免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件

1、免疫化學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)技能免疫化學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)1、定義用標(biāo)記的特異性抗體對組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中某些化學(xué)成分的分布和含量進(jìn)行組織和細(xì)胞原位定性、定位或定量研究,這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)( immunohistochemistry)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)( immunocytochemistry)技術(shù)。1、定義2、原理根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合,再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng),最后通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分,在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。

2、2、原理常用的標(biāo)記物有光膏、和性網(wǎng)健:標(biāo)記熒光素的稱為兔光造,常用的熒光素有異硫氰酸熒光素(FTC)、羅丹明( rhodamine)等。標(biāo)記酶的稱為兔,常用的酶有辣根過氧化物酶( horseradish peroxidase)等。標(biāo)記同位素的稱為兔,常用的同位素有3H、c、32s和P等。常用的標(biāo)記物有光膏、和性網(wǎng)健:講解提綱石蠟切片/冰凍切片二、免疫酶/免疫熒光、酶朕免疫吸附試驗(yàn)講解提綱(1)石蠟切片的制作取材、固定洗滌蒸餾水洗滌2遍50%70%、80%酒精各15min,95%酒精脫水酒精I(xiàn)、各15min,無水乙醇I、各15min,無水乙醇/二甲苯(1:1)15min選明、浸二甲米約2mBn元

3、甲石蠟(:13mn純蠟I各30r包、切片常規(guī)石蠟切片,切片厚度為7m晨片、烤片于干凈載玻片上進(jìn)行展片,37烤千(1)石蠟切片的制作Q取材根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?選擇相應(yīng)的材料,材料要求新鮮、準(zhǔn)確、完整,材料要避免擠壓、挫傷、千枯。所采集材料應(yīng)立即放入固定液,并編號,注明采集時(shí)間、名稱、組織部位,所取組織塊要大小適當(dāng),即要能說明問題,又要考慮固定劑的穿透能力如:角膜、TEHC等組織材料細(xì)胞材料肝臟、魚卵Q取材國固定取材后,應(yīng)立即進(jìn)行固定。固定是制片極為關(guān)鍵的一個(gè)步驟,制片質(zhì)量的優(yōu)劣除與材料的新鮮程度有關(guān)外,還取決于最初的固定是否適當(dāng)和完全。固定的意義新鮮的組織被割取后,由于細(xì)胞內(nèi)酶的作用和細(xì)菌的繁殖

4、,可引起組織的自溶和腐敗。因此,割取組織塊后,應(yīng)立即采用一種方法.將組織盡可能保持原有的形態(tài)結(jié)構(gòu),且有利于保存和適于制片的操作,這一步驟稱為固定。國固定固定的目的和作用在于防止組織自溶和腐敗;使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、糖、脂肪等各種成分沉淀保存下來從而保存細(xì)胞的各種組成成分使其保持與生活時(shí)相近似的形態(tài)和結(jié)構(gòu);因沉淀及凝固的關(guān)系,使細(xì)胞內(nèi)不同的成分產(chǎn)生不同的折光率,造成光學(xué)上的差別,使原來在生活情況下看不清楚的結(jié)構(gòu)變得清晰易見,且有的固定劑還有助染作用(如醋酸、苦味酸),從而使細(xì)胞各部易于染色;固定劑還兼有硬化作用,使柔軟組織硬化而不易變形,有利于操作。固定的目的和作用在于名稱10%甲醛4%多聚苦味酸冰

5、醋酸鋨酸甲醛固定效果好好沉淀一對染色好切蛋白質(zhì)固定好組織收縮大小大小小主要用途常規(guī)病理免疫化不單獨(dú)不單獨(dú)電鏡切片使用使用核型缺點(diǎn)長期用其固定的滲透力使組織價(jià)格昂固定的組時(shí)間不弱,對膨脹,貴;有織變?yōu)樗嵋颂L,組織收一般不性不利于以24小縮大單獨(dú)使染色,特時(shí)以內(nèi)用別是細(xì)胞為宜核的著色名稱10%甲醛4%多聚苦味酸冰醋酸鋨酸免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共7

6、8張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)

7、技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫

8、細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78張課件免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技能總結(jié)共78