組織培養(yǎng)的方法和步驟

1、組織培養(yǎng)的方法和步驟日期：2010年4月1日 來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng)作者：植物組培網(wǎng)點(diǎn)擊：3033要根據(jù)培養(yǎng)目的適當(dāng)選取材料，選擇原則：易于誘導(dǎo)、帶菌少。要選取植物組織內(nèi)部無(wú)菌的材料。這一方 面要從健壯的植株上取材料，不要取有傷口的或有病蟲(chóng)的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取 材料，決不要在雨天、陰天或露水未干時(shí)取材料。因?yàn)榻训闹仓旰颓缣旃夂虾粑⒌慕M織，有自身消 毒作用，這種組織一般是無(wú)菌的。培養(yǎng)材料的消毒從外界或室內(nèi)選取的植物材料，都不同程度地帶有各種微生物。這些污染源一旦帶人培養(yǎng)基，便會(huì)造成 培養(yǎng)基污染。因此，植物材料必須經(jīng)嚴(yán)格的表面滅菌處理，再經(jīng)無(wú)菌操作手續(xù)接到培養(yǎng)基上。第一步，將采

2、來(lái)的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細(xì)洗干凈，如用適當(dāng)?shù)乃⒆拥人⑾础０巡?料切割成適當(dāng)大小，即滅菌容器能放人為宜。置自來(lái)水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數(shù)小時(shí)，沖洗時(shí)間視材料 清潔程度而宜。易漂浮或細(xì)小的材料，可裝入紗布袋內(nèi)沖洗。流水沖洗在污染嚴(yán)重時(shí)特別有用。洗時(shí)可加 入洗衣粉清洗，然后再用自來(lái)水沖凈洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表面的污物，除去脂質(zhì)性的 物質(zhì)，便于滅菌液的直接接觸。當(dāng)然，最理想的清洗物質(zhì)是表面活性物質(zhì)一吐溫。第二步是對(duì)材料的表面浸潤(rùn)滅菌。要在超凈臺(tái)或接種箱內(nèi)完成，準(zhǔn)備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒 精、消毒液、無(wú)菌水、手表等。用70%酒精浸1030s。由于酒精具有使植物材

3、料表面被浸濕的作用， 加之70%酒精穿透力強(qiáng)，也很易殺傷植物細(xì)胞，所以浸潤(rùn)時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)。有一些特殊的材料，如果實(shí)、花 蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內(nèi)部的材料，則可只用70%酒精處 理稍長(zhǎng)的時(shí)間。處理完的材料在無(wú)菌條件下，待酒精蒸發(fā)后再剝除外層，取用內(nèi)部材料。第三步是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多，可根據(jù)情況選取12種使用見(jiàn)表。第四步是用無(wú)菌 水涮洗，涮洗要每次3min左右，視采用的消毒液種類，涮洗3-10次左右。無(wú)菌水涮洗作用是免除消毒劑 殺傷植物細(xì)胞的副作用注意：酒精滲透性強(qiáng)，幼嫩材料易在酒精中失綠，所以浸泡時(shí)間要短，防止酒精 殺死植物細(xì)胞。老熟材料，特

4、別是種子等可以在酒精中浸泡時(shí)間長(zhǎng)一些，如種子可以浸泡5分鐘。升 汞的滲透力弱，一般浸泡10分鐘左右，對(duì)植物材料的殺傷力不大。漂白粉容易導(dǎo)致植物材料失綠，所 以對(duì)于幼嫩材料要慎用。在消毒液中加入濃度為0.080.12%的吐溫20或80 （一種濕潤(rùn)劑），可以 降低植物材料表面的張力，達(dá)到更好的消毒效果。滅菌劑 使用濃度（%）持續(xù)時(shí)間（min）去除的難易效 果次氯酸鈣910 530易很好次氯酸鈉2 530易很好氯化汞0.11 58較難最好抗菌素450mg/L 3060中較好制備外植體將已消毒的材料，用無(wú)菌刀、剪、鑷等，在無(wú)菌的環(huán)境下，剝?nèi)パ康镊[片、嫩枝的外皮和種皮胚乳等， 葉片則不需剝皮。在操作中嚴(yán)

5、禁用手觸動(dòng)材料。接種和培養(yǎng)（一）接種在無(wú)菌壞境下，將切好的外植體立即接在培養(yǎng)基上，每瓶接種1 2個(gè)，以防止交叉污染。（二）封口接種后，瓶、管用無(wú)菌藥棉或蓋封口，培養(yǎng)皿用無(wú)菌膠帶封口。（三）溫度培養(yǎng)基大多應(yīng)保持在25C左右，但要因花卉種類及材料部位的不同而區(qū)別對(duì)待。增殖外植體的增殖是組培的關(guān)鍵階段，在新梢等形成后為了擴(kuò)大繁殖系數(shù)，需要繼代培養(yǎng)。把材料分株或切 段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基一般在分化培養(yǎng)基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1個(gè)月左右 后，可視情況進(jìn)行再增殖。根的誘導(dǎo)繼代培養(yǎng)形成的不定芽和側(cè)芽等一般沒(méi)有根，必須轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。1個(gè)月后即可獲得 鍵壯根系。組培苗的煉苗

6、移栽試管苗從無(wú)菌到光、溫、濕穩(wěn)定的環(huán)境進(jìn)入自然環(huán)境，必須進(jìn)行煉苗。一般移植前， 先將培養(yǎng)容器打開(kāi)，于室內(nèi)自然光照下放3天，然后取出小苗，用自來(lái)水把根系上的營(yíng)養(yǎng)基沖洗干凈，再 栽入已準(zhǔn)備好的基質(zhì)中，基質(zhì)使用前最好消毒。移栽前要適當(dāng)遮蔭，加強(qiáng)水分管理，保持較高的空氣濕度 （相對(duì)濕度98%左右），但基質(zhì)不宜過(guò)濕，以防爛苗。組織培養(yǎng)中的清洗、消毒滅菌技術(shù)日期：2010年4月1日 來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng)作者：植物組培網(wǎng)點(diǎn)擊：21901、清洗植物組織培養(yǎng)用的各種玻璃器皿，特別是培養(yǎng)瓶和盛培養(yǎng)基的器皿，一定要嚴(yán)格清洗，以防油污、 重金屬離子、酸、堿等有害物質(zhì)殘留在瓶?jī)?nèi)，影響培養(yǎng)物的生長(zhǎng)。使用過(guò)的玻璃器皿應(yīng)及時(shí)清洗，先

7、將污 物如培養(yǎng)基、培養(yǎng)物倒掉，再浸入水中，然后洗滌。玻璃器皿的洗滌，可根據(jù)器皿的污染程度和性質(zhì)，采 用不同的方法，通常有堿洗法和酸洗法。凡有微生物污染的器皿，必須先進(jìn)行高壓消毒和煮沸，以殺死菌 體，否則會(huì)產(chǎn)生孢子飛揚(yáng)，污染環(huán)境，給組織培養(yǎng)帶來(lái)嚴(yán)重困難。器皿洗凈后，應(yīng)烘干或晾干，放在規(guī)定 的地方，便于取用。常用的滅菌方法可分為物理的和化學(xué)的兩類，即：物理方法如干熱（烘燒和灼燒）、濕熱（常壓或高壓蒸 煮）、射線處理（紫外線、超聲波、微波）、過(guò)濾、清洗和大量無(wú)菌水沖洗等措施；化學(xué)方法是使用升汞、甲 醛、過(guò)氧化氫、高錳酸鉀、來(lái)蘇兒、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學(xué)藥品處理。這些方法和藥劑要 根據(jù)工作

