一級病原微生物實驗室危害評估報告

PAGE18 一級病原微生物實驗室危害評估報告第1版生效日期：目錄TOC\o"1-1"\h\u13846第一章檢驗科實驗活動生物危害評估報告 328693第二章人類免疫缺陷病毒HIV的生物危害評估報告 926558第三章梅毒螺旋體的生物危害評估報告 1214853第四章肝炎病毒的生物危害評估報告 14第一章檢驗科實驗活動生物危害評估報告為保證實驗室工作人員在工作中不被危害性生物及物品所侵害，保證危害性物品不外泄，對實驗室工作環(huán)境進(jìn)行評估，以鑒定生物安全防護等級，保證生物安全。一、危害程度分類及生物安全防護水平評估本檢驗科是為醫(yī)院診斷、預(yù)防、治療人體疾病或評估人體健康提供信息為目的，對來自人體的材料進(jìn)行臨床生物化學(xué)、臨床微生物、臨床免疫學(xué)、臨床血液、細(xì)胞遺傳學(xué)等檢驗的實驗室。生物源危害主要是由各種檢驗標(biāo)本中的微生物，尤其是病原微生物引起的，包括細(xì)菌、病毒、寄生蟲等，具有潛在危險性，可能引起實驗室感染；檢驗科微生物室還進(jìn)行一定數(shù)量的各種條件致病性細(xì)菌及真菌的分離培養(yǎng)工作，工作過程存在病原微生物對實驗人員、環(huán)境污染的風(fēng)險；除之以外實驗室還存在觸電、火災(zāi)、化學(xué)品腐蝕、偷盜等危險。根據(jù)《實驗室生物安全通用要求》，本檢驗科不涉及《人間傳染的病原微生物名錄》中高致病性微生物的分離培養(yǎng)及高致病性微生物的菌、毒種的保藏，實驗室采用一定防護措施就能控制感染或防范災(zāi)害，或者對相應(yīng)病原體存在有效的免疫方法。評估我檢驗科生物安全防護水平按一級實驗室（BSL-1）生物安全要求。二、實驗人員和實驗室安全防護的一般要求1.吸煙危害評估及防護（1）實驗室工作區(qū)內(nèi)絕對禁止吸煙；（2）點燃的香煙是易燃液體的潛在火種；（3）香煙、雪茄或煙斗都是傳染細(xì)菌和接觸毒物的途徑。2.實驗區(qū)內(nèi)食用食物、飲料及其它危害評估及防護（1）實驗工作區(qū)內(nèi)不得有食物、飲料及存在“手－口”接觸可能的其它物質(zhì)（2）實驗室工作區(qū)內(nèi)的冰箱禁止存放食物。專用存放食物的冰箱應(yīng)放置在允許進(jìn)食、喝水的休息區(qū)內(nèi)。3.使用化妝品危害評估及防護實驗工作區(qū)內(nèi)禁止使用化妝品進(jìn)行化妝，但允許并建議經(jīng)常洗手的實驗人員使用護手霜。4.實驗中眼睛和面部的風(fēng)險評估及防護（1）處理腐蝕性或毒性物質(zhì)時，須使用安全鏡、面罩或其它保護眼睛和面部的防護用品。（2）工作人員在實驗室的危險區(qū)內(nèi)不要佩戴隱形眼鏡，除非同時使用護目鏡或面罩。（3）使用、處理能夠通過粘膜和皮膚感染的試劑，或有可能發(fā)生試劑濺溢的情況時，必須佩帶護目鏡、面罩或面具式呼吸器。5.實驗中服裝和個人防護裝備的一般要求（1）應(yīng)穿著符合實驗室工作需要的服裝，工作服應(yīng)干凈、整潔。當(dāng)工作中有危險物噴濺到身上的可能時，應(yīng)使用一次性塑料圍裙或防滲外罩。有時還需要佩戴其它防護裝備如：手套、護目鏡、披肩或面罩等。（2）采血員和其他需要接觸病員的工作人員，在接觸病員時需穿實驗服或工作服。（3）個人防護服裝應(yīng)定期更換以保持清潔，遇被危險物品嚴(yán)重污染，則應(yīng)立即更換（4）不得在實驗室內(nèi)設(shè)值班床，嚴(yán)禁在實驗室內(nèi)住宿。6.實驗中足部防護的一般要求在工作區(qū)內(nèi)，應(yīng)穿舒適、防滑、并能保護整個腳面的鞋。在有可能發(fā)生液體濺溢的工作崗位，可加套一次性防滲漏鞋套。帆布鞋可吸收化學(xué)物品和有傳染性的液體，所以最好穿皮革或其它防滲漏的合成材料的鞋。7.實驗中頭發(fā)和飾物的風(fēng)險評估及防護留長發(fā)的工作人員應(yīng)將頭發(fā)盤在腦后，以防止頭發(fā)接觸到被污染物和避免人體脫屑落入工作區(qū)。頭發(fā)不得垂肩，應(yīng)與離心機、切片機等正在運轉(zhuǎn)的器械保持一定距離8.實驗中胡須的風(fēng)險評估及防護蓄有胡須的男性工作人員必須遵守上項（7）的規(guī)定。9.洗手的要求實驗室工作人員在脫下手套后、離開實驗室前、接觸患者前后、以及在進(jìn)食或吸煙前都應(yīng)該洗手。