育種winrar壓縮文件第12章單倍體

1、第12章雌核發(fā)育和雄核發(fā)育第一節(jié)雌核發(fā)育一雌核發(fā)育的概念（假受精）雌核發(fā)育：合子的發(fā)育是在卵子細(xì)胞核的控制下完成的二 精子染色體的遺傳失活和雌核發(fā)育的誘導(dǎo)經(jīng)過精子的遺傳失活和卵子染色體的二倍化 (一) 獲得遺傳上失活的精子1、化學(xué)藥品處理 甲苯胺蘭、乙烯脲吖啶黃等處理可以使精子遺傳失活，進(jìn)而誘發(fā)雌核發(fā) 育，只是需要找出適當(dāng)?shù)奶幚頋舛群吞幚頃r同。2、射線處理：紫外線、X射線或射線等處理后的失活精子來“受精”可用r射線直接照射精液原液(O51厘米，劑量15萬倫琴，可獲得雌核單倍體。有的用r射線照射精液其劑量為10萬拉德，劑量率182拉 德秒r射線與x射線具有較好的穿透力，便于大量 精子的處理，它們

2、主要誘發(fā)染色體斷裂，輻射劑量要低，低溫可延長精子受精活性，輻射過的精子比正常精子比正常精子活性差，因此，不宣保存太久，最好輻射后及時進(jìn)行人工授精。紫外線輻照較易操作，比r射線和射線危險性小，紫外線設(shè)備廉價，但它的缺點(diǎn)是穿透力弱，處理時必須注意到精液不能鋪得太厚，并且紫外線照射DNA有光復(fù)活作用，要在暗處處理。3、雜交誘導(dǎo)三、雌核發(fā)育二倍體的誘導(dǎo) 同多倍體誘導(dǎo)吳清江和蔣一珪1981年用射線處理鏡鯉和野鯉精子，照射時與三倍的HANKS液混合，劑量率130157R/分鐘，總劑量15萬R。樓允東把用4倍HANKS液混合的鯉魚精子，（厚度0.51毫米），用30瓦紫外燈2537A） 距離17厘米，照射2小

3、時，精子醉漢狀游動，對紅鏡鯉卵的激活率82%。四、雌核發(fā)育二倍體的鑒定1、流式細(xì)胞儀2熒光顯微分析3、染色體分析4、同工酶電泳5、分子標(biāo)記 鑒定6、形態(tài)學(xué)分析五、 人工雌核發(fā)育的應(yīng)用（）、建立純系：若母體是雜合體，那么雌核發(fā)育后 (般指雌核發(fā)育二倍體)的純合程度將存在三種情況 A 二倍化是由于阻止了第一極體的形成和排出，由此產(chǎn)生的雌核發(fā)育子代的雜合性與母體相同，但是這樣情況在魚類很少見或不存 B二倍化是由于阻止第二極體的形成和排出，純合度較高，但仍有些是處于雜合狀態(tài)，雜合程度取決于第一次減數(shù)分裂期間的基因互換頻率。這種情況普遍若在于魚類 C 二倍化是在第二極體排出后，由于阻止第一次卵裂紡絲的形

4、成 ，所有的基因處于純合狀態(tài)(除突變外)是理想的純合體，可直接用于建立純系。我國已應(yīng)用雌核發(fā)育技術(shù)建立了紅鯉8305及8413兩個純系。（二）、性別控制：XY和ZW型如用興國紅鯉雌性純合系作母本，與經(jīng)雄激素反轉(zhuǎn)的散鱗鏡鯉雌核發(fā)育二倍體雄魚(xx)雜交，產(chǎn)生了具有生長優(yōu)勢的全雌后代，已在生產(chǎn)中推廣，獲得良好的經(jīng)濟(jì)效益 （三）、遺傳分析 1、確定性別遺傳機(jī)制：如果雌孩發(fā)育的后代全是雌的，即可斷定該種群的性別遺傳機(jī)制屬于雌性同配。如果雌核發(fā)育的后代個體中有雌有雄，或者全是雄（ ww個體不能成活)，即可推新其性別遺傳機(jī)制是雌性異配 如泥鰍雌核發(fā)育二倍體的研究表明，泥鰍的性別遺傳機(jī)制屬于雌性同配；比目魚

