醫(yī)學微生物學消毒和滅菌和生物安全課件

1、醫(yī)學微生物學消毒與滅菌和生物安全醫(yī)學微生物學消毒與滅菌和生物安全醫(yī)學微生物學消毒與滅菌和生物安全 公元325年,古希臘出現世界上以在傳染病流行時收容病人和為窮人提供醫(yī)務服務的首家醫(yī)院。由于醫(yī)院的客觀條件極差，醫(yī)院感染情況非常嚴重。 產褥熱是當時歐洲醫(yī)院感染中造成損失最大、問題最嚴重、研究最多、并最終得到解決的問題。Thomas Lightfoot曾認為“產院是引導產婦走向死亡之門”。由于產褥熱的危害和影響，直至1940年，在某些發(fā)達國家仍有50%的產婦不愿到醫(yī)院分娩。1843年，Holmes發(fā)現產褥熱與醫(yī)生在尸檢后不洗手就檢查產婦與接生有關。 2020/11/32醫(yī)學微生物學消毒與滅菌和生物安

2、全醫(yī)學微生物學消毒與滅菌和生物 公元325年,古希臘出現世界上以在傳染病流行時收容病人和為窮人提供醫(yī)務服務的首家醫(yī)院。由于醫(yī)院的客觀條件極差，醫(yī)院感染情況非常嚴重。 產褥熱是當時歐洲醫(yī)院感染中造成損失最大、問題最嚴重、研究最多、并最終得到解決的問題。Thomas Lightfoot曾認為“產院是引導產婦走向死亡之門”。由于產褥熱的危害和影響，直至1940年，在某些發(fā)達國家仍有50%的產婦不愿到醫(yī)院分娩。1843年，Holmes發(fā)現產褥熱與醫(yī)生在尸檢后不洗手就檢查產婦與接生有關。 2020/11/32 公元325年,古希臘出現世界上以在傳染病流行時收 英國外科醫(yī)生Lister(1827-1912

3、)首先簡明細菌與感染的關系，并提出消毒的概念，并于1867年發(fā)表了著名的有關外科無菌操作技術的論文，其中大部分原則仍沿用至今。 Halstead在John Hopkinks 醫(yī)院工作時，因其未婚妻（手術室護士）對升汞洗手過敏，便請Goodyear公司于1889年制作了兩付橡膠手套，從此開創(chuàng)了外科手術時戴手套的新紀元。2020/11/332020/11/33微生物的分布1、土壤中的微生物：多為非致病菌，少數有致病性。芽孢菌致?。凰幉拿棺?。2、水中的微生物：主要來自人和動物的排泄物、污物。常引起消化道傳染病。3、空氣中的微生物：來源于人畜呼吸道的飛沫及飄揚的塵埃；常引起呼吸道傳染病。2020/11

4、/34微生物的分布1、土壤中的微生物：2020/11/34Carbolic Steam Spray 2020/11/35Carbolic Steam Spray 2020/11/3 消毒與滅菌消毒(disinfection)：殺死物體表面或環(huán)境中病原微生物的方法，并不一定能殺死含芽胞的細菌或非病原微生物。用以消毒的藥品稱為消毒劑(disinfectant)。一般消毒劑只對繁殖體有效）滅菌(sterilization)：殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細菌芽胞在內的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌(bacteriostasis)：抑制體內或體外微生物的生長繁殖。常用的抑菌

5、劑為各種抗生素。防腐(antisepsis)：防止或抑制體外微生物生長繁殖的方法。細菌一般不死亡。所用藥品稱為防腐劑。無菌(asepsis)：不存在活菌物體中不含活的微生物。無菌操作（antiseptic technique)指在進行外科手術或分離、轉種及培養(yǎng)時防止其他微生物污染實驗材料的操作方法。防止微生物進入人體或其他物品的各種操作 Aseptic operation 、防止細菌進入人體或其它物品的操作技術2020/11/36 消毒與滅菌消毒(disinfection)：殺死物體表面或滅菌與消毒的比較：殺菌更徹底。消毒與防腐的比較：濃度和時間。無菌：本身無菌或滅菌處理。無菌操作：保持著原生

