紅細胞血型檢測課件

1、輸 血 前 檢 查 輸血前檢查分為兩個方面: 對供血者進行檢查 對實際接受輸血的患者（受血者）進行的 檢查輸 血 前 檢 查 輸血前檢查分為兩個方面:主要內(nèi)容輸血前免疫血液學檢查鹽水介質試驗技術酶處理試驗技術抗球蛋白試驗技術聚凝胺介質試驗技術微柱凝集試驗技術吸收放散試驗凝集抑制試驗主要內(nèi)容輸血前免疫血液學檢查第一節(jié) 輸血前免疫血液學檢查一、受血者標本處理二、受血者和供血者ABO和Rh定型三、不規(guī)則抗體的篩選和鑒定四、交叉配血試驗五、實驗結果的規(guī)范化報告第一節(jié) 輸血前免疫血液學檢查一、受血者標本處理輸血前檢查的主要程序受血者的病史和血樣本等的檢查、核對及處理。ABO和Rh定型交叉配血試驗標簽和發(fā)

2、血輸血前檢查的主要程序受血者的病史和血樣本等的檢查、核對及受血者病史和血樣的檢查、核對及處理 輸血申請單 血標本要求受血者血樣本受血者病史和血樣的檢查、核對及處理受血者血樣本為什么輸血前檢查用血清比血漿更好？ 有時血漿中可形成小的纖維蛋白凝塊使認讀困難 一些通過補體激活才能反應的抗體，用血漿不能檢出(血漿中抗凝劑能螯和鈣并阻止補體激活)為什么輸血前檢查用血清比血漿更好？ 有時血漿中可形成小的纖維ABO正反定型不符分析基本程序重復試驗重新采集獻血者與受血者血液標本查詢受血者既往病史及輸血史和用藥史等多次洗滌標本紅細胞應用抗-AB、抗-A1、抗-H檢測紅細胞分析O型篩選細胞檢測結果ABO正反定型不

3、符分析基本程序重復試驗復檢正定型血型結果的準確性，糾正漏檢、誤報亞型能夠糾正因疾病原因造成的紅細胞抗原減弱造成的血型錯誤排除獲得性抗原（如類B抗原）和冷凝集現(xiàn)象對紅細胞定型的干擾不規(guī)則抗體ABO正反定型的臨床意義復檢正定型血型結果的準確性，糾正漏檢、誤報ABO正反定型的臨錯加試劑或標本技術和操作受血者紅細胞或血清ABO正反定型不一致的原因試劑失效或污染細胞與血清間比例不適當溶血現(xiàn)象未能識別漏加試劑結果記錄或判斷錯誤血清異常紅細胞致敏近期輸血疾病導致抗原減弱抗體減弱不規(guī)則抗體年齡近期進行大量血漿置換治療錯加試劑或標本技術和操作受血者紅細胞或血清ABO正反定型不一(1) 假凝集（串錢狀凝集）較多見

4、，本身不是抗原與抗體的反應。原因： A 某些肝病、腎病等所致的纖維蛋白原及球蛋白的增高。 B 玻片法實驗長，水分蒸發(fā)。 C 右旋糖酐、輸注某些造影劑等處理：用生理鹽水洗滌多次，重新配制懸液。(1) 假凝集（串錢狀凝集）(2) 冷凝集（自身凝集） 冷凝集素正常人血清中存在，但效價不高，1：16以下，室溫不反應。冷凝集素綜合征是免疫球蛋白M(IgM)抗體引起的自體免疫性疾病，又叫“冷血凝集素病”或“冷凝集素病”。原因：（1）自身免疫性溶血性貧血、病毒性肺炎等（2）室溫過低 處理：37生理鹽水洗滌，并在37做凝集實驗。(2) 冷凝集（自身凝集） 高效價冷凝集素患者的血型鑒定及配輸血的處理1 臨床資料

5、患者，女，56歲，貧血，Hb30g/L，該患皮膚蒼白，呈極度貧血貌，需輸血治療，血型鑒定為AB型，但與AB型交叉配血分歧。2 ABO定型重新血型鑒定，正定型為AB型，反定型ABO均凝集，該患者無輸血史，考慮可能為冷凝集素所致。 逐將做血型之玻片置于37溫箱，10min后觀察可見：抗B側凝集顆粒變小，抗A側不變；升溫至45，抗B側凝集消失，抗A測不變。取出室溫1min后，抗B側復又出現(xiàn)凝集，初步定型為A型；用37鹽水將患者RBC洗滌3次，做正定型為A型；將洗滌RBC 1份加患者血清內(nèi)的冷凝集素用自家吸收后的血清做反定型，也為A型。高效價冷凝集素患者的血型鑒定及配輸血的處理1 臨床資料 3 血清冷