接觸血液、體液或其它污染物時，應(yīng)立即洗手。10.用口移液的危害評估及防護用口液移可導(dǎo)致多種病原體的實驗室感染。所有實驗室操作禁止用口液移，應(yīng)使用助吸器具。11.銳利物品的危害評估及防護謹(jǐn)慎處理針頭、解剖刀、和碎玻璃等銳利物品。使用后的針具不要折斷、彎曲、破損、重復(fù)使用或用手重裝在針管上。一次性注射器上的針頭用后不要取下。銳利物品應(yīng)立即放置在專用銳器盒內(nèi)，在完全裝滿之前或48小時之內(nèi)更換。12.隔離措施的要求接觸患者時，實驗室工作人員應(yīng)遵守醫(yī)院的隔離措施。13.工作環(huán)境的要求（1）“清潔”區(qū)和“非清潔”區(qū)根據(jù)實驗室的具體工作情況由主任選擇并確定“清潔”和“非清潔”工作區(qū)，在清潔區(qū)和非清潔區(qū)之間設(shè)“緩沖室”。被指定為“清潔”的區(qū)域，則應(yīng)努力保持清潔，如采取預(yù)防措施，防止電話、視頻顯示器終端、鍵盤、門柄及其它經(jīng)常被手或手上的手套觸摸的物品的污染，要求工作人員在觸摸設(shè)備（如計算機鍵盤及電話的保護罩等）前取下手套，制定儀器設(shè)備和工作面的常規(guī)消毒和清潔制度和對嚴(yán)重污染的緊急處理措施辦法。被指定為“非清潔”的區(qū)域，允許戴手套接觸所有物品（如電話、門柄、計算機終端和其它物品），所有這些物品的表面都認(rèn)為是不清潔的。未戴手套的人員如果使用該區(qū)域內(nèi)的電話、計算機終端或其它設(shè)備，應(yīng)該戴上手套，或在使用后立即徹底洗手。“清潔”和“非清潔”區(qū)都應(yīng)保持整潔。實驗臺至少應(yīng)每天清潔、消毒一次，如有必要可以多次清洗、消毒。在處理濺溢的樣品或嚴(yán)重污染的工作面時，應(yīng)戴上手套和其它個人防護裝備、使用相應(yīng)合適的清潔劑清除所有的濺溢物。（2）冰箱、冷凍柜、水浴和離心機應(yīng)該定期清洗和消毒（時間由實驗室主任來決定），在發(fā)生嚴(yán)重污染后應(yīng)立即進(jìn)行清洗和消毒。進(jìn)行清洗、消毒時要戴上手套，穿上工作服或其它合適的防護服。（3）外衣：外衣（實驗服、工作服、和圍裙）應(yīng)懸掛在遠(yuǎn)離散熱器、蒸汽管道、供暖裝置、以及有明火的地方，不要掛在壓縮氣瓶或滅火器上，也不要掛在門的玻璃隔板上，妨礙視線?！扒鍧崱钡暮汀胺乔鍧崱钡膫€人防護服要分開存放。（4）垃圾處理：每天至少清理垃圾一次。（5）裝飾：不得在電燈、燈座或儀器上進(jìn)行裝飾，更不要使用電子裝飾物、蠟燭、圣誕樹等有引起火災(zāi)危險的裝飾品。（6）為便于清潔消毒，實驗室內(nèi)不應(yīng)有織物裝飾的用具或椅子。（7）個人物品：實驗工作區(qū)不得存放個人物品，如錢包、外套、皮靴、咖啡杯、運動服、預(yù)包裝的食品和藥品等。（8）實驗室內(nèi)應(yīng)配備應(yīng)急設(shè)備，如應(yīng)急洗眼裝置，酒精等消毒用品。（9）實驗室應(yīng)安裝非手觸式洗手裝置。（10）實驗室內(nèi)應(yīng)安裝防蚊蠅裝置，應(yīng)定期投撒滅蟑螂、老鼠的藥物。（11）用后的廢棄物品：實驗工作區(qū)內(nèi)的用后廢棄物品存量不要太大。具危險性的液體如酸或堿性液體應(yīng)放在視平線以下。較大的廢棄物容器應(yīng)靠近地面存放。（12）出口通路：實驗室的出口和通道必須保持暢通無阻，不準(zhǔn)堆放物品、垃圾、裝置、或設(shè)備。安全門必須保持暢通，不得堵塞。注意：無論任何時間、何種原因都不得阻塞通往滅火器、火警箱、防火毯、安全淋浴或出口的道路。14.使用玻璃器具的危害評估及防護操作玻璃器具時應(yīng)遵循下述安全規(guī)則：（1）不使用破裂或有缺口的玻璃器具。（2）不要用猛力取下玻璃試管上的塞子，粘緊的試管可用刀切開分離。（3）接觸過傳染性物的玻璃器具，清洗之前，應(yīng)先行消毒。（4）破裂的玻璃器具和玻璃碎片應(yīng)丟棄在有專門標(biāo)記的、單獨的、不易刺破的容器里。（5）高熱操作玻璃器具時應(yīng)戴隔熱手套。（6）在不影響實驗質(zhì)量的前提下，應(yīng)盡量減少使用玻璃器具。15.使用離心機的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）極少經(jīng)血（蟲媒介）極少（1）氣溶膠：離心過程中應(yīng)控制氣溶膠的產(chǎn)生在最低水平。