6、態(tài)的環(huán)境。相互比較2020/11/37滅菌與消毒的比較：殺菌更徹底。相互比較2020/11/37一熱力消毒滅菌法二 干燥和低溫抑菌法三輻射殺菌法四超聲波殺菌法五 濾過除菌法用物理阻留方法除去細菌。干熱滅菌法濕熱滅菌法第一節(jié) 物理消毒滅菌法2020/11/38一熱力消毒滅菌法干熱滅菌法第一節(jié) 物理消毒滅菌法2020/一. 熱力滅菌法濕熱80經5-10min可殺死所有細菌繁殖體和真菌多數無芽胞細菌經55-60作用30-60min后死亡干熱滅菌法、 濕熱滅菌法2020/11/39一. 熱力滅菌法濕熱80經5-10min可殺死所有細菌繁殖干熱滅菌法焚燒：尸體。燒灼：接種環(huán)。干烤：耐高溫物品。紅外線：同

7、干烤。濕熱滅菌法巴氏消毒法：牛奶、酒類等。煮沸法：消毒食具等。流動蒸氣消毒法：間歇蒸氣滅菌法：不耐高溫的培養(yǎng)基。高壓蒸氣滅菌法：最有效的滅菌方法。預真空壓力蒸汽滅菌器：滅菌速率快。熱力滅菌法二2020/11/310焚燒：尸體。濕熱滅菌法巴氏消毒法：牛奶、酒類等。熱力滅菌法二干熱滅菌法焚燒：無經濟價值的污染物品、廢棄物品、動物尸體。燒灼：在火焰上進行，如接種環(huán)（針）、試管口、安瓶口的滅菌。干烤：適用于耐高溫的玻璃器皿，如培養(yǎng)皿，吸管、試管及干燥的玻璃注射器，瓷器，某些粉劑藥物等物品。置于干烤箱內，通電后利用高熱空氣進行滅菌，一般160-1702h 。紅外線：1-10m波長最強，但只在照射 到的物

8、體表面產生熱效，醫(yī)療 器械的滅菌。脫水干燥，使大分子變性2020/11/311干熱滅菌法焚燒：無經濟價值的污染物品、廢棄物品、動物尸體。脫干 燥 箱2020/11/312干 燥 箱2020/11/312濕熱滅菌法1、巴氏消毒法：利用較低溫度殺滅液體中的病原菌或特定微生物，保持物品中不耐熱成分不被破壞 61.162.8 30min 或 71.11530s， 一般用于牛奶、酒類的消毒2、煮沸消毒法： 100、5-10min，可殺死細菌繁殖體 1-2h殺滅芽胞，加入2%的碳酸（氫）鈉，可提高水溫至105 ，促進芽胞的殺滅，防止金屬器皿生銹，一般用于食具、刀剪、注射器的消毒。3、流通蒸氣消毒法：用 阿

9、諾流通蒸汽滅菌器 或蒸籠。 100水蒸汽進行消毒，10-30min，可殺死細菌繁殖體。但芽胞不被全部殺滅。適用于食品、食具、不耐高溫物品的消毒。 4、間歇蒸汽滅菌法：用于含糖、牛奶等培養(yǎng)基。 100、15-30min，37過夜（3次）不耐受高溫的物品如：雞蛋培養(yǎng)基、血清培養(yǎng)基等，將被滅菌物品置于血清凝固器內， 7580 ，延長滅菌時間至60min,連續(xù)三次也達到滅菌的目的。2020/11/313濕熱滅菌法1、巴氏消毒法：利用較低溫度殺滅液體中的病原菌或特5. 高壓蒸汽滅菌法 最有效的滅菌方法壓力103.4kPa（1.05kg/cm2)，121.3，15-30min ， 殺滅包括細菌芽胞在內的所

