DB33-T 2024-2017人體毛發(fā)中苯丙胺類興奮劑、嗎啡、6-單乙酰嗎啡和氯胺酮的檢測方法

ICS 13.310A92

DB33浙 江 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB33/T2024—2017人體毛發(fā)中苯丙胺類興奮劑、嗎啡、6－單乙酰嗎啡和氯胺酮的檢測方法DeterminationofAmphetamines,Morphine,6-MonoacetylmorphineandKetamineinhumanhair2017-02-20發(fā)布 2017-03-20實施浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布DB33/T2024DB33/T2024—2017PAGEPAGE14前 言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省公安廳提出并歸口。人體毛發(fā)中苯丙胺類興奮劑、嗎啡、6－單乙酰嗎啡和氯胺酮的檢測方法范圍AP（AP3,4（A、3,4（MM）、6M）ET本標(biāo)準(zhǔn)適用于人體毛發(fā)中苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基甲基苯丙胺、嗎啡、6－單乙酰嗎啡和氯胺酮的定性定量分析。GB/T6682GA/T122毒物分析名詞術(shù)語下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1分子馬達MolecularMotorATP酶分子馬達生物傳感器。

第一法分子馬達法原理3,4-3,4-6GB/T66823,4-3,4-6保存。260nm～630nm。0.1mg。量筒：500。燒杯：1000。200μL，1mL，10。（采樣示意圖見附錄A。稱取5.0mg剪碎至1mm的頭發(fā)樣品（7.1）置于潔凈容器中，加入500μL裂解液（5.2）95℃水?。?.3）5min。水浴結(jié)束后加入500μL緩沖液（5.2），混勻，待測。本步驟需在室溫（22℃～25℃）下進行。將除裂解液和緩沖液外所有試劑（5.2）從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫放置60min，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。分別向分子馬達檢測板（5.2）中加標(biāo)準(zhǔn)品（5.2）或樣本（7.2.1）、啟動液（5.2）和抗體（5.2）各50μL/孔，放置15min。（5.2）2503（5.2）10010（6.1）中測定，5min內(nèi)檢測完成。標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值除以空白樣品的吸光度值，再乘以100%，即公式（1）：式中：A—A0—0

EA100% （1）A05mg1010ng/mg88ng/mg15ng/mg15ng/mg第二法氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法原理人體毛發(fā)中苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基甲基苯丙胺、嗎啡、6-單乙酰嗎啡和氯胺酮經(jīng)甲醇提取并衍生后，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定，特征碎片離子定性，外標(biāo)法定量。原則除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。試劑甲醇（CH3OH）丙酮（CH3COCH3）乙腈（CH3CN）（CH3COOC2H5）：（C12H25SO3Na）。0.1g/100mL0.10g（11.2.5）100mL容量瓶，搖勻后備用。（C4F6O3）。N,O-雙（（C8H18F3NOSi2）。標(biāo)準(zhǔn)品（S3629（S38170933,4（S46174、3,4-6（CAS：6740-88-1）99%。（1mg/mL）：3,4-亞甲二3,4-0.01g（0.0110mL-181年。6（1mg/mL）：60.01g（0.01mg）10mL-181（10.010.01mg）于10mL常量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，置于-18oC冰箱保存。保存期為1年。10ng/mL、20ng/mL、50、100ng/mL、200、500ng/mL的416610ng/mL20ng/mL50ng/mL100200ng/mL、500ng/mL41（11.4.3）10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL41（EI）0.1mg0.01mg。10000r/min。10。見7.1。