（2）操作：離心機只有在蓋好蓋板后，才能啟動。（3）傳染性物品：所有能夠產(chǎn)生氣溶膠進(jìn)行播散的生物制品或標(biāo)本，都應(yīng)使用密封的離心管，并在蓋緊的離心頭或轉(zhuǎn)頭中進(jìn)行。（4）為防止氣溶膠飛溢，應(yīng)在離心停止30分鐘后打開離心物。（5）清洗：按照消毒隔離制度要求清洗離心機。（6）平衡：離心時應(yīng)保持合適的平衡，以保證離心的順利進(jìn)行。16．采集血樣的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）極少呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲媒介）極少盜竊可能化學(xué)腐蝕極少放射無（1）每天早晨用500mg/L的”84”消毒液擦拭抽血臺面及其它物表，并開紫外燈消毒至少30分鐘，并做好記錄。（2）工人每天早晨更換消毒液，包括浸泡銳器、止血帶的消毒液和手消毒液。（3）工作人員必須穿工作服，戴好口罩、帽子、和手套。（4）使用合格的一次性用品。嚴(yán)禁使用包裝破損，超過有效期的一次性用品。（5）嚴(yán)格執(zhí)行無菌技術(shù)操作規(guī)程、靜脈采血必須一人一針一管一巾一帶。微量采血應(yīng)做到一人一針一管一片，對每位病人操作前洗手或手消毒。（6）無菌物品如棉球需每天更換，開啟后使用不得超過24小時。（7）工作人員需對銳器如采血針采取高度預(yù)防措施，用過的采血針需浸泡在含有消毒液的厚壁容器中。17.標(biāo)本(血清、血漿、全血、尿)上檢驗分析儀檢測過程的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）極少經(jīng)血（蟲媒介）極少盜竊可能化學(xué)腐蝕無放射無（1）為了避免液滴和氣溶膠和擴散，實驗室儀器加樣、加液，清洗等過程應(yīng)在封閉罩內(nèi)進(jìn)行的。（2）實驗中使后的比色盤，反應(yīng)杯等廢棄物應(yīng)當(dāng)收集在封閉的容器內(nèi)，集中處置。（3）在每一步完成后應(yīng)根據(jù)操作指南對對儀器進(jìn)行消毒。血液、體液污染物表時，應(yīng)立即消毒。（4）工作人員要戴手套進(jìn)行操作。18.標(biāo)本(血清、血漿、全血、尿、糞)手工檢測過程的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚可能粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）可能經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲媒介）極少盜竊可能化學(xué)腐蝕可能放射無（1）每天早晨做好實驗室的清潔消毒工作。（2）工作人員要戴口罩、手套進(jìn)行操作。（3）實驗中使用的竹簽用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（4）廢棄的標(biāo)本連同試管、蓋帽要用1000mg/L“84”消毒液浸泡，由工人統(tǒng)一清潔后進(jìn)行無害化處理。（5）實驗中使用的吸頭、一次性塑料杯用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（6）標(biāo)本污染物表時，應(yīng)立即消毒。（7）離心時，發(fā)生試管破裂或標(biāo)本濺出，由操作者負(fù)責(zé)用有效消毒劑對離心機內(nèi)部進(jìn)行及時消毒處置。19．微生物分離鑒定藥敏試驗及基因擴增試驗活動的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚可能粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）可能經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲媒介）可能盜竊可能化學(xué)腐蝕極少放射無（1）每天早晨開紫外燈消毒空氣至少30分鐘，同時做好各物表、儀器的清潔消毒工作。（2）實驗人員要戴手套、帽子進(jìn)行操作。