10、有微生物。 一般普通培養(yǎng)基、耐高溫的玻璃制品、生理鹽水、外科手術敷料與器械等物品。利用密封的耐受高壓的蒸汽滅菌器，在蒸汽不外溢的情況下，使鍋內壓力升高，容器內的溫度隨著水水蒸汽壓力的增加而上升2020/11/3145. 高壓蒸汽滅菌法 最有效的滅菌方法壓力103.4kP6.超高溫殺菌（UHT）： 135150和 28s對牛乳或其他液態(tài)食品 果汁、及果汁飲料、豆乳、茶、酒、礦泉水等最大優(yōu)點是既能殺死產品中的微生物，又能較好地保持食品品質與營養(yǎng)價值。2020/11/3156.超高溫殺菌（UHT）： 135150和 28s20高壓蒸氣滅菌鍋2020/11/316高壓蒸氣滅菌鍋2020/11/316

11、高壓蒸汽滅菌器2020/11/317 高壓蒸汽滅菌器2020/11/31干熱滅菌法與濕熱滅菌法的區(qū)別同一溫度、相同時間內，濕熱滅菌法的滅菌效果較干熱滅菌法好。1 細菌蛋白質在有水環(huán)境中易凝固變性。濕熱滅菌時，菌體蛋白質較易凝固。濕熱滅菌時，菌體吸收水分，蛋白質含水愈多，凝固所需溫度降低。 2 濕熱穿透力強。可使被滅菌物品內部溫度迅速上升。 3 濕熱蒸氣有潛熱存在，這種潛熱迅速提高被滅菌物體的溫度 。2020/11/318干熱滅菌法與濕熱滅菌法的區(qū)別同一溫度、相同時間內，濕熱滅菌法干熱滅菌與濕熱滅菌穿透力及滅菌效果比較 2020/11/319干熱滅菌與濕熱滅菌穿透力及滅菌效果比較 2020/11

12、/31冷凍真空干燥法：在低溫狀態(tài)下真空抽去水分 細菌在較低的情況下，代謝較低，較長時間維持生命。可用于保存菌種， 但必須降低溫度，否則使環(huán)境中的水分形成冰晶，細胞外滲，電解質濃縮和蛋白質變性。用途：保存菌種的最好方法二. 低溫2020/11/320冷凍真空干燥法：在低溫狀態(tài)下真空抽去水分二. 低溫2020/干燥與低溫抑菌法干燥抑菌法：多數細菌在空氣中干燥時停止代謝、很快死亡；干燥法常用于保存食物（鹽腌） 、中藥材。低溫抑菌法:細菌在低溫時新陳代謝減慢，故低溫常用作保存菌種。一般放置-20或-70冰箱，冷凍真空干燥法:是在低溫下真空抽去水分。是目前保存菌種的最好辦法。保存時間可達數十年。2020

13、/11/321干燥與低溫抑菌法干燥抑菌法：多數細菌在空氣中干燥時停止代謝、保存菌種常見的設備 2020/11/322保存菌種常見的設備 2020/11/322（一）非電離輻射（日光與紫外線）波長210300nm之間有殺菌作用，以260266nm最強，此波長的紫外線易被細胞中核酸吸收殺菌機理：當微生物被照射后，細胞內DNA吸收紫外線， DNA一條鏈或兩條鏈上相近的胸腺嘧啶之間形成二聚體改變了DNA的分子構型，從而干擾了干擾DNA的復制與轉錄 殺菌效率與強度和時間的乘積成正比紫外線燈距離照射物以不超過1.2 m為宜。三 輻射殺菌法2020/11/323（一）非電離輻射（日光與紫外線）殺菌機理：當微

14、生物被照射后，空氣消毒手術室、傳染病房、微生物學無菌實驗室 不耐熱物品的表面消毒紫外線穿透力較弱，對皮膚、眼睛有損傷特點：應用范圍：人工紫外線用低壓水銀蒸汽燈產生uW/cm22020/11/324空氣消毒紫外線穿透力較弱，對皮膚、眼睛有損傷特點：應用范圍：紫外線殺菌車2020/11/325紫外線殺菌車2020/11/325殺菌機理：應用范圍：（二）電離輻射 包括高速電子、X射線、和 射線：60Co 細胞中的水分被電離成H+和OH-，這些游離基是強烈的氧化劑和還原劑，能破壞微生物的核酸、蛋白質、酶，使微生物死亡不耐熱的一次性醫(yī)用塑料制品的消毒，食品、藥品、生物制品的消毒，不破壞其營養(yǎng)成分 特點：

