：2.5 V，高端分辨率1：15.0 V，離子能量1：0.5；低端分辨率2：2.8 V，高端分辨率2：15.0 V，離子能量2：1.0；離子源溫度：150，提取器電壓：3.0

12、V，入口透鏡電壓：0.5 V，出口電壓：0.5 V，碰撞梯度：1.0。5.2.2.2 質(zhì)譜檢測條件：表2 MRM的質(zhì)譜參數(shù)化合物名 稱母離子（m/z）子離子m/z碰撞能量eVM+2H 2+-乳白蛋白特異肽段601.1284.37*28355.3724-乳白蛋白同位素特異肽段608.1284.34*26355.3524-乳球蛋白特異肽段458.8616.622503.8*27-乳球蛋白同位素特異肽段465.8623.622503.8*27*為定量離子5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作使用微量移液器吸取特異肽段標(biāo)準(zhǔn)中間混合溶液分別配制濃度為0 nmol/L、5 nmol/L、25 nmol/L、75 nmol

13、/L、150 nmol/L、300 nmol/L和500 nmol/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，每個(gè)濃度點(diǎn)加入50 L的同位素內(nèi)標(biāo)肽段。以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)各濃度點(diǎn)中特異肽段與內(nèi)標(biāo)肽段的峰面積比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；或計(jì)算回歸方程式。牛-乳白蛋白、-乳球蛋白特異肽段及其內(nèi)標(biāo)肽段標(biāo)準(zhǔn)品的色譜質(zhì)譜圖見附錄A的圖A.1。5.4 試液的測定按照5.2.2.1 和 5.2.2.2確立的條件，測定試樣和標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，根據(jù)峰面積比值，內(nèi)標(biāo)法定量試樣中的牛-乳白蛋白和-乳球蛋白特異肽段的濃度，試樣中牛-乳白蛋白和-乳球蛋白特異肽段及其內(nèi)標(biāo)肽段的色譜質(zhì)譜圖見附錄A的圖A.1。平行測定次數(shù)不少于兩次

14、。5.5 空白試驗(yàn)不稱取試樣，按5.1的步驟做空白，確認(rèn)不含有干擾待測組分的物質(zhì)。5.5 總蛋白測定 樣品中總蛋白的測定：在催化加熱條件下使蛋白質(zhì)分解，產(chǎn)生的氨與硫酸結(jié)合生產(chǎn)硫酸銨。堿化蒸餾時(shí)氨游離被硼酸吸收，用硫酸或鹽酸滴定，根據(jù)酸的消耗體積乘以換算系數(shù)計(jì)算，即為蛋白質(zhì)含量。6 結(jié)果計(jì)算6.1 乳清蛋白結(jié)果計(jì)算試樣中牛-乳白蛋白及-乳球蛋白的含量由公式（1）計(jì)算得。 （1）式中：Cx樣品中牛乳-乳白蛋白的濃度，單位為克每百克（g/100g）； M牛-乳白蛋白的分子量14178，牛-乳球蛋白的分子量18320；N樣品稀釋倍數(shù)。nx溶液中牛-乳白蛋白、-乳球蛋白特異肽段的物質(zhì)的量的濃度，單位為納

15、摩每升（nmol/L）。6.2 乳清蛋白含量的計(jì)算試樣中乳清蛋白的含量由公式（2）計(jì)算得。 （2）式中：Cw試樣中乳清蛋白的含量，單位為克每百克（g/100g）；C試樣中牛-乳白蛋白的含量，單位為克每百克（g/100g）；C試樣中牛-乳白蛋白的含量，單位為克每百克（g/100g）；F折算系數(shù)，取值4/3。6.3 總蛋白結(jié)果計(jì)算.（3）Cc試樣中總蛋白的含量，單位為克每百克（g/100g）；V1試樣消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，單位為毫升（mL）；V0試劑空白消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，單位為毫升（mL）；V3吸取消化液的體積，單位為毫升（mL）；c 硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，單位為摩爾每升（m

16、ol/L）；0.01401.0mL硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.000mol/L）相當(dāng)?shù)牡?，單位為克（g）；F 氮換算蛋白質(zhì)的系數(shù)。6.4 乳清蛋白比率的計(jì)算試樣中乳清蛋白占總蛋白的比率由公式（3）計(jì)算得。 （4）式中：X試樣中乳清蛋白占總蛋白的比率，%；Cw試樣中乳清蛋白的含量，單位為克每百克（g/100g）；CC試樣中總蛋白的含量，單位為克每百克（g/100g）。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測XX果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后三位。7 精密度在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測XX果的絕對差值，不得超過算術(shù)平均值的10%。 8 其它本標(biāo)準(zhǔn)第一法牛-乳白蛋白的定量限為0.020 g/