6、凝集效價測定患者不同稀釋濃度的血清與洗滌后的O型RBC做玻片凝集試驗，室溫時測得冷凝集效價為1:2000。4 配血及輸血用A型血按常規(guī)方法做鹽水配血試驗，主側出現(xiàn)凝集次側因該患RBC自家凝集成顆粒狀，不能進行。用37鹽水洗滌后的RBC配成0.05L/L的RBC懸液與A型血清做次側交叉，無凝集及溶血。用前述自家吸收后的血清與A型RBC做次側交叉，無凝集及溶血。交叉顯示可以輸血，考慮該患冷凝集素效價太高，要求臨床保溫輸血，室溫控制在2530。輸A型血200ml，無不良反應。后按同樣方法兩次繼續(xù)輸A型血800ml ?；颊呔鶡o不良反應。因本地缺免疫抑制藥，患者自行出院往北京，在中日友好醫(yī)院診斷為冷凝集

7、素引起的免疫性溶血性貧血。經(jīng)北京紅 十字中心血站鑒定冷凝集素為抗I。 3 血清冷凝集效價測定患者不同稀釋濃度的血清5 討論多數(shù)正凡人的血清中有低效價冷凝集素，但效價一般不超過1:16，且在20時凝集即可消失。本例患者由于病理變化，血清中出現(xiàn)高效價冷凝集素抗-I，在37還能與自身RBC發(fā)生明顯凝集，使血型鑒定出現(xiàn)誤判，并影響交叉配血。 碰到此種情況應該留意：血型鑒定時先用37鹽水洗滌被檢RBC 23次，以消除冷凝集素造成的鑒定錯誤。交叉配血時，次側RBC也應該用37鹽水洗3次，主側血清先做自家吸收試驗吸收冷凝集素，以防冷凝集素造成的配血困難。冷凝集素效價太高時，提高室溫2530下反應是行之有效的

8、方法。5 討論多數(shù)正凡人的血清中有低效價冷凝集素，但效價一(3)類B 現(xiàn)象：原因： 被腸道桿菌感染的病人（O、A型），其紅細胞獲得一種“類B”抗原（變成B、AB型），但血清中含有正常的抗B?，F(xiàn)象： 凝集較疏松，游離RBC多，不受溫度的影響，唾液中無B型血型物質，與AB血清不凝集，只與抗B反應病情好轉，類B消失。處理：用唾液定血型 吸收放散試驗（吸附的抗體通過加熱等從RBC上釋放出來） (3)類B 現(xiàn)象：RhD定型及其常見問題1.Rh定型RhD定型，試管法最經(jīng)典，多使用微柱凝膠卡2.RhD陰性確認IgM抗-D陰性三個廠家IgG抗-D進行確認抗人球蛋白法進行確認三種IgG抗-D試劑均為陰性，報Rh

9、D陰性一種或一種以上IgG抗-D試劑為陽性，報弱DRhD定型及其常見問題1.Rh定型三個廠家IgG抗-D進行確三. 交叉配血（Crossmatching）目的：驗證血型、發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體 輸血前必做，是安全輸血的根本保證。主側：檢測病人血清中有無破壞供者RBC的 抗體存在。（受血者血清+供血者RBC）次側：檢測供者血清中有無破壞病人RBC的 抗體存在。（供血者血清+受血者RBC ）受血者血清對受血者紅細胞, 稱為自身對照三. 交叉配血（Crossmatching）受血者血清對交叉配血的主次側交叉配血的主次側接收申請單和血標本 核對無誤（如有錯誤與醫(yī)生/護士聯(lián)系）進行交叉配血 相合結果輸入微機不相

10、合打印發(fā)血單血液中心交叉配血工作流程接收申請單和血標本 核對無誤進行交叉配交叉配血的要求交叉配血應在37C孵育，除了鹽水介質法外，至少要有抗球蛋白試驗。主側交配絕對不可以有凝集和溶血現(xiàn)象，次側交配，在允許條件下可以有凝集現(xiàn)象，但不可以溶血。交叉配血的要求交叉配血應在37C孵育，除了鹽水介質法外，至少試驗方法鹽水介質試驗酶介質試驗 菠蘿酶，無花果酶，木瓜酶抗球蛋白介質試驗 經(jīng)典方法、加LISS（低離子介質溶液）的方法聚凝胺介質試驗微柱凝集試驗試驗方法鹽水介質試驗鹽水介質凝集試驗懸浮于鹽水介質中的紅細胞與相應抗體分子結合，交叉聯(lián)結形成肉眼可見的凝集。主要檢測IgM類抗體（ABO系統(tǒng)、抗E）?？笰抗

11、B特異性IgG類抗體有時可直接凝集懸浮于鹽水中的紅細胞，與紅細胞表面抗原位點數(shù)目和抗原決定簇位置有關。 鹽水介質凝集試驗懸浮于鹽水介質中的紅細胞與相應抗體分子結合，鹽水介質凝集試驗方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結果 試管法-適用于不同溫度、便于洗滌反應溫度：422臨床意義：鹽水凝集試驗陽性，并在37也有活性的抗體有意義，這些抗體通常能用其他方法證明。室溫有活性，37無活性者臨床意義不大。 鹽水介質凝集試驗方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結果 試驗記錄4+（+）：一個大凝集塊，背景透明，無游離細胞3+（+）：數(shù)個大凝集塊，背景透明，無游離細胞2+（+）：許多小凝集塊，背景稍混濁，有游離細胞1+（+）：