8、中的不同材料不同目的適當(dāng)選用濕熱滅菌（培養(yǎng)基）培養(yǎng)基在制備后的24h內(nèi)完成滅菌工序。高 壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸氣不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋 內(nèi)溫度也隨之增加。在o. 1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121C。在此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細(xì) 菌及其高度耐熱的芽孢。注意完全排除鍋內(nèi)空氣，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有 幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內(nèi)均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關(guān)閉放氣閥， 通電后，待壓力上升到O. 05MPa時(shí)，打開(kāi)放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。三 次放氣后，關(guān)閥再通電，壓力表上

9、升達(dá)0. 1-0. 15Mpa時(shí)，維持15-20min。對(duì)高壓滅菌后不變質(zhì)的 物品，如無(wú)菌水、栽培介質(zhì)、接種用具，可以延長(zhǎng)滅菌時(shí)間或提高壓力。而培養(yǎng)基要嚴(yán)格遵守保壓時(shí)間， 既要保壓徹底，又要防止培養(yǎng)基中的成分變質(zhì)或效力降低，不能隨意延長(zhǎng)時(shí)間。對(duì)于一些布制品，如實(shí)驗(yàn) 服、口罩等也可用高壓滅菌。洗凈晾干后用耐高壓塑料袋裝好，高壓滅菌20-30min。高壓滅菌前后的培 養(yǎng)基，其pH值下降0.2-0.3單位。高壓后培養(yǎng)基pH值的變化方向和幅度取決于多種因素。在高壓滅菌 前用堿調(diào)高pH值至預(yù)定值的則相反。培養(yǎng)基中成分單一時(shí)和培養(yǎng)基中含有高或較高濃度物質(zhì)時(shí)，高壓滅 菌后的pH值變化幅度較大，甚至可大于2個(gè)

10、pH值單位。環(huán)境pH值的變化大于0.5單位就有可能產(chǎn)生 明顯的生理影響。高壓滅菌通常會(huì)使培養(yǎng)基中的蔗糖水解為單糖，從而改變培養(yǎng)基的滲透壓。在8%-20% 蔗糖范圍內(nèi)，高壓滅菌后的培養(yǎng)基約升高0. 43倍。培養(yǎng)基中的鐵在高壓滅菌時(shí)會(huì)催化蔗糖水解，可使 15%-25%的蔗糖水解為葡萄糖和果糖。培養(yǎng)基值小于5.5,其水解量更多，培養(yǎng)基中添加0.1%活性炭 時(shí)，高壓下蔗糖水解大大增強(qiáng)，添加1%活性炭，蔗糖水解率可達(dá)5%。灼燒滅菌（用于無(wú)菌操作的器械）在無(wú)菌操作時(shí)，把鑷子、剪子、解剖刀等浸入95%的酒精中，使 用之前取出在酒精燈火焰卜灼燒火菌。冷卻后，立即使用。操作中可采用250或500ml的廣口瓶，放

11、入 95%的酒精，以便插入工具。干熱滅菌（玻璃器皿及耐熱用具）干熱滅菌是利用烘箱加熱到160-180C的溫度來(lái)殺死微生物。由 于在干熱條件下，細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的抗熱性大為提高，接近芽抱的抗熱水平，通常采用170C持續(xù)90min 來(lái)滅菌。干熱滅菌的物品要預(yù)先洗凈并干燥，工具等要妥為包扎，以免滅菌后取用時(shí)重新污染。包扎可用 耐高溫的塑料。滅菌時(shí)應(yīng)漸進(jìn)升溫，達(dá)到頂定溫度后記錄時(shí)間。烘箱內(nèi)放置的物品的數(shù)量不宜過(guò)多，以免 妨礙熱對(duì)流和穿透，到指定時(shí)間斷電后，待充分冷涼，才能打開(kāi)烘箱，以免因驟冷而使器皿破裂。干熱滅 菌能源消耗太大，浪費(fèi)時(shí)間。過(guò)濾滅菌（不耐熱的物質(zhì)）一些生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，如赤霉素、玉米素、脫落酸和

12、某些維生素是不耐熱的， 不能用高壓滅菌處理，通常采用過(guò)濾滅菌方法?？捎脽o(wú)菌的孔徑0.20-0.45um的硝酸纖維素膜過(guò)濾菌類， 當(dāng)溶液通過(guò)濾膜后，細(xì)菌的細(xì)胞和真菌的孢子等因大于濾膜直徑而被阻，在需要過(guò)濾滅菌的液體量大時(shí)， 常使用抽濾裝置；液量小時(shí)，可用注射器。使用前對(duì)其高壓滅菌，將濾膜裝在注射器的靠針管處，將待過(guò) 濾的液體裝入注射器，推壓注射器活塞桿，溶液壓出濾膜，從針管壓出的溶液就是無(wú)菌溶液。紫外線和熏蒸滅菌（空間）（l）紫外線滅菌在接種室、超凈臺(tái)上或接種箱里用紫外燈滅菌。紫外線滅 菌是利用輻射因子滅菌，細(xì)菌吸收紫外線后，蛋白質(zhì)和核酸發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，引起細(xì)菌的染色體變異，造成 死亡。紫外線的波

13、長(zhǎng)為200300nm，其中以260nm的殺菌能力最強(qiáng)，但是由于紫外線的穿透物質(zhì)的 能力很弱，所以只適于空氣和物體表面的滅菌，而且要求距照射物以不超過(guò)1.2m為宜。（2）熏蒸滅菌用加熱焚燒、氧化等方法，使化學(xué)藥劑變?yōu)闅怏w狀態(tài)擴(kuò)散到空氣中，以殺死空氣和物體表 面的微生物。這種方法簡(jiǎn)便，只需要把消毒的空間關(guān)閉緊密即可。常用熏蒸劑是甲醛，熏蒸時(shí)，房間關(guān)閉 緊密，按58ml/m3用量，將甲醛置于廣口容器中，加5g/m3高錳酸鉀氧化揮發(fā)。熏蒸時(shí)，房間可預(yù) 先噴濕以加強(qiáng)效果。冰醋酸也可進(jìn)行加熱熏蒸，但效果不如甲醛。化學(xué)消毒劑的種類很多，它們使微生物 的蛋白質(zhì)變性，或競(jìng)爭(zhēng)其酶系統(tǒng)，或降低其表面張力，增加菌體細(xì)

14、胞漿膜的通透性，使細(xì)胞破裂或溶解。 一般說(shuō)來(lái)，溫度越高，作用時(shí)間越長(zhǎng)，殺菌效果越好。另外，由于消毒劑必須溶解于水才能發(fā)揮作用，所 以要制成水溶狀態(tài)，如升汞與高錳酸鉀。還有消毒劑的濃度一般是濃度越大，殺菌能力越強(qiáng)，但石炭酸和 酒精例外。噴霧滅菌（物體表面）物體表面可用一些藥劑涂擦、噴霧滅菌。如桌面、墻面、雙手、植物材料表面等， 可用70%的酒精反復(fù)涂擦滅菌，l%-2%的來(lái)蘇兒溶液以及0.25% 1%的新潔爾滅也可以。3、無(wú)菌操作植物組織培養(yǎng)是一種無(wú)菌技術(shù)，因此不僅要求整個(gè)操作過(guò)程，一切用具、材料、培養(yǎng)基、培養(yǎng)室、工作 人員的衣物都要無(wú)菌，而且要求工作人員在操作過(guò)程中要遵守?zé)o菌操作的規(guī)程，如少有疏

