免疫球蛋白檢測(cè)

1、關(guān)于免疫球蛋白檢測(cè)第1頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四 概念免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）：是由漿細(xì)胞合成和 分泌的一組具有抗體活性、化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的蛋白質(zhì)Ig主要存在于血液中，約占血漿蛋白總量的20%，也可存 在于尿液，腦脊液等體液及外分泌液中Ig含量：血清 IgG、IgA、IgM：g/L， IgD、IgE：mg/L 體液 IgG、IgA、IgM：mg/L 檢測(cè)意義：反應(yīng)機(jī)體的免疫功能、免疫缺陷病、自身免疫病、免疫增殖性疾病的診斷和治療第2頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四一、免疫球蛋白的異質(zhì)性（一）免疫球蛋白的類(lèi)型（二）免

2、疫球蛋白的多樣性（三）免疫球蛋白的血清型二、免疫球蛋白的功能第一節(jié) 免疫球蛋白的生物學(xué)功能第3頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu) 四肽鏈分子，即由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈通過(guò)鏈間二硫鍵連接而成的免疫球蛋白單體，呈“Y”字形。 第4頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四可變區(qū)和恒定區(qū)：氨基酸序列變化第5頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四可變區(qū)（variable region，V區(qū)）：位于免疫球蛋白分子N端的氨基酸組成和排列有較大差異（占輕鏈1/2和重鏈1/4或1/5） ，決定抗體與抗原結(jié)合的特異性。恒定區(qū)（c

3、onstant region，C區(qū))：位于免疫球蛋白分子的C端的氨基酸組成和排列比較恒定（占輕鏈1/2和重鏈3/4或4/5） ，介導(dǎo)免疫球蛋白多種生物學(xué)功能。鉸 鏈 區(qū)：位于CH1和CH2之間，含豐富的脯氨酸，易伸展彎曲，有利于免疫球蛋白V區(qū)與抗原互補(bǔ)性結(jié)合，有利于暴露補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)；連接免疫球蛋白Fab段和Fc段，易被木瓜蛋白酶和胃蛋白酶水解。第6頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四高變區(qū)（hypervariable region, HVR）：在VL和VH中各有三個(gè)區(qū)域的氨基酸組成和排列順序特別易變化，分別用HVR1，HVR2， HVR3表示?；パa(bǔ)決定區(qū)（complemen

4、tarity-determining region, CDR）：高變區(qū)是抗體與抗原（表位）特異性結(jié)合的位置，所以又稱為CDR。高變區(qū)=互補(bǔ)決定區(qū)骨架區(qū)（framework region, FR）： V區(qū)中非HVR部位的氨基酸組成和排列相對(duì)保守，此為FR。VH和VL各有4個(gè)FR。第7頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!恒定區(qū)可變區(qū)高變區(qū)骨架區(qū)第8頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!第9頁(yè)，共55

5、頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四類(lèi)（class）：根據(jù)CH不同Ig分5類(lèi)： IgG()、IgA()、IgM()、IgD()、IgE() 亞類(lèi)：IgG1-G4； IgA1-A2； IgM1-M2。型（type）：根據(jù)CL不同Ig分為兩個(gè)型： 型和型 亞型： 型有1、2、3、4四個(gè)亞型 一、免疫球蛋白的異質(zhì)性（一）免疫球蛋白的類(lèi)型第10頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四第11頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四（二）免疫球蛋白的多樣性第12頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四多樣性抗原的存在是導(dǎo)致免疫球蛋白異質(zhì)性（即特異性

6、）的外源因素，是免疫球蛋白異質(zhì)性的物質(zhì)基礎(chǔ)?？贵w的這種異質(zhì)性，反應(yīng)機(jī)體對(duì)抗原精細(xì)結(jié)構(gòu)的識(shí)別和應(yīng)答。第13頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四（三）免疫球蛋白的血清型 內(nèi)源性因素所致免疫球蛋白異質(zhì)性免疫球蛋白既可與相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性結(jié)合，本身又可作為抗原，激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。免疫球蛋白有3種不同的血清型 (1)同種型 (2)同種異型 (3)獨(dú)特型第14頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四免疫球蛋白的雙重身份第15頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四同種型（isotype）指同一種屬所有個(gè)體的免疫球蛋白分子共有的抗原特異性標(biāo)志，

7、位于免疫球蛋白C區(qū)。為種屬標(biāo)志 （顏色不一樣）第16頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四同種異型（allotype） 指同一種屬但不同個(gè)體來(lái)源的免疫球蛋白C區(qū)分子所具有的不同的抗原特異性標(biāo)志。為個(gè)體標(biāo)志 （花紋不一樣）第17頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四獨(dú)特型（idiotype） 即使是同一種屬、同一個(gè)體來(lái)源的免疫球蛋白分子，其免疫原性亦不盡相同，稱為獨(dú)特型，其決定簇又稱為獨(dú)特位，主要存在 于免疫球蛋白V區(qū)。第18頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四第19頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四二、免疫球蛋白的功