當(dāng)估計會出現(xiàn)微生物和危險物濺出時要戴好眼罩或面罩。（3）操作中使用的接種環(huán)、鑷子等金屬物品要在酒精燈火焰上燒灼滅菌。（4）可能產(chǎn)生致病性微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作如涂片、接種時，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)操作，并使用個體防護設(shè)備。（5）實驗室內(nèi)的各種標(biāo)本、菌種、培養(yǎng)基和其它廢棄物在運出實驗室前必須滅活（高壓、浸泡），需運出實驗室滅活的物品必須放在專用的密閉容器中。（6）操作過程中發(fā)生菌種污染物表時，應(yīng)馬上采取措施進(jìn)行物表消毒。（7）當(dāng)發(fā)生致病性微生物氣溶膠污染時，應(yīng)馬上進(jìn)行人員疏散，通知負(fù)責(zé)人到現(xiàn)場進(jìn)行指導(dǎo)消毒。（8）對菌種的保存應(yīng)嚴(yán)格遵守菌種保存制度，嚴(yán)禁擅自保存各種國家法定傳染病菌株或毒株。（9）實驗人員離開實驗室前要去除手套，確認(rèn)無污染或污染已排除，后方可洗手離去。（10）微生物、PCR實驗室要設(shè)置紗窗、擋鼠板。三、特定實驗活動危害評估（見以下章節(jié)之各種病原體的危害評估）工作人員素質(zhì)本實驗室共有技術(shù)人員20名，其中申請進(jìn)入BSL-2實驗室20名。學(xué)士學(xué)位3名，3名曾經(jīng)從事微生物學(xué)實驗，3名曾經(jīng)從事無菌實驗室活動經(jīng)歷，5名技術(shù)人員學(xué)習(xí)過生物安全手冊并通過定期培訓(xùn)及考核成績合格，經(jīng)體檢無現(xiàn)患嚴(yán)重疾病，本實驗室除HBV攜帶者1名無其他患傳染性疾病的技術(shù)人員，健康狀態(tài)良好。五、評估結(jié)論本次評估本實驗室共19項可能潛在危險的實驗活動，在實驗操作實驗施過程中在無控制措施情況下可能產(chǎn)生的高危害度5項，中度14項，低度0項；對危害發(fā)生的可能性分析，實驗危害較大可能發(fā)生的有0項，可能發(fā)生5項，較少可能發(fā)生14項；這些危害造成高度嚴(yán)重后果的5項，后果嚴(yán)重性中度的14項，后果嚴(yán)重性低度的0項。根據(jù)擬采取的預(yù)防控制措施后依然存在的殘留風(fēng)險為高度0項，中度0項，低度危害19項。第二章人類免疫缺陷病毒HIV的生物危害評估報告人類免疫缺陷病毒（HIV）病毒特異性地侵犯CD4+T淋巴細(xì)胞，造成機體細(xì)胞免疫受損。臨床上初始表現(xiàn)為無癥狀病毒感染者，繼續(xù)發(fā)展為持續(xù)性全身淋巴結(jié)腫大綜合征和艾滋病綜合征，最后并發(fā)各種嚴(yán)重機會性感染和惡性腫瘤，成為AIDS，病死率極高。到目前為止，還沒有找到一種治愈該病的方法。病原學(xué)1．1HIV是單鏈RNA病毒，屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科，慢病毒屬，包括HIV-1型和HIV-2型，兩者均能引起AIDS。但多數(shù)AIDS乃由HIV-1型引起。HIV既有嗜淋巴細(xì)胞性又有嗜神經(jīng)性，主要感染CD4+T淋巴細(xì)胞，也能感染單核巨噬細(xì)胞，B細(xì)胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞等。1．2HIV的抵抗力：HIV對外界抵抗力較弱，對熱敏感，56℃30分鐘能滅活。25%以上濃度的酒精即能滅活病毒，70%的效果最好；0.2%次氯酸鈉、5%～8%甲醛及有機氯溶液等均能滅活病毒。但對0.1%甲醛溶液、紫外線和γ射線不敏感。在實驗室條件下，HIV在干燥環(huán)境中很快失去活性，在厚血塊中可存活十幾天，在干燥的玻璃上可維持幾天。美國CDC證明干燥環(huán)境中的HIV濃度在幾小時內(nèi)降低90%～99%。2．流行病學(xué)2．1傳染源：病人和無癥狀病毒攜帶者是主要的傳染源，前者的傳染性最強，后者在流行病學(xué)上意義更大。病毒主要存在于血液、精液、子宮和陰道分泌物中；乳汁、唾液、淚水等均能檢出病毒。2．2傳播途徑：世界公認(rèn)的傳播途徑有三種，即性傳播、血液傳播及母嬰傳播。