15、穿透力強，不升高溫度尤其是射線穿透力強，不升高溫度，對各種細菌均有致死作用2020/11/326殺菌機理：應用范圍：（二）電離輻射 包括高速電子、X（三）微波波長1-1000mm的電磁波殺菌機理熱效應，但不均勻，滅菌效果不可靠應用范圍食品、非金屬器械、檢驗室用品、無菌室和病室中食品用具、藥杯及其他物品的消毒。2020/11/327（三）微波波長1-1000mm的電磁波殺菌機理熱效應，但不均四、超聲波殺菌 不被人耳朵感受的高于20千赫/秒的聲波，稱為超聲波。由于超聲波頻率高，可裂解許多細菌，G-菌尤敏感，但裂解并不徹底。殺菌機制：超聲波通過液體時發(fā)生空化作用破壞原生質膠體狀態(tài)導致菌體死亡。 用途

16、：主要用于粉碎細胞，提取細胞組分以及制備Ag ，洗滌等。四 超聲波2020/11/328四、超聲波殺菌 不被人耳朵感受的高于20千赫/秒的聲波，稱 特點僅能除去細菌，不能去除病毒、支原體、衣原體和有些L型細菌等。 主要用于不耐高溫無菌的血清、毒素、抗生素、藥液；以及空氣的除菌如，超凈臺（層流工作柜）、無菌病房。 用途五. 濾過除菌法機制 根據機械性阻留方法，利用特殊的濾器以去除液體或空氣中的細菌，以達到無菌目的。2020/11/329 特點僅能除去細菌，不能去除病毒、支原體、衣原體和有些L型濾菌器的種類薄膜濾菌器：孔徑0.220.45m時，可除去細菌；20100nm時可除去病毒玻璃濾菌器石棉濾

17、菌器素陶瓷濾菌器2020/11/330濾菌器的種類薄膜濾菌器：孔徑0.220.45m時，可除去 濾過除菌法的常用器具2020/11/331 濾過除菌法的常用器具2020/11/331濾菌器2020/11/332濾菌器2020/11/332主要用于防腐六. 滲透壓2020/11/333主要用于防腐六. 滲透壓2020/11/333消毒劑的種類：酚類、醇類、重金屬鹽類、氧化劑、表面活性劑、烷化劑。消毒劑的應用：病人排泄物與分泌物、皮膚、粘膜、飲水、廁所、空氣、手。（常用的化學消毒劑及防腐劑對人體組織都有危害，所以只限于外用或環(huán)境消毒。）第二節(jié) 化學消毒滅菌法用于防腐、消毒甚至滅菌的化學藥物稱為化學

18、消毒劑。只能外用或用于環(huán)境的消毒。2020/11/334消毒劑的種類：酚類、醇類、重金屬鹽類、氧化劑、表面活性劑、烷化學消毒劑的殺菌機制：促進菌體蛋白質變性或凝固如酚類（高濃度）、醇類、重金屬鹽類（高濃度）、酸堿類、醛類；干擾細菌的酶系統(tǒng)和代謝，破壞蛋白與核酸的基團，如某些氧化重金屬鹽類（低濃度）與細菌蛋白的-SH基結合；含氯消毒劑、過氧化物消毒劑等。2020/11/335化學消毒劑的殺菌機制：2020/11/335損傷細菌的細胞膜如酚類（低濃度）、表面活性劑、脂溶劑等能降低細菌菌膜和病毒包膜的表面張力并增加其通透性。2020/11/336損傷細菌的細胞膜2020/11/336 化學消毒劑的種