17、100g，牛-乳球蛋白的定量限為0.025 g/100g。第二法 氨基酸臨界值判定法8 原理樣品經(jīng)氧化水解過濾后，濾液經(jīng)衍生劑衍生，衍生物經(jīng)液相色譜儀分離、紫外檢測器檢測，分別測定出五種氨基酸（胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸）的含量。根據(jù)乳清蛋白占乳蛋白60%時(shí)所對應(yīng)的上述氨基酸的臨界值，綜合判定乳清蛋白占乳蛋白的含量是否達(dá)到60%。9 試劑和材料注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水9.1 試劑9.1.1 甲酸銨：優(yōu)級純。9.1.2 過氧化氫。 9.1.3 甲酸。9.1.4 氫溴酸（GB621）。9.1.5 鹽酸。9.1.6 氫氧化鈉。9.

18、1.7 四硼酸鈉。9.1.8 甲酸：色譜純。9.1.9 乙腈：色譜純。9.1.10 N-羥基琥珀酰亞胺-活性雜環(huán)氨基甲酸酯（AQC）或功能相近的其它衍生劑9.2 試劑配制9.2.1 過甲酸溶液：將30%過氧化氫與88%甲酸按1:9混合，于室溫下放置1h后，置冰水浴中冷卻30 min，臨用前配制。9.2.2 鹽酸溶液（6.0 mol/L）:鹽酸與水按1:1混合。9.2.3 鹽酸溶液（1.0mol/L）：90mL鹽酸定容至1000mL。9.2.4 鹽酸溶液（0.1mol/L）：9mL鹽酸定容至1000mL。9.2.5 氫氧化鈉溶液（1.0mol/L）：40g氫氧化鈉溶解定容至1000mL。9.2.

19、6 氫氧化鈉溶液（0.1mol/L）：4g氫氧化鈉溶解定容至1000mL。9.2.7 樣品緩沖溶液（硼酸鈉-硼酸緩沖液）：5%四硼酸鈉+95%的水，調(diào)pH=8.8。9.2.8 參考衍生劑：準(zhǔn)確稱取10 mg的N-羥基琥珀酰亞胺-活性雜環(huán)氨基甲酸酯（AQC）或功能相近的其它衍生劑用1 mL乙腈溶解。9.2.9 流動相A：準(zhǔn)確稱取甲酸銨3.153 g，用水定容到1000 mL，用甲酸調(diào)pH=5.00，此溶液為50 mmol/L。9.2.10 流動相B：乙腈。9.2.11 流動相C：超純水。9.3 標(biāo)準(zhǔn)品9.3.1 磺基丙氨酸（簡稱Cya）磺基丙氨酸，純度99%。9.3.2 天冬氨酸（簡稱ASP）天

20、冬氨酸，純度99%。9.3.3 丙氨酸（簡稱ALA）丙氨酸，純度99%。9.3.4 脯氨酸（簡稱PRO） 脯氨酸，純度99%。9.3.5 苯丙氨酸（簡稱PHE）苯丙氨酸，純度99%。9.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制9.4.1 標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：分別準(zhǔn)確稱取氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品磺基丙氨酸0.0846 g，天冬氨酸0.066 g，丙氨酸0.0446 g，脯氨酸0.0576 g，苯丙氨酸0.0826 g（精確至0.0001 g），用0.1 mol/L鹽酸溶解并定容于50 mL容量瓶中，各標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液為10.0 mol/mL。9.4.2 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別依次吸取上述標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.5 mL 、1.0 mL、5.0 mL、1

21、0.0 mL、20.0 mL于100 mL容量瓶中，用超純水稀釋并定容至刻度，配置成濃度為0.05、0.10、0.50、1.00、2.00 （mol/mL）混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。10 儀器和設(shè)備10.1 超高效液相色譜儀或高效液相色譜儀，帶紫外檢測器。10.2 天平：感量為0.1 mg。10.3 pH計(jì)：精度為0.01。10.4 渦旋混合器。10.5 氮吹儀。10.6 培養(yǎng)箱。10.7 恒溫干燥箱。10.8 減壓蒸餾裝置。10.9 超聲波振蕩器11 分析步驟11.1 試樣的制備11.1.1 氨基酸試樣制備11.1.1.1 稱樣和氧化稱取混合均勻的含蛋白質(zhì)7.5 mg -25 mg的樣品（精確至0.0