2．3人群易感性：各個年齡均可感染，但同性戀和性亂交者，靜脈毒癮者，血友病患者，接受血、血制品或器官移植者，父母是HIV感染者的兒童，受感染的危險性比較大，屬高危人群，發(fā)病年齡主要為40歲以下的青狀年。3．臨床表現(xiàn)本病潛伏期較長，HIV-1侵入機體后2～10年左右可以發(fā)展為AIDS，HIV-2所需的時間更長。HIV感染人體后分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四期，HIV對CD4+T淋巴細(xì)胞有特殊的親嗜性，發(fā)病與HIV含量、毒力、變異及CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量、功能和機體免疫狀況有關(guān)。臨床上可表現(xiàn)為原因不明的免疫缺陷，往往以淋巴結(jié)腫大、厭食、慢性腹瀉、體重減輕、發(fā)熱、乏力等全身癥狀起病，逐漸發(fā)展至各種機會性感染、繼發(fā)性腫瘤、精神神經(jīng)障礙而死亡。4．實驗?zāi)Ｊ郊拔：σ蛩胤治?．1HIV抗體和抗原檢測：最常用的樣品是血液，包括血清、血漿和全血。HIV的主要傳播途徑就是血液傳播，在進(jìn)行采樣和檢測等過程中，都可能接觸到血液，因此對于未知樣品的檢測具有潛在危險性；而對于直接接觸HIV感染者或艾滋病病人血液和體液時，實驗危險性較高，更應(yīng)注意個人防護。4．2HIV核酸檢測：樣品有全血、血漿、組織和其他分泌物，有時還包括生物制品，此類標(biāo)本具有潛在危險性，對于HIV感染者或艾滋病病人的樣品，實驗危險性較高。4．3HIV病毒培養(yǎng)：培養(yǎng)物中含大量的HIV，對于實驗人員具有相當(dāng)高的傳染危險性。應(yīng)該在P3實驗室內(nèi)進(jìn)行操作，同時嚴(yán)格做好個人防護工作。5．安全保障措施5．1個人防護5．1．1高標(biāo)準(zhǔn)的個人保健對于減少感染的危險性很重要。皮膚受損、生病都會增加感染的危險性。皮膚的傷口和擦傷都應(yīng)以防水敷料覆蓋。5．1．2進(jìn)實驗室前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。5．1．3進(jìn)入實驗室應(yīng)穿隔離衣，戴手套。如果接觸物傳染危險性大，則應(yīng)戴雙層手套和防護眼鏡。5．1．4離開實驗室前必須脫去隔離衣并洗手。5．1．5嚴(yán)禁在艾滋病檢測實驗室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化妝。5．1．6減少實驗室內(nèi)利器的使用。5．2帶入和帶出實驗室的物品5．2．1對所有帶入實驗室的物品都應(yīng)進(jìn)行檢查。含有測試樣品的包裹應(yīng)在安全柜或其他適當(dāng)?shù)难b置內(nèi)打開。5．2．2將HIV測試樣品轉(zhuǎn)送其他實驗室時，應(yīng)防止對人員和環(huán)境的污染。護送樣品的人應(yīng)明確接收地點和接收人，實驗室負(fù)責(zé)人或其指定的人員應(yīng)及時確認(rèn)樣品已送達(dá)指定的實驗室，被轉(zhuǎn)入安全位置并得到妥善處理。5．2．3污染或可能造成污染的材料在帶出實驗室前應(yīng)進(jìn)行消毒。5．3消毒方法5．3．1廢棄物缸：10%（V/V）次氯酸鈉（含10，000ppm有效氯）。5．3．2生物安全柜工作臺面和儀器表面：70%乙醇。5．3．3溢出物：10%次氯酸鈉（V/V）。5．3．4污染的臺面和器具：40%甲醛水溶液，也可以用過氧化氫或過氧乙酸第三章梅毒螺旋體的生物危害評估報告梅毒螺旋體學(xué)名為蒼白密螺旋體(Treponemapallidum)是梅毒病的病原體。梅毒螺旋體(Tre-ponemapalidum)1905年由法國科學(xué)家Schaudinn與Hoffmanu發(fā)現(xiàn)并報告的。梅毒螺旋體（如圖）是小而纖細(xì)的螺旋狀微生物，長度為5-20nm，平均約8-10um，直徑小于0.2nm，有6—12個螺旋；肉眼看不到，在光鏡暗視野下，人們僅能看到梅毒螺旋體的折光性，其活動較強。在其前端有4-6根鞭毛樣細(xì)纖維束，其末端呈卷曲狀。在未受外界因素的影響時，螺旋是規(guī)則的。因其透明不易著色，又稱之為蒼白螺旋體。