15、忽，都會(huì)造成無(wú) 法挽回的后果，使工作前功盡棄。工作人員在進(jìn)行無(wú)菌操作是要嚴(yán)守以下幾點(diǎn)：a.入無(wú)菌室前，要洗手，去掉指甲中的污物。上入室時(shí)要穿上經(jīng)過(guò)消毒的工作服、帽子、口罩和鞋子等。操作前要用70的酒精擦洗工作人員的手，操作中要經(jīng)常用酒精擦洗手。不準(zhǔn)講話，亦不準(zhǔn)對(duì)著操作 區(qū)呼吸，以免微生物污染材料、培養(yǎng)基和用具。每次重新操作都要把工具在火焰上消毒。必須在酒精燈火焰處進(jìn)行操作，如打開(kāi)瓶口，轉(zhuǎn)接材料。蓋瓶蓋前應(yīng)將瓶口在火焰上燒一下，再將蓋 子也在火焰上燒一下，然后蓋上。培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及措施日期：2010年4月1日 來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng)作者：植物組培網(wǎng)點(diǎn)擊：2064一：培養(yǎng)物的不良及改進(jìn)培養(yǎng)物水浸狀、變色、

16、壞死、莖斷面附近干枯可能原因：表面殺菌劑過(guò)量，消毒時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，外植體選用不當(dāng)（部位或時(shí)期）。改進(jìn)措施：調(diào)換其他殺菌劑或降低濃度，縮短消毒時(shí)間，試用其他部位，生長(zhǎng)初期取材。培養(yǎng)物長(zhǎng)期培養(yǎng)幾乎無(wú)反應(yīng)可能原因：基本培養(yǎng)基不適宜，生長(zhǎng)素不當(dāng)或用量不足，溫度不適宜。改進(jìn)措施：更換基本培養(yǎng)基或調(diào)整培養(yǎng)基成分，尤其是調(diào)整鹽離子濃度，增加生長(zhǎng)素用量，試用2,4-D， 調(diào)整培養(yǎng)溫度。愈傷組織生長(zhǎng)過(guò)旺、疏松，后期水浸狀可能原因：激素過(guò)量，溫度偏高，無(wú)機(jī)鹽含量不當(dāng)。改進(jìn)措施：減少激素用量，適當(dāng)降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整無(wú)機(jī)鹽（尤其是銨鹽）含量，適當(dāng)提高瓊脂用量增 加培養(yǎng)基硬度。愈傷組織太緊密、平滑或突起，粗厚，生長(zhǎng)緩慢可能原

17、因：細(xì)胞分裂素用量過(guò)多，糖濃度過(guò)高，生長(zhǎng)素過(guò)量。改進(jìn)措施：減少細(xì)胞分裂素用量，調(diào)整細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素比例，降低糖濃度。側(cè)芽不萌發(fā)，皮層過(guò)于膨大，皮孔長(zhǎng)出愈傷組織可能原因:枝條過(guò)嫩，生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素用量過(guò)多。改進(jìn)措施：減少激素用量，采用較老化枝條。二：培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改進(jìn)措施（繼代培養(yǎng)階段）苗分化數(shù)量少、速度慢、分枝少、個(gè)別苗生長(zhǎng)細(xì)高可能原因：細(xì)胞分裂素用量不足，溫度偏高，光照不足。改進(jìn)措施：增加細(xì)胞分裂素用量，適當(dāng)降低溫度，改善光照，改單芽繼代為團(tuán)塊（叢芽）繼代。苗分化過(guò)多，生長(zhǎng)慢，有畸形苗，節(jié)間極短，苗叢密集，微型化可能原因：細(xì)胞分裂素用量過(guò)多，溫度不適宜。改進(jìn)措施：減少或停用細(xì)胞分裂素

18、一段時(shí)間，調(diào)節(jié)溫度。分化率低，畸形，培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)時(shí)苗再次愈傷組織化可能原因:生長(zhǎng)素用量偏高，溫度偏高。改進(jìn)措施：減少生長(zhǎng)素用量，適當(dāng)降溫。葉粗厚變脆可能原因：生長(zhǎng)素用量偏高，或兼有細(xì)胞分裂素用量偏高。改進(jìn)措施：適當(dāng)減少激素用量，避免葉片接觸培養(yǎng)基。再生苗的葉緣、葉面等外偶有不定芽分化出來(lái)可能原因：細(xì)胞分裂素用量偏高，或表明該種植物適于該種再生方式。改進(jìn)措施：適當(dāng)減少細(xì)胞分裂素用量，或分階段地利用這一再生方式。叢生苗過(guò)于細(xì)弱，不適于生根或移栽可能原因：細(xì)胞分裂素濃度過(guò)高或赤霉素使用不當(dāng)，溫度過(guò)高，光照短，光強(qiáng)不足，久不轉(zhuǎn)移，生長(zhǎng)空 間窄。改進(jìn)措施：減少細(xì)胞分裂素用量，免用赤霉素，延長(zhǎng)光照時(shí)間，增強(qiáng)

19、光照，及時(shí)轉(zhuǎn)接，降低接種密度， 更換封瓶紙的種類。幼苗淡綠，部分失綠可能原因：無(wú)機(jī)鹽含量不足，PH值不適宜，鐵、錳、鎂等缺少或比例失調(diào)，光照、溫度不適。改進(jìn)措施：針對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素虧缺情況調(diào)整培養(yǎng)基，調(diào)好PH值，調(diào)控溫度、光照。幼苗生長(zhǎng)無(wú)力、發(fā)黃落葉、有黃葉、死苗夾于叢生苗中可能原因：瓶?jī)?nèi)氣體狀況惡化，PH值變化過(guò)大，久不轉(zhuǎn)接導(dǎo)致糖已耗盡，營(yíng)養(yǎng)元素虧缺失調(diào)，溫度不適， 激素配比不當(dāng)。改進(jìn)措施：及時(shí)轉(zhuǎn)接、降低接種密度，調(diào)整激素配比和營(yíng)養(yǎng)元素濃度，改善瓶?jī)?nèi)氣體狀況，控制溫度。三：培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改進(jìn)措施（生根階段）培養(yǎng)物久不生根，基部切口沒(méi)有適宜的愈傷組織可能原因：生長(zhǎng)素種類、用量不適宜；生根部位勇氣

20、不良；生根程序不當(dāng)；PH值不適，無(wú)機(jī)鹽濃度及配 比不當(dāng)。改進(jìn)措施：改進(jìn)培養(yǎng)程序，選用適宜的生長(zhǎng)素或增加生長(zhǎng)素用量，適當(dāng)降低無(wú)機(jī)鹽濃度，改用濾紙橋液 培養(yǎng)生根等。愈傷組織生長(zhǎng)過(guò)快、過(guò)大，根莖部腫脹或畸形，幾條根并聯(lián)或愈合。可能原因：生長(zhǎng)素種類不適，用量過(guò)高，或伴有細(xì)胞分裂素用量過(guò)高，生根誘導(dǎo)培養(yǎng)程序不對(duì)。改進(jìn)措施：調(diào)換生長(zhǎng)素種類或幾種生長(zhǎng)素配合使用，降低使用濃度，附加VB2或PG等減少愈傷，改變 生根培養(yǎng)程序等。組培苗的褐化問(wèn)題日期：2010年4月1日 來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng)作者：植物組培網(wǎng)點(diǎn)擊：2034很多種類的植物體中含有大量多酚類化合物，切取芽時(shí)的創(chuàng)傷會(huì)激活組織中的多酚氧化酶，將多酚類 物質(zhì)氧化為棕

