PCR實驗室操作流程資料講解

1、精品文檔精品文檔精品文檔精品文檔乙型肝炎病(HBVNAPCRABI730) 側(cè)標準操作程序一、INFORMATIONFORTET測信息項目名稱項目名稱乙型肝炎病毒核酸方法聚合酶鏈反映方法依據(jù)（2006）第七篇第六章第一節(jié)二、ANALYTICALPRINCTPE測原理聚臺酶鏈式反映(PCR而實時熒光定量PCRPCRPCRPCRTaqManPCRNA。這樣就可以經(jīng)過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。三、操作步驟（一）試劑配制、進入試劑準備區(qū)，開啟冰箱冷凍層取出 HBV-NATaqHBVPCRTaq（圖120min，完全融化后 2000rpm2、核酸提取液的分裝取 0.5ml

2、30 （注意應(yīng)夾住離心管外壁，不能碰到管內(nèi)壁)，擺放順序為橫列從左往右擺，豎列為從上往下隔行排，離心管個數(shù)為n(n后將鑷子放回原位（圖。50ul0.5m1上角第一排開始，從左住右依次加入。因核酸提取液內(nèi)含固體沉淀顆粒物，為使顆粒均勻分布，故每次取樣時都要用移液器反復(fù)吸打3-4次（圖。分裝完畢后將移液器量程歸位。加完一架后用右手拿鑷子將離心管拿起，左手大拇指和中指夾始，從右住左依次蓋上（圖 ，離心管蓋全部蓋完后，經(jīng)過傳遞窗轉(zhuǎn)移至標本處理區(qū)。3、HBV-NA反映液的配制每批需設(shè)置空白關(guān)于照、陰性關(guān)于照、臨界陽性關(guān)于照（n試劑HBV PCR反映液Taq 酶用量（ul）35.70.3HBV-NA32算

3、出每批所需HBVPCR 反映液和Taq（例有111310ulTaqHBV PCR反映液中，另有111-3*32=15人份試劑需將HBVPCR 反映液和Taq1.5m1（圖5。HBV PCRTaq后用旋渦振蕩器振蕩混勻 5-10sec，然后再用離心機 2000rpm10sec備用（圖。HBV-HA200u1 7。編號規(guī)則為：樣本擴增反映管關(guān)于應(yīng)的孔位按相（如有高值則標為，低值為LB，1 號標準品關(guān)于應(yīng)的孔位編“S，2號標準品關(guān)于應(yīng)的孔位編“SABI7300Taq 酶的PCR36ul)，準確吸取反映液并且按從上到下、從左至右的順序依次加至成氣泡（圖 理區(qū)。（二）標本處理1、標本、質(zhì)控品及關(guān)于照品的

4、處理HBV NA20min上相應(yīng)的流水號，如AICON AICON P 00012016-01-12、從傳遞窗中取出試劑準備區(qū)分裝好核酸提取液的離心管架，移至 生物安全柜內(nèi)在管蓋上用記號筆寫上阿拉伯數(shù)字 1、3、（如有高值則標為H，低值為L)1，就表示該管要加入流水號為P0001的標本（圖1。精品文檔精品文檔注意：每個離心管的編號方向都應(yīng)朝向管口開啟的方向（11）精品文檔精品文檔精品文檔精品文檔、去除標本管蓋：將標本從前處理取至標本準備區(qū)，按排列順序依 1（注意：手指切勿接觸到血清管口或碰觸到血清，如手也需更換新的手套。)4、樣本及關(guān)于照品的處理：200u150u13-5（13）檔精品文檔精品

5、文檔（圖1。再用左手按前面所述樣本流水號和離心管編號的關(guān)于應(yīng)關(guān)系拿起相 拇指稍向后上方發(fā)力打開管蓋，手指切勿碰到離心管口和管蓋內(nèi)側(cè))（圖1。精品文檔精品文檔精品文檔精品文檔3-5（16）加樣完畢后棄槍頭干盛有消毒液的垃極桶中(注：一個吸頭只能用上離心管蓋并且放回離心管架(放回的位置需另起一行，切不可放回原位)，繼續(xù)處理下一個樣本。關(guān)于照品和質(zhì)控品同病人樣本一樣處理。（圖 17）精品文檔精品文檔精品文檔待一架離心管全部加樣完成后用振蕩混勻器充分振蕩混勻 10-15 秒。10min(誤差不超過30sec（18）致標本間的污染（圖1。精品文檔精品文檔精品文檔屬浴中拿出離心管（圖2。12,OOOrpm10min0.5m1（圖2。精品文檔精品文檔精品文檔j.待離心結(jié)束后，取出離心管并且按編號順序依次擺放在離心管架上 （圖 10）的排列方式)并且 4C則應(yīng)保存在一20C20mi12,OOOrpm10min。、待全部樣本加樣完畢更換手套，左手用鑷子夾起反映管蓋的一側(cè)不要碰到其他未蓋的反映管口)（如圖2。精品文檔精