0.1%（11.2.6）10（11.1）（11.2.2）10mL1mm提取取20.00.1mg）（13.2）10（12.10）2.0mL（11.2.1）603離心540按以上操作處理三份試樣，一份用于檢測苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基甲基苯丙胺，一份用于檢測嗎啡和6－單乙酰嗎啡，一份用于檢測氯胺酮。衍生3,4-3,4-離心管殘渣（13.3）中加入250μL乙酸乙酯（11.2.4）和250μL三氟乙酸酐（11.2.7）置于60℃30min40500μL（11.2.4）2μL質(zhì)（11.4.4）2506（13.3）250μL250μLN,O-雙（（11.2.8）6030min40500μL2μL質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線衍生：取嗎啡和6－單乙酰嗎啡混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（11.4.5）各250μL，40℃氮氣吹干后按照上述同樣步驟操作。注：衍生過程中注意保持無水條件。氯胺酮離心管殘渣（13.3）用500μL甲醇（11.4）溶解，取2μL，進氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線：取氯胺酮工作液（11.4.6）各2μL，進氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。氣相色譜質(zhì)譜參考條件如下：HP-5（30μm）柱溫：1001.0min10℃/min15025℃/min280℃，10min；c) 99.999%1.0mL/min；250℃；2μL；70eV；150℃；230℃；280℃；SIM。33,4-3,4-6。表1 苯丙胺類奮衍物嗎啡衍物氯酮留時與片子化合物參考保留時間（min）碎片離子（m/z）苯丙胺衍生物5.8140*，118，91甲基苯丙胺衍生物6.9154*，110，1183,4-亞甲二氧基苯丙胺衍生物8.6135*，162，2753,4-亞甲二氧基甲基苯丙胺衍生物9.3154*，135，162嗎啡衍生物12.7429*，414，2366－單乙酰嗎啡衍生物13.1340*，399，287氯胺酮10.0180*，209，152注：帶“*”的為定量離子對。2表2 相對子度的大許相誤(）相對離子豐度比≥5020～5010～20≤10允許的相對誤差±20±25±30±50采用工作曲線法或單點校正法。13.3～13.5采用單點校正法時待測毛發(fā)中目標(biāo)物濃度在空白檢材中添加目標(biāo)物濃度的±50%內(nèi)。待測樣品應(yīng)按以上步驟同時平行測定兩份。工作曲線法按式（2）計算待測樣品中苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基甲基苯丙胺、嗎啡、6－單乙酰嗎啡及氯胺酮濃度：XcV （2）m式中：X——毛發(fā)中目標(biāo)物的濃度，單位為納克每毫克（ng/mg）；c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出的毛發(fā)中目標(biāo)物的濃度，單位為納克每微升（ng/μL）；V——試樣的定容體積，單位為微升（μL）m——試樣質(zhì)量，單位為毫克（mg）。根據(jù)毛發(fā)樣品及添加樣品中目標(biāo)物定量離子對峰面積，按式（3）計算出其中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度。AcX（3）A0式中：X——毛發(fā)中目標(biāo)物的含量，單位為納克每毫克（ng/mg）；A——待測毛發(fā)中目標(biāo)物的峰面積；A0——添加毛發(fā)樣品中目標(biāo)物峰面積；c——添加毛發(fā)樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫克（ng/mg）定性3,4-3,4-定量在平行試驗中兩份檢材測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%，結(jié)果按兩份檢材濃度的平均值計算。當(dāng)毛發(fā)取樣量為20mg時，苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基甲基苯丙胺、嗎啡、6－單乙酰嗎啡和氯胺酮的方法檢出限為0.3ng/mg，定量限為1ng/mg。本方法添加濃度為1ng/mg～25ng/mg時，回收率為70%～110%。第三法液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法原理3,4-3,4-6－原則除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。試劑甲醇（CH3OH）丙酮（CH3COCH3）乙腈（CH3CN）甲酸（HCOOH）0.1%1mL（18.2.4）1000mL（C12H25SO3Na）。0.1g/100mL0.10g（18.2.6）100mL容量瓶，搖勻后備用。0.22。標(biāo)準(zhǔn)品（S3629S38170933,4（S461743,4-6（CAS：6740-88-1）99%。