21、褐色的醌類物質(zhì)，使外植體的切口處發(fā)生褐變，并會(huì)滲透到培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基褐化，其結(jié) 果是嚴(yán)重影響培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和分化，甚至造成培養(yǎng)物死亡。影響褐變的因素很多，植物的種類褐基因型、外植體的來(lái)源和生理狀況以及培養(yǎng)基的成分都會(huì)不同程 度的影響褐變的程度。一般木本植物的外植體比較容易產(chǎn)生褐變現(xiàn)象，在成年樹(shù)尤其嚴(yán)重。培養(yǎng)基中含酚 過(guò)高會(huì)導(dǎo)致褐變，含過(guò)高濃度的無(wú)機(jī)鹽和肌醇也會(huì)加劇外植體的褐變。6-芐氨基嘌吟（6-BA）和激動(dòng)素（KT） 也有誘導(dǎo)褐化的作用。強(qiáng)光和高溫同樣會(huì)促進(jìn)褐化現(xiàn)象。為了防止外植體的褐變，需要選取酚類化合物含量較低的實(shí)驗(yàn)材料，選擇無(wú)機(jī)鹽含量較低，不加肌醇 的培養(yǎng)基，并在較弱的光線或黑暗的條件

22、中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)基中加入抗氧化劑是防止褐變的有效措施。常用的抗氧化劑有抗壞血酸（VC）、檸檬酸、半胱氨 酸、二硫蘇糖醇和聚乙烯毗咯烷酮（PVP）等?？捎每寡趸瘎┤芤侯A(yù)先處理外植體，或者在抗氧化劑溶液 中切割和剝離外植體。必要時(shí)還可以將幾種抗氧化劑結(jié)合使用。也可以將抗氧化劑加入到培養(yǎng)基中。另一 種方法是在培養(yǎng)基中加入0.51%的活性炭，吸附對(duì)生長(zhǎng)有抑制作用的褐色醌類物質(zhì)。應(yīng)當(dāng)注意的是：活 性炭也能吸附培養(yǎng)基中的激素類物質(zhì)，影響莖尖的分化和生長(zhǎng)，因此在使用活性炭的場(chǎng)合，需要適當(dāng)提高 培養(yǎng)基中激素的濃度。還有一種辦法是不斷地（每隔12d）將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上，以擺脫老 培養(yǎng)基中褐色物質(zhì)的不

23、利影響。在使用液體培養(yǎng)基的情況下，這種方法相當(dāng)有效。在培養(yǎng)基中添加活性碳可以防止植物組織自身的酚類物質(zhì)排泌和變褐老化。對(duì)形態(tài)發(fā)生和器官形成有良 好作用。一般認(rèn)為，活性碳主要吸附非極性物質(zhì)及色素大分子，可以減少一些有害物質(zhì)的影響，但是具體 吸附的選擇性很差，溫度低時(shí)吸附力增強(qiáng)，溫度高是吸附力減弱，甚至?xí)馕健ＭǔＪ褂脻舛葹?0.5-10g/L。加入活性炭后使培養(yǎng)基變黑，對(duì)一些植物誘導(dǎo)生根有利。大量活性炭的加入會(huì)削弱瓊脂的凝 固能力，因此要多加些瓊脂。很細(xì)的活性炭容易沉淀，因此通常在瓊脂將要凝固時(shí)，需輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶。植物外植體組織在接種時(shí)的切割面會(huì)溢泌一些酚類物質(zhì)，在接觸空氣中的氧氣后其會(huì)氧化為

24、相應(yīng)的醌類 物質(zhì)，產(chǎn)生可見(jiàn)的茶色、褐色或黑色，此即謂酚污染”。在木本植物，尤其是熱帶木本植物及少量草本植 物中，此現(xiàn)象較為嚴(yán)重。常用的防治措施如下：試用抗酚類氧化的藥劑（半胱氨酸及其鹽酸鹽、二硫蘇糖醇、谷胱甘肽、抗壞血酸等。該類藥劑一般需 用濃度為50-200mg/L。用經(jīng)過(guò)濾滅菌的藥液洗滌剛切割的外植體傷口表面，或加入固體培養(yǎng)基的表層， 或?qū)偳懈畹耐庵搀w浸入其中一定時(shí)間）適當(dāng)降低培養(yǎng)基溫度。接種后先進(jìn)行一定時(shí)間的暗培養(yǎng)。及時(shí)轉(zhuǎn)接入新鮮培養(yǎng)基。巳選擇切取外植體部位等。經(jīng)驗(yàn)之談：1、易發(fā)生褐化的作物在進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，先進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)（即培養(yǎng)在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中）23天（如果分泌物 多，如利用花魔芋的球莖

25、進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，適當(dāng)延長(zhǎng)預(yù)培養(yǎng)時(shí)間并多次更換培養(yǎng)基），再培養(yǎng)到添加了激 素的培養(yǎng)基上。組培苗的玻璃化問(wèn)題日期：2010年4月1日 來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng)作者：植物組培網(wǎng)點(diǎn)擊：1876在進(jìn)行植物組織培養(yǎng)時(shí)，經(jīng)常會(huì)發(fā)現(xiàn)試管苗生長(zhǎng)異常，表現(xiàn)為試管苗葉、嫩梢呈水晶透明或半透時(shí)，水浸 狀；整株矮小腫脹、失綠；葉片皺縮成縱向卷曲、脆弱易碎；葉表缺少角質(zhì)層蠟質(zhì)，沒(méi)有功能性氣孔，不 具有柵欄組織，僅有海綿組織。這種試管苗生長(zhǎng)異常現(xiàn)象就是P.Debergh（1981）首先命名的玻璃化” （Vitrification）。是植物組織培養(yǎng)過(guò)程中所特有的一種生理失調(diào)或生理病變。玻璃苗中因其體內(nèi)含水量高，干物質(zhì)、葉綠素、蛋白質(zhì)、纖

26、維素和森質(zhì)素含量低、角質(zhì)層、柵欄組織 等發(fā)育不全，表現(xiàn)為光合能力和酶活性降低，組織畸形，器官功能不全，分化能力降低，所以很難繼續(xù)用 作繼代培養(yǎng)和擴(kuò)大繁殖的材；生根困難，移栽后也很難成活。植物微體快速繁殖時(shí)玻璃苗的出現(xiàn)已成為一 種很普遍的現(xiàn)象，該苗有時(shí)多達(dá)50%以上，嚴(yán)重影響繁殖率的提高，已成為莖尖脫毒、工廠化育苗和材料 保存等方面的嚴(yán)重障礙，造成人、財(cái)、物的極大浪費(fèi)，所以試管苗下班化現(xiàn)象對(duì)植物組織培養(yǎng)的危害是相 當(dāng)嚴(yán)重的，也是亟待解決的問(wèn)題。（一）玻璃苗發(fā)生的因素瓊脂和蔗糖濃度與玻璃化成負(fù)相關(guān)，瓊脂或蔗糖濃度越高，玻璃苗的比率越低。Daniel G. W. Brown認(rèn)