5、的性別決定機(jī)制為雌性異配，而且其(ww)超雌個體能夠成活。 2、確定(研究)外界因素對遺傳性或表型的影響：雌核發(fā)育所繁延的后代，由于基因型相同，個體間的性狀差異幾乎可以排除或忽略遺傳因素的影響。 第一次減數(shù)分裂期間，同源染色體會發(fā)生交換，經(jīng)抑制第二扳體的排出而得到的雌核發(fā)育二倍體不是完純合的。通過表現(xiàn)型測定二倍體中某一基因雜合狀態(tài)的機(jī)率，可知道這基因在染色體上的位置 ，畫出基因連鎖群的基因圖距。同時由于純合性，也此有利于查證隱性基因是否存在。 （四），提高產(chǎn)量中科院水生生物研究所采用雜交的方法，用方正銀鯽與輻射過的興國紅鯉的精子進(jìn)行人工授精，獲得了具專生長優(yōu)勢的雌核發(fā)育后代，被稱為異育銀鯽，其

6、生長速度比方正銀鯽自繁子代快37倍，比當(dāng)?shù)伥a魚快23倍，已應(yīng)用于生產(chǎn)并取得較高的經(jīng)濟(jì)效 由于是高度自交，成活率低，生長緩慢，從孵化到主動攝食死亡率更高。如鯉魚在胚胎發(fā)育的前2周，成活率50%，這期間，外部少許畸形的個體通常死亡。第二節(jié)雄核發(fā)育雄核發(fā)育是指卵子只依靠雄性原核進(jìn)行發(fā)育的生殖方式。 、卵子染色體遺傳失活和雄核發(fā)育的誘導(dǎo) 人工誘發(fā)雄核發(fā)育也要經(jīng)過失活卵子染色體和使雄核二倍化兩個步驟。 1、使卵子染色體失活 (1)去除卵核：受精后，于卵子排出第二極體后，用玻璃針從極體排出點(diǎn)附近挑出卵核 2)射線破壞卵核： 。 用射線照射卵核來破壞卵內(nèi)細(xì)胞核，所用射線有紫外線、x射線、r射線等。具體方法是

7、將成熟卵擠入試管，放在有冰塊的冰瓶內(nèi)照射，而后授精。 草魚（雌）鯉魚（雄），興國紅鯉草魚，紅鯽草魚的雜交中都獲得不同比例的雄核發(fā)育后代，有的是雄核發(fā)育二倍體，有的是單倍體。 (3)卵子過熟或老化 過熟或老化的卵子，染色體會自發(fā)畸變，這類似于受射線照射的卵子。如將排卵虹鱒放在2的池子里養(yǎng)45周，這樣使卵過熟，然后用同種精子受精，誘發(fā)100的雄核單倍體。 2004年LI和袁媛用紫外線照射卵子，誘導(dǎo)了太平洋牡蠣和櫛孔扇貝雄核發(fā)育的個體。如CO60，36000R使卵子遺傳失活，再用630KG/CM2在受精后345分鐘處理了3分鐘，得到雄核發(fā)育二倍體。1995年，NYERS等用150微瓦/平方厘米的紫外

8、線照射尼羅羅非魚卵子58分鐘，在受精后2030分鐘，用42.5處理4分鐘，得到。雄核發(fā)育二倍體也可以通過抑制第一次卵裂獲得，有人用4042高溫抑制第一次卵裂獲得了鯉魚，羅非魚雄核發(fā)育二倍體。熱休克方法獲得了斑馬魚、泥鰍、虹鱒六帶鲃（BA）的詞和發(fā)育二倍體。2、雄核染色體二倍化 二倍化的原理和方法與雌核發(fā)育二倍化一樣，可用溫度休克的方法，電可用靜水壓等方法等使之二倍化，否則也具有單倍體綜合癥難以成活。 有些學(xué)者用細(xì)胞核移植的方法使之二倍化 ，如將泥鰍精子和大鱗副泥鰍卵質(zhì)構(gòu)成的雄核單倍體囊胚細(xì)胞的細(xì)胞核，移植到大鱗付泥鰍的去核卵中，獲得296的雄核發(fā)育二倍俸，并培育出5尾二公分以上的個體。 二、雄核發(fā)育的應(yīng)用1 建立純系。這一點(diǎn)要比雌核發(fā)育更優(yōu)越。因?yàn)樾酆l(fā)育沒有雌性原核的參預(yù)，不受第一、第二次減數(shù)分裂的影響，無論何種方法所產(chǎn)生的雄核二倍體，一切基因位點(diǎn)都處于純合狀態(tài)。2確定