8、能免疫球蛋白V區(qū)的功能： 特異性識(shí)別結(jié)合抗原（主要功能） 抗原結(jié)合價(jià)：免疫球蛋白結(jié)合抗原表位的個(gè)數(shù) 單體免疫球蛋白可結(jié)合2個(gè)抗原表位，為雙價(jià)；分泌型IgA為4價(jià)五聚體IgM由于立體構(gòu)型的空間位阻，一般只能結(jié)合五個(gè)抗原表位，為5價(jià) 第20頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四 免疫球蛋白的V區(qū)特異性識(shí)別結(jié)合抗原后，在體內(nèi)可結(jié)合病原微生物及其產(chǎn)物，發(fā)揮以下作用： （1）中和毒素 （2）阻斷病原體入侵 （3）清除病原微生物 （4）構(gòu)成B細(xì)胞的抗原識(shí)別受體AgAb特異性識(shí)別結(jié)合抗原第21頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibo

9、dy全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!中和毒素第22頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!阻止病毒入侵第23頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!阻止細(xì)菌入侵第24頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四免疫球蛋白C區(qū)的功能：（1）激活補(bǔ)體 IgM、IgG13 激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑 凝聚的IgA或IgG4 激活補(bǔ)體旁路途徑（2）細(xì)胞親嗜性(與細(xì)胞表面FcR結(jié)合) 調(diào)理作用（opson

10、ization)； IgFc段與吞噬細(xì)胞表面FcR結(jié)合促吞噬； 抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用 （Ab-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC) 介導(dǎo)I型超敏反應(yīng)（3）IgG穿過(guò)胎盤(pán) 被動(dòng)免疫、（4） sIgA通過(guò)呼吸道和消化道粘膜 粘膜局部免疫第25頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四第26頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用第27頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四第28頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四IgG是血清中含量最高的免疫球蛋

11、白，是血液和細(xì)胞外液中的主要抗體，也是機(jī)體再次免疫的主要抗體。出生后3個(gè)月開(kāi)始合成，3-5歲接近成人水平，是唯一能通過(guò)胎盤(pán)的Ig IgM為五聚體，是分子量最大的免疫球蛋白，稱為巨球蛋白（macroglobulin）；是個(gè)體發(fā)育過(guò)程中最早合成和分泌的抗體，也是抗原刺激誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體；主要存在于血液中，是血管內(nèi)抗感染的主要抗體。各類(lèi)免疫球蛋白的特性和功能第29頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四各類(lèi)免疫球蛋白的特性和功能IgA分為血清型和分泌型，是參與黏膜局部免疫的主要抗體，主要存在于胃腸道和支氣管分泌液、初乳、唾液和淚液中。初乳中的sIgA可對(duì)嬰幼兒發(fā)揮自

12、然被動(dòng)免疫作用正常人血清中IgD含量很低，膜結(jié)合型IgD(mIgD)構(gòu)成BCR，是B細(xì)胞分化發(fā)育成熟的標(biāo)志。 IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴組織中的漿細(xì)胞分泌，為親細(xì)胞抗體，引起I型超敏反應(yīng)；與機(jī)體抗寄生蟲(chóng)免疫也可能有關(guān)。第30頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四單克隆抗體和多克隆抗體多克隆抗體（polyclonal antibody）：用含多種抗原決定簇的抗原物質(zhì)免疫動(dòng)物，刺激多個(gè)B細(xì)胞克隆所獲得的免疫血清（含多種抗體的混合物），此為多克隆抗體。 來(lái)源廣泛，制備容易；特異性不高。單克隆抗體（monoclonal antibody, mAb）由一

13、個(gè)識(shí)別一種抗原表位的B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的同源抗體 純度高、特異性強(qiáng)、可大量生產(chǎn)。第31頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四第二節(jié) IgG、IgA、IgM測(cè)定方法及臨床意義一、血液IgG、IgA、IgM測(cè)定方法及臨床意義二、血液IgG亞類(lèi)測(cè)定方法及臨床意義三 、尿液免疫球蛋白測(cè)定方法及臨床意義四、腦脊液免疫球蛋白測(cè)定方法及臨床意義第32頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四（一）、測(cè)定方法單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) （凝膠內(nèi)免疫沉淀反應(yīng)）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：時(shí)間長(zhǎng)、批量檢測(cè)放射免疫試驗(yàn)（RIA）：放射性核素污染免疫透射比濁試驗(yàn)（液相免疫沉淀反應(yīng)）免疫散射比濁試