梅毒螺旋體是厭氧菌，在體內(nèi)可長期生存繁殖，只要條件適宜，便以橫斷裂方式一分為二的進(jìn)行繁殖。梅毒螺旋體對外界的抵抗力很弱，對化學(xué)藥品也很敏感，在體外不易生存，煮沸、干燥、肥皂水和一般的消毒劑(如升汞、石碳酸、來蘇水、酒精、1∶1000的高錳酸鉀液等)很容易將它殺死，陽光照射和干燥環(huán)境都能很快使它死亡。梅毒螺旋體在人體外生存一般超不過1～2個小時。在缺氧的環(huán)境下它能生存數(shù)天，在潮濕的衣服上也能存活數(shù)小時，在血庫中一般能存活24小時。梅毒螺旋體不耐高溫，40℃～60℃時2～3分鐘就能死亡，100℃時則即刻死亡?？梢葬槍ζ淙觞c將梅毒螺旋體消滅。如將衣物放于陽光下曝曬，放在干燥的環(huán)境中儲存；將用具煮沸消毒或用化學(xué)用品消毒，都能殺滅梅毒螺旋體，阻止它的傳播。梅毒由梅毒螺旋體（蒼白螺旋體）引起，患病后病程漫長，早期侵犯生殖器和皮膚，晚期侵犯全身各器官，并生多種多樣的癥狀和體征，病變幾乎能累及全身各個臟器。梅毒通過性行為可以在人群中相互傳播，并可以由母親傳染給胎兒，危及下一代。極少數(shù)患者通過接吻、哺乳、接有傳染性損害病人的日常用品而傳染。在性傳播疾病中，梅毒的患病人數(shù)是低的，但由于其病程長，危害性大，應(yīng)予重視。微生物學(xué)檢查（一）檢查螺旋體采取初期及二期梅毒硬性下疳、梅毒疹的滲出物等，用暗視野或墨汁顯影，如查見有運動活潑的密螺旋體即可診斷。（二）血清學(xué)檢查1．非螺旋體抗原試驗：是用正常牛心肌的心類脂（Cardiolipin）作為抗原，檢測病人血清中的反應(yīng)素。國際上常用性病研究實驗室（UDRL）的玻片試驗法；該法是一種簡單的玻片沉淀試驗，試劑及對照已標(biāo)準(zhǔn)化。另外，還可用不加熱血清反應(yīng)素試驗（USR），其抗原是UDRL抗原的改良，敏感性和特異性與UDRL相似。反應(yīng)素在第一期梅毒病變出現(xiàn)后1～2周就可測出，第二期陽性率幾乎達(dá)100，第三期陽性率較低。本試驗所用抗原是非特異的，檢測的抗體時應(yīng)排除假陽性反應(yīng)，結(jié)合病史，臨床表現(xiàn)及多次的試驗結(jié)果進(jìn)行分析。2．螺旋體抗原試驗：抗原為梅毒旋體，以檢測血清中的特異性抗體，該試驗特異性高，目前常用下述兩種方法。（1）熒光密螺旋體抗體吸收試驗（FTA～ABS）：為間接熒光抗體法，其敏感性及特異性均高，常用于梅毒的早期診斷。（2）梅毒螺旋體制運試驗（TPI）：用來檢測血清中是否存在抑制螺旋體活動的特異性抗體。用活梅毒螺旋體（Nichol株）加病人新鮮血清，35℃培養(yǎng)16小時，同法作正常血清對照，然后用暗視野顯微鏡觀察活動的螺旋體數(shù)目，如試驗標(biāo)本活動的螺旋體數(shù)目小于或等于對照血清標(biāo)本內(nèi)的40%，即為陽性。安全保障措施1、個人防護⑴高標(biāo)準(zhǔn)的個人保健對于減少感染的危險性很重要。皮膚受損、串病都會增加感染的危險性。皮膚的傷口和擦傷都應(yīng)以防水敷料覆蓋。=2\*GB2⑵進(jìn)實驗室前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。⑶進(jìn)入實驗室應(yīng)穿隔離衣，戴手套。如果接觸物傳染危險性大，則應(yīng)戴雙層手套和防護眼鏡。⑷離開實驗室前必須脫去隔離衣并洗手。⑸嚴(yán)禁在實驗室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化妝。⑹減少實驗室內(nèi)利器的使用。⑺離心：離心管套底墊要完好，使用匹配的管、套、離心頭，加蓋，離心時要戴好防護眼鏡。2、帶入和帶出實驗室的物品⑴對所有帶入實驗室的物品都應(yīng)進(jìn)行檢查。含有測試樣品的包裹應(yīng)在安全柜或其他適當(dāng)?shù)难b置內(nèi)打開。⑵污染或可能造成污染的材料在帶出實驗室前應(yīng)進(jìn)行消毒。消毒方法⑴廢棄物缸：10%（V/V）次氯酸鈉（含10，000ppm有效氯）。⑵生物安全柜工作臺面和儀器表面：70%乙醇。⑶溢出物：10%次氯酸鈉（V/V）。⑷污染的臺面和器具：40%甲醛水溶液，也可以用過氧化氫或過氧乙酸。第四章肝炎病毒的生物危害評估報告肝炎病毒是引起病毒性肝炎的病原體。人類肝炎病毒有甲型、乙型、非甲非乙型和丁型病毒之分。甲型肝炎病毒呈球形，無包膜，核酸為單鏈RNA。