27、為玻璃化可能是培養(yǎng)基滲透勢(shì)不當(dāng)所致。碳源不僅為芽的形成提供能量，而且也起滲透調(diào)節(jié)作用，主要影響培養(yǎng)基的滲勢(shì)（Salisbury等）。隨瓊脂濃度及純度的增加， 培養(yǎng)基硬度增加，從而影響其襯質(zhì)勢(shì)和水分狀況。Debergh等研究表明，液體培養(yǎng)基的水勢(shì)影響玻璃苗的 形成，Ziv等認(rèn)為只要降低培養(yǎng)容器中的相對(duì)濕度，就可以降低玻璃苗的比例。劉思穎等（1988）測(cè)得絲 石竹玻璃苗葉片的水勢(shì)約為正常苗的1.9倍，含水量為正常苗的2.09倍一2.21倍。自由水和高濕度可能 與肉質(zhì)嫩梢的形成有關(guān)。Davis等研究表明，液體培養(yǎng)是導(dǎo)致玻璃化的主要原因。可以斷定，試管苗玻璃 化可能是培養(yǎng)基內(nèi)水分狀態(tài)不適應(yīng)的一種生理變

28、態(tài)。許多學(xué)者證明培養(yǎng)基中BA濃度和培養(yǎng)溫度與玻璃化成正相關(guān)，BA濃度越高或培養(yǎng)溫度越高，玻璃苗 比率越大。Debergh曾用14C-KT研究表明，隨瓊脂濃度的增加，KT利用率降低。同時(shí)也證明，隨BA 濃度的增加，玻璃化率增加。Bornman等用14C- BA研究表明，14C-BA的積累與不定芽分化和玻璃化 是同步的。玻璃化苗的一個(gè)重要特征是葉脈明顯加長(zhǎng)，而GA3也有類似效應(yīng)，也許GA3促進(jìn)了細(xì)胞過(guò)度 生工，從而導(dǎo)致玻璃化。生長(zhǎng)素可以改變細(xì)胞壁的機(jī)械特性，使其具有更大的可塑性。許多研究表明，非受傷的物理和化學(xué)協(xié)迫可以增加乙烯的合成。玻璃化被認(rèn)為是一種非受傷協(xié)迫條件下 形態(tài)上的反應(yīng)。玻璃苗苯丙氨酸

29、解氨酶（PAL）的活性低于正常植株。在協(xié)迫條件下乙烯的快速合成，又 通過(guò)抑制氨基環(huán)丙烷羧酸（ACC）酶的形成，對(duì)乙烯起反饋調(diào)節(jié)作用。通過(guò)改善氣體交換防止玻璃化形成， 可能與克服乙烯反饋抑制有關(guān)。一種與膜有關(guān)的過(guò)氧化物酶直接或間接摻入ACC合成乙烯?，F(xiàn)已證明，IAA- 氧化酶體系至少在乙烯合成的最后一步起作用。IAA含量降低將進(jìn)一步通過(guò)IAA調(diào)節(jié)S-腺苷甲硫氨酸（SAM）轉(zhuǎn)化成ACC這一過(guò)程，從而降低了乙烯形成。Kevers等曾證明，對(duì)于玻璃苗，堿性過(guò)氧化酶同 功酶活性增加，而酸性同功酶活性降低。但總可溶性過(guò)氧化物酶活性增加，僅限于堿性提取物。有人認(rèn)為， 玻璃化的形成主要是膜的效應(yīng)而與核酸無(wú)關(guān)。

30、乙烯促進(jìn)了葉綠素分解及細(xì)胞的畸形發(fā)展。乙烯處理破壞了 膜的結(jié)構(gòu)，隨著細(xì)胞壁解離，細(xì)胞內(nèi)積累有在量纖維素及泡狀物質(zhì)。可見(jiàn)，乙烯對(duì)玻璃化的影響，與改變 組織的生理生化及纖維結(jié)構(gòu)有關(guān)。 Hakkart F. A.等認(rèn)為玻璃苗是培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)氣體與外界交換不暢造成的。密閉的封 瓶口材料是導(dǎo)致玻璃化的原因之一（陳國(guó)菊等1992,李云等1996）。培養(yǎng)基中高的含N量，特別是高的氨態(tài)N，也是導(dǎo)致玻璃化的因素。有人發(fā)現(xiàn)不同部位的節(jié)段外植體與玻璃化有關(guān)，以留蘭香基部節(jié)段所形成的試管苗玻璃苗嚴(yán)重，中部 莖段次之，莖尖最好（柴明良）；重瓣絲石竹中部莖段出現(xiàn)玻璃苗較多，基部莖段較少，莖尖沒(méi)有（郭達(dá)

31、初）。郭東紅等（1989）認(rèn)為瑞香莖尖外植體大小與玻璃化相關(guān)，莖尖外植體越小，出現(xiàn)玻璃苗比率越大。（二）玻璃苗發(fā)生的機(jī)理 Kevers等的試驗(yàn)表明，蘋(píng)果砧木M7等的玻璃苗是由于過(guò)氧化物酶一一吲哚乙酸氧化酶系統(tǒng) 控制的乙烯過(guò)飽和的影響，并認(rèn)為細(xì)胞激動(dòng)素和NH4+離子的過(guò)剩是一種最初的脅迫，受脅迫的試管苗在 乙烯過(guò)剩的空氣中，抑制了乙烯的生物合成，結(jié)果降低苯丙氨酸解氨酶（PAL）和酸性過(guò)氧化物酶的活性， 從而妨礙組織木質(zhì)化，導(dǎo)致形成玻璃苗。一種誘導(dǎo)協(xié)迫（過(guò)多的細(xì)胞分裂素和NH4+），可以通過(guò)酚含量 的快速化調(diào)節(jié)不斷增加的過(guò)氧化物酶活性。乙烯的大量形成又對(duì)其自身起反饋抑制作用，結(jié)果PAL和酸

32、性 過(guò)氧化物酶活性降低，從而抑制木質(zhì)化過(guò)程的進(jìn)行。糖用于氨基酸的合成，纖維素含量降低。由于缺乏纖 維素和木質(zhì)素，壁壓降低，從而細(xì)胞過(guò)分吸水，并導(dǎo)致玻璃化。張洪勝等認(rèn)為在試管苗玻璃化過(guò)程中，作為內(nèi)源激素的乙烯從代謝調(diào)節(jié)上起了關(guān)鍵性啟動(dòng)作用。而 乙烯的產(chǎn)生則取決于培養(yǎng)環(huán)境中的脅迫條件，如水勢(shì)不當(dāng)，通氣不暢（造成缺氧）及培養(yǎng)基用BA量過(guò)高 等，均會(huì)導(dǎo)致乙烯產(chǎn)生。乙烯產(chǎn)生后引發(fā)了其他激素質(zhì)和量上的改變及酶類的變化。因此，發(fā)生蛋白質(zhì)、 纖維素和木質(zhì)素的合成障礙及降解，葉綠素分解黃化，逐漸形成玻璃化癥狀；張昆瑜等Q991）認(rèn)為乙烯 克服試管苗玻璃化的機(jī)理是復(fù)雜的，在添加乙烯前體ACC （1-氨基環(huán)丙烷-1