12、細小的凝集塊，背景渾濁W+（）：極細小凝集塊，要用顯微鏡觀察結果0（-）：無凝集，無溶血，細胞呈游離散在狀態(tài)PH：部分溶血H：完全溶血 試驗記錄試管法結果判定紅細胞凝集強度判斷標準試管法結果判定紅細胞凝集強度判斷標準鹽水介質凝集試驗結果分析：陽性-凝集或溶血 陰性-無凝集或溶血先觀察有無溶血、再觀察有無凝集注意事項：細胞濃度25%（嚴格按說明書操作）、血清與細胞比例、反應溫度、弱凝集分析優(yōu)點：簡便、快捷、直觀。缺點：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。鹽水介質凝集試驗結果分析：陽性-凝集或溶血 酶介質凝集試驗 原理：紅細胞表面有豐富的唾液酸，帶有負電荷，使紅細胞相互排斥。 蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少

13、紅細胞表面的負電荷以及紅細胞之間的排斥力，縮短了紅細胞之間的距離，使IgG分子能與有相應抗原的紅細胞產(chǎn)生凝集。酶介質凝集試驗 原理：紅細胞表面有豐富的唾液酸酶介質凝集試驗 常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶。方法：期法-酶液直接加入血清和細胞的混合物中。 期法-用酶處理細胞再與血清進行反應。兩種方法比較：期法 操作方便 期法 敏感酶介質凝集試驗 常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰優(yōu)點： 成本低，快速。 缺點：（1）破壞某些抗原（如MN，Duffy） （2）酶批次不同，活性不同，難以標 準化。 （3）需確定最適孵育時間，處理過度 則會降解IgG。 （4）假陽性高。 應用：現(xiàn)已少用，主要用于ABO

14、新生兒溶血病 檢查，Rh抗體篩檢。酶介質法優(yōu)點： 成本低，快速。酶介質法用于測定在體外能引起紅細胞致敏的抗體。用不完全抗體測定紅細胞血型，如Rh血型。交叉配血。3抗人球蛋白法：又稱Coombs試驗。是最早用于檢查不完全抗體的方法。主要用于檢測IgG、IgA等抗體參與的抗原-抗體反應，也可測定補體組分C3、C4片段參與的免疫反應用于測定在體外能引起紅細胞致敏的抗體。3抗人球蛋白法：又稱第一階段致敏階段 第二階段 真凝集階段直接法可檢查受檢者的紅細胞是否已被不完全抗體致敏；間接法可用于鑒定Rh血型及血清中是否存在不完全抗體第一階段 第二階段直接法可檢查受檢者的紅細胞是否已被不完全抗球蛋白試劑不純假

15、陽性假陰性紅細胞洗滌已凝集紅細胞質量不抗凝標本漏加試劑離心過度紅細胞、血清及試劑質量洗滌不充分操作過程不連續(xù)離心過度紅細胞過多或過少血清濃度過大孵育時間和溫度不當前帶現(xiàn)象間接抗球蛋白試驗鹽水保存不當紅細胞直抗陽性抗球蛋白試劑不純假陽性假陰性紅細胞洗滌已凝集紅細胞質量不抗凝 優(yōu)點：經(jīng)典，特異（金標準），可測補體致 敏，受冷凝集素影響相對少。 缺點：煩瑣（需兩次三洗），孵育時間長，不適用于急診和血庫存的大批量工作。且易受殘留血清蛋白影響。 注意事項：每次試驗要設有陰性和陽性對照；實驗器材清潔；注意抗原抗體比例、孵育時間、溫度等條件，嚴格按照實驗方法操作；排除自身抗體干擾抗人球蛋白法抗人球蛋白法低離

16、子聚凝胺技術原理 聚凝胺（Polybrene），一種高價離子季胺鹽多聚物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細胞表面的負電荷，使紅細胞之間距離減少，能引起正常紅細胞可逆性的非特異性凝集。如果是抗體致敏的紅細胞被聚凝胺凝集，則凝集不可逆。低離子聚凝胺技術原理 1 紅細胞間有一定間距2 加入聚凝胺后，可以縮短紅細胞之間的距離，使其非特異性凝集3 加入枸櫞酸鈉，可以中和聚凝胺4 紅細胞的非特異性凝集消失聚凝胺交叉配血技術示意圖1聚凝胺枸櫞酸鈉1 紅細胞間有一定間距聚凝胺交叉配血技術示意圖1聚凝胺枸櫞酸1 紅細胞上已有不完全抗體致敏2 加入聚凝胺后，縮短紅細胞之間的距離，讓不完全抗體可以同時與兩個紅細胞結合使其特異性凝集3 加入枸櫞酸鈉中和聚凝胺4 由于不完全抗體的結合，紅細胞的特異性凝集不消失聚凝胺交叉配血技術示意圖2聚凝胺枸櫞酸鈉不完全抗體1 紅細胞上已有不完全抗體致敏2 加入聚凝胺后，縮短紅細胞之優(yōu)點：快速，方便，適于急診，試劑易保存， 可測IgG、 IgM。缺點：易受冷凝集素和肝素等