22、001 g）于水解管中，在冰水浴中冷卻30 min后加入2 mL已經(jīng)冷卻的過甲酸溶液，蓋好瓶塞后置于0 1 冰箱中，冰浴16 h。向各水解管中加入0.3 mL氫溴酸，振搖后冰浴30 min，在60 2 氮吹儀上濃縮至干或在60 2 下減壓蒸餾至干。11.1.1.2 水解向水解管內(nèi)加入6 mol/L鹽酸8 mL15 mL，充入氮?dú)?min后，擰緊螺絲蓋，將水解管放在1101的恒溫干燥箱內(nèi)水解24 h后取出冷卻至室溫。將水解液用超純水轉(zhuǎn)移并定容至25 mL容量瓶中，混勻，濾紙過濾。吸取濾液1 mL于指型瓶中，在60 2 氮吹儀上濃縮至干或在低于50 下減壓蒸餾至干。殘留物用1 mL超純水溶解，即為

23、試樣溶液。11.1.2 游離氨基酸試樣制備準(zhǔn)確稱取混合均勻的樣品約2.5 g（精確至0.0001 g）于100 mL錐形瓶中，加入約25 mL45 50 溫水溶解。降至室溫后用鹽酸溶液調(diào)節(jié)樣品溶液的pH值至1.70.1，放置約1 min；再用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)樣品溶液的pH值至4.50.1，超聲振蕩約10 min，用水轉(zhuǎn)移并定容至50 mL容量瓶中混勻。濾紙過濾后經(jīng)0.22 m濾膜過濾，濾液即為試樣溶液。11.2 參考色譜條件：色譜柱：UPLC BEH C18色譜柱，2.1100 mm，1.7 m或其它性能相近的色譜柱 流速：0.6 mL/min進(jìn)樣體積：1 L紫外檢測器：波長248 nm柱溫：

24、60 樣品室溫度：10 參考衍生條件：分別取試樣溶液及混合標(biāo)準(zhǔn)工作液各10 L，各加入70 L樣品緩沖液，振蕩混勻。邊振蕩邊加入20 L衍生劑，振蕩后于55 1 培養(yǎng)箱中放置10 min，即得標(biāo)準(zhǔn)工作衍生液及樣品待測液。表1 四元泵梯度洗脫表時(shí)間（min）流速（mL /min）%A%B%C%D曲線10.610000020.300.699.50.5001133.500.696.53.500545.000.694.55.500755.700.692.08.000466.200.692.08.000777.740.678.821.200688.500.6059.640.401199.000.6059

25、.640.4061011.000.6100010001表2 二元泵梯度洗脫表時(shí)間（min）流速（mL /min）%A%B曲線10.6100020.220.699.50.51133.420.696.53.5544.920.694.55.5755.620.692.08.0466.120.692.08.0777.660.678.821.2688.420.640601199.000.6100061011.000.61000111.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)工作液衍生液分別注入到超高效液相色譜儀中得到標(biāo)準(zhǔn)工作液的峰面積（或峰高），以標(biāo)準(zhǔn)工作液的峰面積（或峰高）為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度（mol/mL）為橫

26、坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見附錄B中圖B1。11.4 樣品溶液的測定將樣品待測液注入到超高效液相色譜儀中得到峰面積（或峰高），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品待測液的濃度（mol/mL）。11.5 總蛋白的測定樣品中總蛋白的測定：在催化加熱條件下使蛋白質(zhì)分解，產(chǎn)生的氨與硫酸結(jié)合生產(chǎn)硫酸銨。堿化蒸餾時(shí)氨游離被硼酸吸收，用硫酸或鹽酸滴定，根據(jù)酸的消耗體積乘以換算系數(shù)計(jì)算，即為蛋白質(zhì)含量。11.6 非蛋白氮的測定樣品中非蛋白氮的測定：用15%的三氯乙酸溶液沉淀蛋白質(zhì)，濾液經(jīng)消化，蒸餾后，用0.01mol/L鹽酸滴定，計(jì)算氮含量，即為樣品中非蛋白氮含量。12 分析結(jié)果的表述 12.1 氨基酸的計(jì)算樣品中各氨

27、基酸占乳蛋白的含量按下列公式計(jì)算： ，（1） .，（2） .（3） .（4） .（5）式中：X樣品中氨基酸的含量，單位為克每百克蛋白質(zhì)（g/100g蛋白質(zhì)）。X1樣品中總氨基酸的含量，單位為克每百克蛋白質(zhì)（g/100g蛋白質(zhì)）。X2樣品中游離氨基酸的含量，單位為克每百克蛋白質(zhì)（g/100g蛋白質(zhì)）。C1從標(biāo)準(zhǔn)曲線中獲得試樣總氨基酸測定液的濃度，單位為微摩每毫升（mol/mL）。C2從標(biāo)準(zhǔn)曲線中獲得游離氨基酸測定液的濃度，單位為微摩每毫升（mol/mL）。 m1稱取的測定水解氨基酸樣品的質(zhì)量，單位為克（g）。m2稱取的測定游離氨基酸的樣品的質(zhì)量，單位為克（g）。 MAA各氨基酸的摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾（g/mol）。Vi測定水解氨基酸樣品的體積，單位