（13,4-60.010.0110mL-181（18.4.1）0.1%（18.2.5）+（18.2.1）（9+1）2ng/mL、4ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、100ng/mL的（ESI）。0.1mg0.01mg。10000r/min。10。見13.1和13.2。提取20.010mL2.0mL（18.2.1）603h，4000r/min5401L0.11.2.18.2（9）（18.2.8）液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜參考條件如下：C18mm，2μm）A0.1B0.10.2mL/min；d）柱溫：40℃；5μL；3：表3 梯度脫序時間（min）0.1%甲酸水0.1%甲酸乙腈0.0090103.5075254.505955.005955.0190106.509010h）4.5kV；i）3.0L/min；j）干燥氣：氮氣15L/min；k）碰撞氣：氬氣，99.99%；l）DL溫度：250℃；400℃；（MRM）；2/MRM4；表4 苯丙類奮、啡單乙嗎及酮MRM參數(shù)化合物名稱參考保留時間（min）定性和定量離子對（dllti/msQ1PreBias（DP）/V（CE）/eVQ3PreBias（DP）/V苯丙胺2.1136.0/91.0*17-14-20-30136.0/119.017-14-15-11甲基苯丙胺2.4150.0/91.0*17-15-22-16150.0/119.017-15-18-113,4-亞甲二氧基苯丙胺1.9180.1/163.1*17-19-21-25180.1/135.117-18-13-293,4-亞甲二氧基甲基苯丙胺2.1194.2/135.3*17-19-21-25194.2/163.417-19-13-29嗎啡0.9286.0/201.0*17-14-26-21286.05/185.017-29-44-30表4 苯胺興劑嗎啡單酰啡氯酮MRM參（）化合物名稱參考保留時間（min）定性和定量離子對（dllti/msQ1PreBias（DP）/V（CE）/eVQ3PreBias（DP）/V6－單乙酰嗎啡2.4328.0/165.0*17-15-35-15328.0/211.017-15-35-15氯胺酮3.5238.0/124.9*17-25-26-22238.00/207.1017-26-14-20注：帶“*”的為定量離子對．5表5 相對子豐比最允許對差(）相對離子豐度比≥5020～5010～20≤10允許的相對誤差±20±25±30±50采用工作曲線法或單點校正法。20.2采用單點校正法時待測毛發(fā)中目標(biāo)物濃度在空白檢材中添加目標(biāo)物濃度的±50%內(nèi)。待測樣品應(yīng)按以上步驟同時平行測定兩份。工作曲線法按式（4）計算待測樣品中苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基甲基苯丙胺、嗎啡、6－單乙酰嗎啡及氯胺酮濃度：XcV （4）m式中：X——毛發(fā)中目標(biāo)物的濃度，單位為納克每毫克（ng/mg）；c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出的毛發(fā)中目標(biāo)物的濃度，單位為納克每微升（ng/μL）；V——試樣的定容體積，單位為微升（μL）m——試樣質(zhì)量，單位為毫克（mg）。根據(jù)毛發(fā)樣品及添加樣品中目標(biāo)物定量離子對峰面積，按式（3）計算出其中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度。AcX（5）A0式中：X——毛發(fā)中目標(biāo)物的含量，單位為納克每毫克（ng/mg）；A——待測毛發(fā)中目標(biāo)物的峰面積；A0——添加毛發(fā)樣品中目標(biāo)物峰面積；c——添加毛發(fā)樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫克（ng/mg）定性3,4-3,4-定量在平行試驗中兩份檢材測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%，結(jié)果按兩份檢材濃度的平均值計算。當(dāng)毛發(fā)取樣量為20mg時，苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基苯丙胺、3,4-亞甲二氧基甲基苯丙胺、嗎啡、6－單乙酰嗎啡和氯胺酮的方法檢出限為0.04ng/mg，定量限為0.1ng/mg。本方法添加濃度為0.1ng/mg～5ng/mg時，回收率為70%～110%。附 錄 A（）A.1。圖A.1 頭發(fā)取方法注：在毛發(fā)樣品袋上一定要標(biāo)注發(fā)根位置。取樣量：貼到頭皮取樣，若頭發(fā)長度4.5－5.5cm，5的毛發(fā)數(shù)量大約為15-20根，20的數(shù)量大約在60－65根。毛發(fā)質(zhì)量可根據(jù)此規(guī)律累加。當(dāng)無頭發(fā)可采或個體頭發(fā)極短，可采取人體其他部位的毛發(fā)，如腋毛、陰毛等，作為頭發(fā)