19、類高效消毒劑：可殺滅所有種類的微生物；包括含 氯消毒劑、過氧化物消毒劑、醛類消毒劑、 環(huán)氧乙烷等。中效消毒劑：能殺滅除芽胞以外的微生物，包括 含碘消毒劑、醇類消毒劑等。低效消毒劑：殺死細菌繁殖體，包括季銨鹽類、 氯已定、高錳酸鉀。 2020/11/337 化學消毒劑的種類高效消毒劑：可殺滅所醫(yī)療器械物品的消毒滅菌：高危、中危、低危 器械物品、快速周轉的醫(yī)療器械。其它情形的消毒滅菌應用：室內空氣、皮膚和 黏膜、排泄物與分泌物、污染物品、環(huán)境 的消毒等。 消毒滅菌的運用2020/11/338醫(yī)療器械物品的消毒滅菌：高危、中危、低危消毒滅菌的運用202特性：使用時需進入無菌組織的物品。 種類：針頭、

20、注射器、手術器械、導管等。處理：所有這些物品都應該滅菌，最好采用高壓 蒸汽滅菌法滅菌，對于不耐熱的物品，使 用高效消毒劑處理。 高危器械物品的消毒滅菌2020/11/339特性：使用時需進入無菌組織的物品。 高危器械物品的消毒滅菌2特性：不進入無菌組織，但需接觸黏膜的器械。 種類：胃鏡、陰道窺器、體溫計等。處理：采用消毒即可，如合適消毒劑的浸泡（使 用前徹底去除消毒劑）、最好采用高壓蒸 汽滅菌法滅菌（器械允許）。中危器械物品的消毒滅菌2020/11/340特性：不進入無菌組織，但需接觸黏膜的器械。 中危器械物品的消特性：只接觸未損傷的皮膚，不進入無菌 組織或不接觸黏膜的物品。 種類：治療盤、治

21、療車、食品器皿等。處理：使用后清洗、消毒處理即可。低危器械物品的消毒滅菌2020/11/341特性：只接觸未損傷的皮膚，不進入無菌低危器械物品的消毒滅菌2消毒劑的主要種類、作用機制及用途1 、酚 類作用：菌體蛋白凝固；損傷細胞膜；滅活酶類。濃度：石炭酸為3%- 5%、來蘇兒為2%。用途：地面、器具表面和皮膚的消毒。2 、醇 類作用機制：使菌體蛋白變性與凝固；干擾細菌代謝。濃度：乙醇70%-75%。用途：用于皮膚的消毒和體溫計等的浸泡。2020/11/342消毒劑的主要種類、作用機制及用途1 、酚 類2020/11/3 重金屬鹽類：使蛋白質變性和沉淀；酶活性喪失。 （1）2%紅汞：皮膚、粘膜和小

22、創(chuàng)傷 （2）0.05-0.01%升汞：非金屬器皿4 氧化劑：氧化作用；使蛋白質變性。 （1）0.1%高錳酸鉀：皮膚、尿道、水果 （2）3%過氧化氫：創(chuàng)傷、皮膚粘膜 （3）2%-2.5%碘酒：皮膚消毒 （4）0.2ppm-0.5ppm氯：飲水和游泳池2020/11/3433 重金屬鹽類：使蛋白質變性和沉淀；酶活性喪失。2020/15、表面活性劑損傷細胞膜；影響酶的活性；蛋白質沉淀（1）0.05%-0.1%新潔爾滅：皮膚粘膜、手術器械（2）0.05-0.1%杜滅芬：傷口沖洗，金屬器械等6、烷化劑： 使菌體蛋白和核酸的烷基化 缺點：有一定的毒性（1）10%甲醛：物品表面、空氣（2）2%戊二醛： 精密