乙型肝炎病毒呈球形，具有雙層外殼結(jié)構(gòu)，外層相當(dāng)一般病毒的包膜，核酸為雙鏈DNA。對非甲非乙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒目前正在研究之中。甲型肝炎病毒引起甲型肝炎，這種肝炎的傳染源主要是病人。其病毒通常由病人糞便排出體外，通過被污染的手、水、食物、食具等傳染，嚴(yán)重時會引起甲型肝炎流行。如1988年1月，上海市出現(xiàn)了較大規(guī)模的流行性甲型肝炎，主要原因是人們食用了被甲肝病毒污染的毛蚶。乙型肝炎主要通過注射、輸血等方式進(jìn)行傳播。為防止甲型肝炎的發(fā)生和流行，應(yīng)重視保護水源，管理好糞便，加強飲食衛(wèi)生管理，講究個人衛(wèi)生，病人排泄物、食具、床單衣物等應(yīng)認(rèn)真消毒。為防止乙型肝炎的傳播，在輸血時應(yīng)嚴(yán)格篩除乙型肝炎抗原陽性獻(xiàn)血者，血液和血液制品應(yīng)防止乙型肝炎抗原的污染，注射品及針頭在使用之前應(yīng)嚴(yán)格消毒。一、肝炎病毒的分類：（一）甲型肝炎病毒（HAV）是一種RNA病毒，屬微小核糖核酸病毒科，是直徑約27nm的球形顆粒，由32個殼微粒組成對稱20面體核衣殼，內(nèi)含線型單股RNA。HAV具有4個主要多肽，即VP1、VP2、VP3、VP4、其中VP1與VP3為構(gòu)成病毒殼蛋白的主要抗原多肽，誘生中和抗體。HAV在體外抵抗力較強，在-20℃條件下保存數(shù)年，其傳染性不變，能耐受56℃30分鐘的溫度及PH3的酸度。（二）乙型肝炎病毒（HBV）是一種DNA病毒，屬嗜肝DNA病毒科（hepadnavividae），是直徑42nm的球形顆粒。又名Dane顆粒，有外殼和核心兩部分。外殼厚7-8nm，有表面抗原（HBsAg），核心直徑27nm，含有部分雙鏈，部分單鏈的環(huán)狀DNA，DNA聚合酶，核心抗原及e抗原。HBVDNA的基因組約含3200個鹼基對。長鏈的長度固定，有一缺口（nick）此處為DAN聚合酶；短鏈的長度不定。當(dāng)HVB復(fù)制時，內(nèi)源性DNA聚合酶修補短鏈，使之成為完整的雙鏈結(jié)構(gòu)，然后進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。HBVDNA的長鏈有4個開放性讀框（ORF），即S區(qū)、C區(qū)、P區(qū)和X區(qū)。S區(qū)包括前S1前S2和S區(qū)基因，編碼前S1、前S2和S三種外殼蛋白；C區(qū)以包括前C區(qū)，C區(qū)基因編碼HBcAg蛋白，前C區(qū)編碼一個信號肽，在組裝和分泌病毒顆粒以及在HBeAg的分泌中起重要作用；P基因編碼DNA聚合酶；X基因的產(chǎn)物是X蛋白，其功能尚不清楚。HBVDNA的短鏈不含開放讀框，因此不能編碼蛋白。乙型肝炎患者血清在顯微鏡的觀察下可查見3種顆粒：①直徑22nm的小球形顆粒；②管狀顆粒，長約100～700nm，寬約22nm;③直徑為42nm的大球形顆粒。小球形顆粒。小球形顆粒及管狀顆粒均為過剩的病毒外殼，含表面抗原，大球形顆粒即病毒顆粒，有實心與空心兩種，空心顆粒缺乏核酸。HBV在體外抵抗力很強，紫外線照射，加熱60℃4小時及一般濃度的化學(xué)消毒劑(如苯酚，硫柳汞等)均不能使之滅活，在干燥或冰凍環(huán)境下能生存數(shù)月到數(shù)年，加熱60℃持續(xù)10小時，煮沸(100℃)20分鐘，高壓蒸汽122℃10分鐘或過氧乙酸(0．5%)7.5分鐘以上則可以滅活。黑猩猩及恒河猴是對HBV易感的實驗動物。HBV的組織培養(yǎng)尚未成功。HBV的抗原復(fù)雜，其外殼中有表面抗原，核心成分中有核心抗原和e抗原，感染后可引起機體的免疫反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。1．乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和表面抗體(抗—HBs)HBsAg存在于病毒顆粒的外殼以及小球形顆粒和管狀顆粒。于感染后2-12周，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)升高前，即可由血內(nèi)測到，一般持續(xù)4～12周，至恢復(fù)期消失，但感染持續(xù)者可長期存在。