33、-羧酸）和乙烯釋放劑CEPA （乙烯利）的培養(yǎng)基上證明乙烯對(duì)香石竹試管苗干物質(zhì)積累及組織、器官的發(fā)育有利。并發(fā)現(xiàn)ACC可促進(jìn) 煙草愈傷組織中的過(guò)氧化物酶和苯丙氨酸裂解酶的活性，加強(qiáng)磷酸戊糖途徑與抗氤交替途徑，前兩個(gè)酶是 促進(jìn)木質(zhì)素合成和細(xì)胞壁形成的關(guān)鍵酶，磷酸戊糖途徑與葉綠素前體的合成有關(guān)，抗氤交替途徑則降低了 ATP的合成，從而抑制了過(guò)度主動(dòng)吸水，提高了蛋白質(zhì)和干物質(zhì)的含量。李云等（1996）發(fā)現(xiàn)植物光呼吸途徑和磷酸戊糖（HMP）途徑均與玻璃苗的產(chǎn)生有關(guān)，即當(dāng)上述兩 條呼吸途徑的一條或兩條同時(shí)受阻時(shí)，均增加玻璃苗。密封瓶口、高溫、高濃度細(xì)胞分裂素等因子加快了 生長(zhǎng)速度，加劇了瓶中氣體組成的改

34、變，對(duì)瓶?jī)?nèi)外氣體交換提出更高要求，當(dāng)這種要求不能滿足時(shí)便出現(xiàn) 玻璃化。HMP途徑的中間步驟與戊糖化合物代謝有關(guān)（如核酸合成），也與木質(zhì)素形成有關(guān)。當(dāng)HMP途 徑被抑制時(shí)，壁的再生受抑制，戊糖化合物減少，核酸、蛋白質(zhì)合成受阻。當(dāng)光呼吸途徑被抑制時(shí)，減弱 了光呼吸對(duì)光合的保護(hù)作用，過(guò)剩的同化物損壞了光合細(xì)胞器，不僅降低了光合作用，同時(shí)也阻礙了乙醇 酸的的轉(zhuǎn)化，加重了乙醇酸對(duì)植物的毒害作用，從而導(dǎo)致玻璃化的產(chǎn)生。（三）防止和克服玻璃苗的措施盡管關(guān)于玻璃化的成因及其生理機(jī)制到目前為止仍未得出一致的結(jié)論，但對(duì)某些植物的玻璃化已得到 有效的控制。這些研究表明，控制玻璃化要從培養(yǎng)的環(huán)境條件和生理生化方面入手

35、，具體措施如下：利用固體培養(yǎng)，增加瓊脂濃度，降低培養(yǎng)基的襯質(zhì)勢(shì)，造成細(xì)胞吸水阻遏。提高瓊脂純度，也可降低 玻璃化。適當(dāng)提高培養(yǎng)基中蔗糖含量或加入滲透劑，降低培養(yǎng)基中的滲透勢(shì)，減少培養(yǎng)基中植物材料可獲得的 水分，造成水分脅迫。降低培養(yǎng)容器內(nèi)部環(huán)境的相對(duì)濕度。適當(dāng)降低培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素和赤霉素的濃度。控制溫度適當(dāng)?shù)蜏靥幚?，避免過(guò)高的培養(yǎng)溫度在晝夜變溫交替的情況下比恒溫效果好。增加自然光照。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，玻璃苗放于自然光下幾天后莖、葉變紅，玻璃化逐漸消失，因自然光中的 紫外線能促進(jìn)試管苗成熟，加快木質(zhì)化。增加培養(yǎng)基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu、Mn元素含量，降低N和Cl元素比例，特別降低銨 態(tài)

36、氮濃度，提高硝態(tài)氮含量。改善培養(yǎng)容器的通風(fēng)換氣條件，如用棉塞或通氣好的封口膜封口。青霉素G鉀（2mg/L6mg/L）能有效防治菊花試管苗的玻璃化（陳龍清等），青霉素（40萬(wàn)單位 /升）可降低芥菜試管苗的玻璃化（陳國(guó)菊等）。培養(yǎng)基中加入間苯三酚或根皮苷。用40r熱擊（周菊華等）處理瑞香愈傷組織培養(yǎng)物，可完全消除再生苗的玻璃化，且能夠提高愈傷組 織的芽分化頻率，熱擊處理會(huì)降低內(nèi)源細(xì)胞分裂素水平。一些添加物可有效地減輕或防治玻璃化，如王家旺等添加馬鈴薯汁或活性炭降低了油菜玻璃苗頻率;郭達(dá)初等用10mg/L15mg/L的CCC或0.5mg /L1.0mg/L的PP333減少了重瓣絲石竹試管苗玻 璃化的

37、發(fā)生；師校欣等（1990）添加1.5g/L-2.0g/L的聚乙烯醇防治蘋(píng)果砧木玻璃化；張昆瑜等增加容 器中乙烯含量克服香石竹玻璃化的發(fā)生。盡管如此，不同植物在不同條件下，也許會(huì)得出不同的結(jié)論或相反的結(jié)果。更有效的玻璃化控制途徑， 有等于進(jìn)一步研究組培苗的黃化問(wèn)題日期：2010年4月1日 來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng)作者：植物組培網(wǎng)點(diǎn)擊：1875黃化是指在組培過(guò)程中由于培養(yǎng)基成分、環(huán)境、激素、碳水化合物等各種因素引起的幼苗整株失綠，全部 或部分葉片黃化、斑駁。這一現(xiàn)象在植物組織培養(yǎng)中比較常見(jiàn)，特別在部分木本花卉中較為常見(jiàn)，引起黃 化的主要原因是培養(yǎng)基中Fe的含量不足；各礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不均衡；培養(yǎng)環(huán)境通氣不良，瓶?jī)?nèi)乙烯

38、含量升高； 激素配比不當(dāng)；糖用量不足或長(zhǎng)時(shí)間不轉(zhuǎn)移糖已耗盡；PH值變化過(guò)大；培養(yǎng)溫度不適；光照不足等。解決的方法是，首先在配制母液和培養(yǎng)基的制作過(guò)程中，要檢查儀器設(shè)備是否準(zhǔn)確，還要認(rèn)真細(xì)致地核對(duì) 每項(xiàng)稱量的每一個(gè)環(huán)節(jié)；及時(shí)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)物；使用透氣的封口膜以改善瓶?jī)?nèi)通氣狀況；適當(dāng)調(diào)節(jié)pH值、激 素配比和無(wú)機(jī)鹽濃度；配制培養(yǎng)基時(shí)切記不要忘記加糖；控制培養(yǎng)室內(nèi)的溫度；適當(dāng)增加光照；另外，在 培養(yǎng)基中添加抗生素類物質(zhì)如青霉素、鏈霉素、頭孢霉素等，有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)幼苗黃化現(xiàn)象，應(yīng)適當(dāng)減少用 量或停止使用。常用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑日期：2010年4月1日 來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng) 作者：植物組培網(wǎng) 點(diǎn)擊：2242、植物生長(zhǎng)促進(jìn)劑（

39、一）生長(zhǎng)素類1、吲哚乙酸，IAA分子式：C10H9O2N分子量：175.19性質(zhì):純品無(wú)色.見(jiàn)光氧化成玫瑰紅，活性降低。在酸性介質(zhì)中不穩(wěn)定，PH低于2時(shí)很快失活，不溶于水， 易溶于熱水，乙醇，乙醚和丙酮等有機(jī)溶劑。它的鈉鹽和鉀鹽易溶于水，較穩(wěn)定。用途：植物組織培養(yǎng)2、吲哚丁酸，IBA分子式：C12H13NO3分子量：203.2性質(zhì)：白色或微黃色。不溶于水，溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑。用途：誘導(dǎo)插枝生根。作用特別強(qiáng)，誘導(dǎo)的不定根多而細(xì)長(zhǎng)。3、萘乙酸，NAA，相似的有萘丁酸、萘丙酸分子式：C12H10O2分子量：186.2性質(zhì)：無(wú)色無(wú)味結(jié)晶，性質(zhì)穩(wěn)定，遇濕氣易潮解，見(jiàn)光易變色。不溶于水，易溶于乙醇，