23、儀器、內窺鏡等2020/11/3445、表面活性劑2020/11/344消毒劑的主要類型及應用 類別作用機制 常用種類 酚類蛋白變性，細胞膜損傷 石炭酸 醇類蛋白變性 乙醇 氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸鉀、過氧乙酸 重金屬鹽氧化、蛋白、酶變性 紅汞、硫柳汞 烷化劑蛋白、核酸烷基化 甲醛表面活性劑蛋白變性，細胞膜損傷 新潔而滅 染料干擾氧化、抑制繁殖 龍膽紫2020/11/345消毒劑的主要類型及應用 類別作用機制 常用種類 消毒劑的應用 種類使用濃度 用途石炭酸3-5%地面、器具表面、皮膚消毒乙醇70-75%皮膚、體溫計消毒高錳酸鉀 0.1%皮膚、尿道、蔬菜、水果消毒紅汞 2%皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷

24、消毒硫柳汞0.1%皮膚消毒、手術部位消毒過氧乙酸0.2-0.3%塑料、玻璃器材消毒碘酒2-2.5%皮膚消毒新潔而滅0.05-0.1%手術洗手、浸泡手術器械龍膽紫2-4%淺表創(chuàng)傷消毒2020/11/346消毒劑的應用 種類使用濃度 用途石炭酸3-5消毒劑的應用（一） 病人排泄與分泌物 ：一般用等量的20%漂白粉、5%石炭酸或2%來蘇，攪拌均勻放2h。 皮膚：70%酒精、2.5%碘酒、2%紅汞。 粘膜：3%H2O2用于口腔粘膜消毒、0.01%-0.1%洗必泰或高猛酸鉀用于沖洗尿道、陰道、膀胱等；1%硝酸銀給新生兒滴眼以預防淋球菌感染。飲水：自來水用氯氣、少量的飲水可用漂白粉。 2020/11/34

25、7消毒劑的應用（一） 病人排泄與分泌物 ：一般用等量的20%漂消毒劑的應用（二）手：一般用2%來蘇；0.2%-0.4%過氧乙酸浸泡、2%碘酊涂擦后用70%酒精擦洗（ 2.5%碘酒+70%乙醇），淺表創(chuàng)傷使用2%-4%龍膽紫。 。 廁所、陰溝：生石灰?？諝猓鹤贤饩€照射、化學消毒劑噴霧或熏蒸、甲醛（實驗室）12.525ml/m3加熱熏蒸1224hr或甲醛40ml+高錳酸鉀30g/m3混合熏蒸1224hr，肝炎病房用過氧乙酸3g/m3熏蒸90min。2020/11/348消毒劑的應用（二）手：一般用2%來蘇；0.2%-0.4%過氧影響消毒滅菌效果的因素1、消毒劑的性質、濃度與作用時間 消毒劑在低濃度

26、時，常為防腐劑。2、微生物的種類3、溫度4、酸堿度5、有機物 環(huán)境中有機物的存在，可減弱消毒效果。2020/11/349影響消毒滅菌效果的因素1、消毒劑的性質、濃度與作用時間202第三節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素一、消毒劑的性質、濃度與作用時間1. 理化性質不同，對微生物的作用大小各異。2. 同一種消毒劑的濃度不同，其消毒效果也不同。一般消毒劑在高濃度時殺菌作用大（醇類例外）。3. 消毒劑在一定濃度下，對細菌的作用時間越長，消毒效果也愈好。2020/11/350第三節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素2020/11/350二、微生物的種類與數量1.不同微生物對不同化學消毒劑的敏感性不同。2.同一消毒劑對不

27、同微生物的殺菌效果不同。3.微生物的數量越大，所需消毒的時間就越長2020/11/351二、微生物的種類與數量2020/11/351三、溫度 消毒劑的殺菌作用實質是化學反應，其反應速度隨溫度升高而加快。因此，溫度升高可提高消毒效果。2020/11/352三、溫度 2020/11/352四、酸堿度 消毒劑的殺菌作用受酸堿度的影響。（戊二醛溶液中加入碳酸氫鈉后才有殺菌作用。）五、有機物 環(huán)境中有機物的存在，能夠影響消毒劑的效果2020/11/353四、酸堿度 2020/11/353二、影響消毒劑作用的因素 消毒劑微生物 環(huán)境性質 濃度數量種類有機物溫度酸鹼度作用時間2020/11/354二、影響消毒劑作用的因素 消毒劑微生物 環(huán)境性質 濃