HBsAg無感染性而有抗原性，能刺激機體產(chǎn)生抗-HBs。在HBsAg自血中消失后不久或數(shù)星期或數(shù)月，可自血中測到抗—HBs，抗HBs出現(xiàn)后其滴度逐漸上升，并可持續(xù)存在多年?？?HBs對同型感染具有保護作用。近期感染者所產(chǎn)生的抗-HBs屬IgM，而長期存在血中的為抗-HBsIgG。HBsAg有“a”、“b”、“y”、“r”、“w”等多種抗原決定簇，其中“a”是共同的抗原決定簇，“d”、“y”和“r”、“w”為主要的亞型決定簇。HBsAg有8種亞型和2種混合亞型，以adr，adw，ayr，及ayw為主的4種亞型。各亞型的地理分布不同，adr亞型主要分布在亞洲及太平洋地區(qū)，adw亞型主要見于北歐，美洲及澳洲，ayw亞型主要在非洲，中東和印度，ayr亞型罕見。在我國的主要是adr亞型，但廣西的東北部則主要為adw亞型，西藏，新疆及內(nèi)蒙則有ayw亞型為主。亞型的測定對流行病學(xué)調(diào)查，預(yù)防研究有一定意義。乙型肝炎前S抗原及前S抗體前S1及前S2蛋白具有與HBsAg不同的抗原性。完整的HBV顆粒含有S蛋白及前S2蛋白，而缺陷病毒顆粒則無前S2蛋白。血清中出現(xiàn)前S1、前S2抗原是HBV活動性復(fù)制的標(biāo)志。前S2蛋白具有較S蛋白更強的免疫原性，含有前S2蛋白的HBsAg誘生的抗-HBs，其滴度明顯高于不含前S2蛋白的HBsAg所誘生者。前S2蛋白具有聚合人血清蛋白白受體（PHSAR）的功能，能使HBV與聚合人血清蛋白結(jié)合，以致免疫系統(tǒng)不易識別，且可通過肝細(xì)胞膜上的PHSA-R而吸附于肝細(xì)胞膜上，從而侵入肝細(xì)胞。2．乙型肝炎核心抗原（HBcAg）和核心抗體（抗-HBc）HBcAg主要存在于受染的肝細(xì)胞核內(nèi)，復(fù)制后被釋至胞漿中，由胞漿中形成的HBsAg包裹，裝配成完整的病毒顆粒后釋放入血。血液中一般不能查到游離的HBcAg。血中的Dane顆粒經(jīng)去垢劑處理后可以查到其核心部分的HBcAg和DNA聚合酶?？?HBc，在HBsAg出現(xiàn)后2-5周，臨床癥狀未出現(xiàn)肖，即可由血內(nèi)測到。早期出現(xiàn)者主要是抗-HBcIgM，以19S五聚體IgM抗-HBc為主，其滴度迅速上升并保持高滴度，至HBsAg消失后，抗-HBcIgM滴度即迅速降低?？?HBcIgM一般在血內(nèi)維持6-8個月，是近期感染的重要標(biāo)志；但在慢性活動型肝炎患者血中亦可測到，主要是7-8S單體IgM抗-HBc。抗-HBcIgG出現(xiàn)較遲，但可長期存在?？?HBc對HBV感染無保護作用。血清中抗-HBcIgM陽性表明體內(nèi)有HBV復(fù)制，且有肝細(xì)胞損害；若抗-HbcIgG陽性且滴度高，伴以抗-HBs陽性，則為乙型肝炎恢復(fù)期；若抗-HBcIgG呈低滴度，抗-HBcIgM陰性，而抗-HBs陽性，則是既往感染的標(biāo)志。HBVDNA聚合酶存在于Dane顆粒核心內(nèi)，是一種依賴于DNA的DNA聚合酶，其功能與修補及延伸雙鏈DNA的短鏈有關(guān)?；颊哐逯蠬BVDNA聚合酶活性增高常伴有HBV增殖。在急性乙肝的潛伏期內(nèi)，血清ALT升高之前，血清DNA聚合酶活力即已升高，因此，DNA聚合酶活力測定具有早期診斷意義。急性肝炎患者在發(fā)病1個月后若HBVDNA聚合酶活力仍持續(xù)升高，是肝炎轉(zhuǎn)為慢性的征兆。3．乙型肝炎e抗原（HBeAg）和e抗體-（HBe）HBeAg是以隱蔽形式存在HBV核心中的一種可溶性蛋白，其編碼基因相互重疊，是HBcAg的亞成分。在感染HBV后，HBeAg可與HBsAg同時或稍后出現(xiàn)于血中，其消失則稍早于HBsAg。HBsAg僅存在于HBsAg陽性者的血液中，通常伴有肝內(nèi)HBVDNA的復(fù)制，血中存在較多Dane顆粒和HBVDNA聚合酶活性增高，因此，HBeAg陽性是病毒活動性復(fù)制的重要指標(biāo)，傳染性高。急性肝炎患者若HBeAg持續(xù)陽性10周以上，則易于轉(zhuǎn)為持續(xù)感染?？?Hbe在HBeAg消失后很短時間內(nèi)即在血中出現(xiàn)，其出現(xiàn)表示病毒復(fù)制已減少，傳染降低。但抗-Hbe陽性者的血清中仍可查到少數(shù)Dane顆粒，且在患者肝細(xì)胞核內(nèi)可