40、丙酮等有機(jī)溶劑。 鈉鹽溶于水。用途：促進(jìn)植物代謝，如開(kāi)花、生根、早熟和增產(chǎn)等，用途廣泛。4、萘氧乙酸，NOA分子式：C12H10O3分子量：202性質(zhì)：純品白色結(jié)晶。難溶于冷水，微溶于熱水，易溶于乙醇、乙醚、醋酸等。用途：與NAA相似。5、2, 4-二氯苯氧乙酸，2，4-D，2, 4-滴分子式：C8H6O3Cl2分子量:221性質(zhì)：白色或淺棕色結(jié)晶，不吸濕，常溫下性質(zhì)穩(wěn)定。難溶于水，溶于乙醇，乙醚，丙酮等。它 的胺鹽和鈉鹽溶于水。用途：植物組織培養(yǎng)，防止落花落果，誘導(dǎo)無(wú)籽，果實(shí)保鮮，高濃度可殺死多種闊葉雜草。6、 防落素，PCPA，4-CPA，促生靈，番茄靈，對(duì)氯苯氧乙酸分子式：C6H7O3C

41、l分子量：186.6性質(zhì):純品為白色結(jié)晶，性質(zhì)穩(wěn)定。微溶于水，易溶于醇、酯等有機(jī)溶劑。用途：促進(jìn)植物生長(zhǎng)；防止落花落果，誘導(dǎo)無(wú)籽果實(shí)；提早成熟；增加產(chǎn)量；改善品質(zhì)等。常用于番茄保 果。7、增產(chǎn)靈，4-碘苯氧乙酸。相似的有4-漠苯氧乙酸，又稱增產(chǎn)素分子式：C8H7O3I分子量：278性質(zhì)：針狀或磷片狀結(jié)晶，性質(zhì)穩(wěn)定。微溶于水或乙醇，遇堿生成鹽。用途：促進(jìn)植物生長(zhǎng)；防止落花落果，提早成熟和增加產(chǎn)量等。8、甲萘威，西維因，N-甲基-1-萘基氨基甲酸酯分子式：C12H11O2N分子量：201.2性質(zhì)：純品為白色結(jié)晶，工業(yè)品灰色或粉紅色。微溶于水，易溶于乙醇、甲醇、丙酮等有機(jī)溶劑。遇堿（PH 大于10）

42、迅速分解失效。用途：干擾生長(zhǎng)素運(yùn)輸，使生長(zhǎng)較弱的幼果得不到充足養(yǎng)分而脫落，用于蘋(píng)果的疏果劑。同時(shí)它也是一種 高效低毒沙蟲(chóng)劑。9、2, 4，5-T，2, 4，5-三氯苯氧乙酸分子式：C8H5O3Cl3分子量：255.5性質(zhì):與2,4-D相似。用途：與2, 4-D相似。9、吲唑酯，吲熟酯，IZAA,豐果樂(lè)，乙基-5-氯-1H-3-吲哚基醋酸酯分子式：C11H11N2O2C1分子量：238.6性質(zhì)：純品為白色針狀結(jié)晶，有雜質(zhì)存在時(shí)褐色。難溶于水，易溶于甲醇、乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑，遇堿 易分解。用途：疏花疏果、促進(jìn)柑橘果實(shí)成熟和改善品質(zhì)。（二）赤霉素類，GA，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)108種1、赤霉酸，GA3，是應(yīng)用

43、最廣的種類。工業(yè)上由赤霉菌液體發(fā)酵生產(chǎn)分子式：C19H22O6分子量：346.4性質(zhì):純品為白色發(fā)結(jié)晶，工業(yè)品為白色粉劑.難溶于水，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、冰醋酸等有機(jī) 溶劑。它的鈉鉀鹽易溶于水。結(jié)晶較穩(wěn)定，溶液易緩慢水解，加熱超過(guò)50度會(huì)逐漸失去活性，在堿性條 件下被中和失效。用途：使莖伸長(zhǎng)，部分代替低溫長(zhǎng)日照，促進(jìn)葉的擴(kuò)大和側(cè)枝生長(zhǎng)，促進(jìn)雄花形成，種子發(fā)芽，單性結(jié)實(shí) 和果實(shí)形成，儲(chǔ)藏保鮮，抑制成熟和衰老，抑制側(cè)芽休眠和地下塊莖形成。2、GA1+2； GA4+7； GA4； GA7 國(guó)外也有應(yīng)用的報(bào)道（三）細(xì)胞分裂素類，CK。已知12種左右1、玉米素分子式：C10H13N5O分子量

44、：255.2性質(zhì):難溶于水和有機(jī)溶劑，易溶于鹽酸中用途:植物組織培養(yǎng)，防衰保鮮2、 激動(dòng)素，6-糠基腺嘌吟，KT，KN，動(dòng)力精分子式：C10H9N5O分子量：215.2性質(zhì)：不溶于水，微溶于乙醇，丁醇，丙酮和乙醚等有機(jī)溶劑。能溶于強(qiáng)酸，強(qiáng)堿及冰醋酸。用途：與玉米素相似3、6-芐基腺嘌吟，6-BA，BA，BAP，綠丹分子式：C12H11N5分子量：225.3性質(zhì)：難溶于水，可溶于酸性或堿性溶液中用途：植物組織培養(yǎng)；提高座果率，促進(jìn)果實(shí)生長(zhǎng)；防衰保鮮。4、氯苯甲酸，PBA，SD8839, ACCEL分子式：C17H19N5O分子量:309.4性質(zhì)：不溶于水，可溶于乙醇等有機(jī)溶劑用途：與BA相似，但

45、活性高于BA5、CPPU，4PU-30，KT-30，N-（2-氯-4-毗啶基）-N-苯基脲分子式：C12H10ClN3O分子量：247.68性質(zhì):難溶于水，易溶于甲醇，乙醇和丙酮。CPPU為脲類細(xì)胞分裂素中活性最強(qiáng)的一種化合物。用途：促進(jìn)細(xì)胞分裂和器官分化，果實(shí)肥大，促進(jìn)葉綠素合成，防止衰老，打破頂端優(yōu)勢(shì)，誘導(dǎo)單性結(jié)實(shí)， 促進(jìn)著果等。（四）其它1、油菜素內(nèi)酯分子式：C28H48O6分子量：480性質(zhì)：易溶于水。是從油菜等花粉中提取的淄體物質(zhì)。用途：促進(jìn)細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)，促進(jìn)光合作用，提高抗逆性。施用量極微。0.01PPM即可起作用.2、三十烷醇分子式：C30H62O分子量：438性質(zhì)：不溶于水，