14、驗(yàn)（液相免疫沉淀反應(yīng)）免疫固定電泳（IFE）：M蛋白測(cè)定一、血液IgG、IgA、IgM測(cè)定方法及臨床意義第33頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四 優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、不需特殊耗材缺點(diǎn)：耗時(shí)長(zhǎng)、靈敏度低、免疫球蛋白分子量大、沉淀 環(huán)不明顯、導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確，臨床應(yīng)用少單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)第34頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四免疫比濁試驗(yàn)原理：第六章免疫沉淀試驗(yàn)和第十四章免疫濁度測(cè)定的自動(dòng)化分析常見(jiàn)分類(lèi)：透射免疫比濁試驗(yàn)：臨床基層單位使用 散射免疫比濁試驗(yàn)（BNP特種蛋白儀) 評(píng)價(jià)：散射免疫比濁試驗(yàn)具有檢測(cè)范圍寬、時(shí)間短、 測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、精密度高、敏感性高、穩(wěn)定

15、 性好等優(yōu)點(diǎn)，臨床應(yīng)用廣泛。第35頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四（二）、臨床意義1、年齡第36頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四 2、高Ig血癥： 1）多克隆高Ig血癥（ IgG、IgA、IgM 均升高）； eg：肝臟疾病，三種均升高 慢性細(xì)菌感染 ， IgG升高 宮內(nèi)感染臍血或新生兒， IgM 升高 自身免疫性疾病 ，三種均升高；SLE、RF 2） 單克隆Ig升高（單一Ig升高） 單克隆蛋白即M蛋白，主要是指患者血清中某一類(lèi)免疫球蛋 白含量顯著增多，大多在30g/L以上，這種異常增多的免疫 球蛋白理化性質(zhì)十分均一。又稱副蛋白（無(wú)免疫活性） eg

16、：免疫增殖病第37頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四 3、 低Ig血癥： 1）先天性低Ig血癥（體液免疫缺陷病和聯(lián)合免疫缺陷?。?a Ig全缺：Bruton型無(wú)Ig血癥 b 缺一種或缺兩種Ig ：缺IgA，反復(fù)呼吸道感染 缺IgM，革蘭陰性細(xì)菌敗血癥 缺IgG，化膿性感染 2）獲得性低Ig血癥：大量蛋白丟失 （IgGIgAIgM第46頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四（二）、臨床意義 腦脊液免疫球蛋白含量的測(cè)定有助于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診斷、療效觀察、預(yù)后判斷。通過(guò)測(cè)定CSF和血液中的白蛋白計(jì)算以下臨床指標(biāo)：白蛋白商值（QAlb）=（Albcsf/Albs

17、) 1000 （1）監(jiān)測(cè)血腦屏障損傷的程度 （2）提示神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生疾病的類(lèi)型IgG生成指數(shù)=（ IgGcsf Albs ）/ （ IgGs Albcsf ） 區(qū)分鞘內(nèi)免疫球蛋白的來(lái)源：鞘內(nèi)合成， 通過(guò)BBB進(jìn)入鞘內(nèi) 第47頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四第三節(jié) 血液IgE 和IgD測(cè)定方法及臨床意義一、 血液IgE測(cè)定方法及臨床意義包括總IgE（tIgE）和特異IgE（sIgE） 測(cè)定方法： 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA） 熒光酶免疫試驗(yàn)(FEIA) 化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)(CLIA)臨床意義 1、 IgE升高： I型變態(tài)反應(yīng)性疾病 嬰兒寄生蟲(chóng)感染非變態(tài)反應(yīng)性疾?。翰《靖腥?、自

18、身免疫性疾病等。 第48頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四臨床意義 2、IgE降低：原發(fā)性無(wú)丙種球蛋白血癥 腫瘤及化療藥物應(yīng)用后3、影響IgE水平的因素年齡性別種族第49頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四二、 IgD測(cè)定方法及臨床意義 測(cè)定方法：放射免疫分析法 乳膠顆粒免疫比濁分析法 酶聯(lián)免疫吸附法 臨床意義 IgD升高：妊娠末期、 IgD型骨髓瘤、 甲狀腺炎、 大量吸煙者 IgD降低：原發(fā)性無(wú)丙種球蛋白血癥 肺硅沉著病 細(xì)胞毒藥物治療后第50頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)49分，星期四第四節(jié) 冷球蛋白測(cè)定及臨床意義 冷球蛋白（CG)，又稱冷免疫球蛋白，是血清中的一種病理性蛋白質(zhì)。 在0-4 時(shí)發(fā)生沉淀，在37 又溶解，在低溫時(shí)產(chǎn)生冷沉淀的機(jī)制尚不十分明確，多數(shù)冷球蛋白為免疫復(fù)合物，其抗原可以是外源性的，也可以是內(nèi)源性的測(cè)定方法：定性測(cè)定 即血細(xì)胞比容管法 定量測(cè)定 分光光度法第51頁(yè)，共55頁(yè)，2022年，5月20日，9點(diǎn)4