46、溶于乙醚、氯仿、二氯甲烷中?？捎寐确隆⑼聹?0 （或80）配成乳油狀使用。對(duì)光、空氣、熱和堿均穩(wěn)定。藥效與藥品的純度、顆粒細(xì)度有關(guān)。加入氯化鈣（10-3MOL/L） 后，效果顯著且穩(wěn)定。用途：促進(jìn)光合作用，改善氮營(yíng)養(yǎng)，增強(qiáng)抗逆性。二、植物生長(zhǎng)延緩劑（一）脫落酸類，ABA，休眠素，脫落酸。已發(fā)現(xiàn)6種分子式：C15H20O4分子量：264.3性質(zhì):難溶于水，苯和揮發(fā)油?？扇苡诩状?、乙醇、丙酮、醋酸乙酯等，也可溶于碳酸氫鈉溶液。用途：科學(xué)研究（二）乙烯利，EPA，ETHYTEL，ETHEPHON，CEPHA，一試靈，2-氯乙基磷酸分子式：ClC2H4PO（OH）2分子量：144.5性質(zhì)：純品為長(zhǎng)針狀

47、無(wú)色結(jié)晶，制劑為棕黃色粘稠強(qiáng)酸性液體，在PH3以下比較穩(wěn)定，PH4以上放出乙烯，乙烯釋放速度隨溫度和PH上升加快。用途：催熟、多開(kāi)雌花，打破休眠等。（三）其它生長(zhǎng)延緩劑1、 矮壯素，CCC，三西，2-氯乙基三甲基氯化銨，氯化氯代膽堿分子式：C5H13NCl2分子量：158性質(zhì)：純品為白色結(jié)晶，易溶于水，不溶于乙醇、乙醚和苯等。在中性和酸性溶液中穩(wěn)定，和堿混合加熱 分解失效。是赤霉素生物合成抑制劑。用途：使植物矮化，莖加粗，葉色加深。提高植株抗逆性。不易被土壤吸附或微生物分解，可作土壤施用。2、氯化膽堿，（羥乙基）三甲基氯化銨分子式：C4H14ClNO分子量：139.6性質(zhì)：純品為無(wú)色結(jié)晶，吸濕

48、性強(qiáng)，易溶于水。在土壤中易被微生物分解。葉面噴施后易吸收傳遞到其它 部位。用途：促進(jìn)根系發(fā)達(dá)、塊莖和塊莖高產(chǎn)，也促進(jìn)光合產(chǎn)物向生殖器官運(yùn)輸，提高農(nóng)作物產(chǎn)量。3、 丁酰肌，B9，比久，B995, N-二甲基氨基琥珀酰胺酸分子式：C6H12N2O3分子量：160.2性質(zhì)：易溶于水，在土壤易被微生物分解，在植物體內(nèi)穩(wěn)定。用途：抑制生長(zhǎng)素和赤霉素的生物合成。使植株矮化，葉綠而厚，增強(qiáng)抗逆性，促進(jìn)果實(shí)著色和延長(zhǎng)儲(chǔ)藏 期。4、 多效唑，PP333，氯丁唑，（2RS，3RS）-1（4-氯苯基）-4, 4-二甲基-2-（1，2, 4-三唑-1-基）-戊醇-3分子式：C15H20N3OCl分子量:293.5性質(zhì)

49、:難溶于水，溶于甲醇丙酮.工業(yè)品為95%或15%粉劑，溶于水。用途：抑制赤霉素的生物合成，減緩細(xì)胞的分裂和伸長(zhǎng)。用于抑制植物莖的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)和矮化植物。它也有 抑菌作用，又是殺菌劑。在土壤中的半衰期為6-12個(gè)月。5、縮節(jié)胺，皮克斯，調(diào)節(jié)胺，助壯素，健壯素，PIX，1，1-二甲基哌啶嗡氯化物分子式：C7H18ClN分子量：149.7性質(zhì)：純品白色結(jié)晶，溶于水，不溶于有機(jī)溶劑，抑制赤霉素的生物合成。用途：使植株矮化，提高同化能力，促進(jìn)成熟，增加產(chǎn)量。土壤中易分解，葉面噴施較好。6、調(diào)節(jié)膦，氨基甲?；姿嵋阴ヤ@鹽，蔓草膦。DPX-1108等。分子式：C3H11N2O4P分子量：170.1性質(zhì)：純品白色

50、結(jié)晶，易溶于水，難溶于丙酮等有機(jī)溶劑。自身穩(wěn)定性好，但酸性稀釋液易分解。在土壤 中易分解，葉面施。用途：抑制細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)，用于灌木矮化（尤其是雙子葉植物），柑橘整枝和防除雜草等方面。7、氯化膦，福斯方-D，CBBP，PHOSPHON-D分子式：C19H32C13P分子量：397.8性質(zhì)：易溶于水。在土壤中可長(zhǎng)期殘留，用于土壤澆灌用途：園林植物造型（矮化）8、 優(yōu)康唑，S-3307，烯效唑，高效唑，（E）-（對(duì)-氯苯基）-2-（1，2, 4-三唑-1-基）-4, 4-二甲 基-1-戊烯-3-醇分子式：C15H18C1N3O分子量：291.5性質(zhì)：難溶于水，易溶于丙酮、甲醇、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑。

51、向上傳導(dǎo)，所以土壤施用較好。用途：矮化植株，抗倒伏增產(chǎn)，除雜草，殺菌。9、粉銹寧，三唑酮。1-（4-氯苯氧基）-3，3-二甲基-1-（1，2, 4-三唑-1-基）-2-丁酮分子式：C15H16C1N3O分子量:289.5性質(zhì)：純品無(wú)色結(jié)晶。難溶于水，易溶于甲苯和三氯甲烷中。水溶液半衰期僅有10-12小時(shí)。用途：殺菌劑兼植物生長(zhǎng)延緩劑。延緩植物生長(zhǎng)，減少葉面積，增加葉厚，提高抗逆性。提高光 合作用，有利增產(chǎn)。三、植物生長(zhǎng)抑制劑1、青鮮素，順丁烯二酸酰肌，MH馬來(lái)酰肌，抑芽丹等分子式：C4H4N2O2分子量：112性質(zhì):難溶于水，微溶于醇,易溶于冰醋酸，二乙醇胺。其鈉、鉀、銨鹽溶于水。作用與生長(zhǎng)素

52、相反，抑制芽的 生長(zhǎng)和莖的伸長(zhǎng)。它的結(jié)構(gòu)與尿嘧啶相似，阻止核酸的合成。用途：抑制鱗莖和塊莖在儲(chǔ)藏期間的發(fā)芽，控制煙草側(cè)芽生長(zhǎng)。2、三碘苯甲酸，TIBA分子式：C7H2O2I3分子量：500.92性質(zhì):不溶于水，易溶于乙醇，乙醚，苯,甲苯等，它能阻礙生長(zhǎng)素在體內(nèi)的運(yùn)輸.用途:抑制莖頂端生長(zhǎng)，促進(jìn)腋芽萌發(fā),使植株分枝多，增加花和結(jié)實(shí)數(shù)3、整形素，形態(tài)素，2、氯-9-羥基芴-9-羧酸甲酯分子式：C13H8OHCOOH分子量：228.7性質(zhì):微溶于水，溶于乙醇丙酮燈。阻礙生長(zhǎng)素向下運(yùn)輸，同時(shí)能提高生長(zhǎng)素氧化酶的活性，使生長(zhǎng)素含量 下降。用途：抑制頂端分生組織生長(zhǎng)，使植株矮化，促進(jìn)側(cè)芽發(fā)生。4、增甘膦，N-N雙（膦?；谆└拾彼岱肿邮剑篊4H11NO8P2分子量：263性質(zhì)：溶于水。抑制植株生長(zhǎng)，也抑制酸性轉(zhuǎn)化酶的活性。用途：甘蔗和甜菜的催熟和增糖。影響試管苗繼代培養(yǎng)