微生物實(shí)驗(yàn)(6)課件

腸道桿菌的鑒定河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院婁強(qiáng)qiang_lou@126.com目的要求掌握腸道桿菌的主要生物學(xué)性狀熟悉腸道桿菌有關(guān)的鑒定方法標(biāo)本膿血便、肛拭子選擇/鑒別培基生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定克氏雙糖鐵培養(yǎng)基,動(dòng)力-靛基質(zhì)-尿素半固體瓊脂培養(yǎng)基玻片凝集試驗(yàn)SS平板,中國蘭,EMB平板SS瓊脂平板（1）營養(yǎng)物質(zhì)：牛肉膏、蛋白胨（2）抑制劑：膽鹽、枸椽酸鹽、煌綠等，抑制非致病菌的生長；但膽鹽能同時(shí)促進(jìn)病原菌的生長。（3）鑒別用糖：乳糖（4）指示劑：中性紅SS瓊脂培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)原理此培養(yǎng)基是強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基，檸檬酸鈉和煌綠對大腸桿菌的生長，對菌體蛋白質(zhì)的合成起強(qiáng)的抑制作用，而對腸道致病菌則無抑制作用。檸檬酸鈉能緩和膽酸鹽對腸道致病菌的有害作用，并能中和煌綠和中性紅等染料的毒性。中性紅為指示劑，酸性時(shí)呈現(xiàn)紅色，堿性時(shí)呈淡黃色。

大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸，通過中性紅顯色，菌落大而混濁，呈現(xiàn)紅色．志賀氏菌屬和沙門氏菌屬的細(xì)菌不分解乳糖，而分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生堿性物質(zhì)，菌落形態(tài)為光滑微黃透明，園形、中等大小，邊緣整齊的菌落。由于宋內(nèi)氏痢疾桿菌有分解膽鹽中的某些物質(zhì)和發(fā)酵乳糖(產(chǎn)酸)較慢等特點(diǎn)，而使菌落呈淡紅或紅色、較大或邊緣不整齊的扁平菌落。某些沙門氏菌屬及變形桿菌因產(chǎn)生硫化氫，使菌落呈現(xiàn)黑色中心。伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基(EMB)選擇培養(yǎng)原理此培養(yǎng)基為弱選擇性培養(yǎng)基。以伊紅美蘭作指示劑．（１）大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時(shí)染上伊紅，因?yàn)橐良t和美蘭結(jié)合所以菌落不是紅色而呈現(xiàn)紫黑色，且有金屬光澤(大腸桿菌)或棕色(產(chǎn)氣桿菌)，扁平混濁、邊緣色淡的菌落。（２）致病菌的菌落為無色半透明、園形，中等大小，邊緣整齊的菌落，在靠近大腸桿菌的可疑菌落往往呈現(xiàn)淡蘭色。[方法]1、分離培養(yǎng)、觀察菌落特征：分別取大腸、痢疾桿菌培養(yǎng)物，用分離劃線方法接種SS平板或EMB培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18-24h以后觀察結(jié)果（記錄）。2、革蘭染色、觀察形態(tài)學(xué)特征：取各菌培養(yǎng)物少許涂片，革蘭染色、鏡檢（畫圖）。(2)EMB平板大腸桿菌致病菌（二）腸道桿菌生化反應(yīng)及動(dòng)力試驗(yàn)[材料]1、菌種：大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、培養(yǎng)物2、培養(yǎng)基：克氏雙糖斜面培養(yǎng)基、生化反應(yīng)管、半固體培養(yǎng)基3、其他：接種環(huán)、接種針、酒精燈等。[方法]1、克氏雙糖鐵斜面培養(yǎng)基：分別取大腸桿菌、變形桿菌的培養(yǎng)物，用穿刺加斜面劃線接種方法接種于2支克氏雙糖斜面培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18-24h以后觀察結(jié)果。2、生化反應(yīng)管：取葡萄糖、乳糖等反應(yīng)管，每種反應(yīng)管分別穿刺接種大腸桿菌、痢疾桿菌，37℃培養(yǎng)18-24h以后觀察結(jié)果。3、動(dòng)力試驗(yàn)：分別取大腸桿菌、痢疾桿菌的培養(yǎng)物，用穿刺接種方法接種于2支半固體培養(yǎng)培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18-24h以后觀察結(jié)果。結(jié)果觀察大腸桿菌傷寒桿菌痢疾桿菌變形桿菌克氏雙糖鐵葡萄糖乳糖硫化氫動(dòng)力尿素生化反應(yīng)管葡萄糖乳糖黃色--++++-+-+--+--+++-+黃色黃色黃色紅色黃色紅色黃色肥達(dá)氏反應(yīng)原理用已知傷寒桿菌O/H抗原（TO/TH）和甲乙型副傷寒桿菌H抗原（PA/PB）與患者血清做定量凝集實(shí)驗(yàn)，以測定患者血清中有無相應(yīng)抗體，根據(jù)抗體含量多少及增長情況可輔助診斷傷寒及副傷寒。2.材料待檢患者血清，TO/TH/PA/PB菌液，生理鹽水，試管，1ml吸管等。3.方法12345671.倍比稀釋血清0.5mlNS+0.5ml血清2.加四種菌液（順序：從后往前）3.37℃18-24h觀察結(jié)果TOTHPAPB棄去效價(jià)判斷：以出現(xiàn)++的血清最高稀釋度為抗體效價(jià)。肥達(dá)氏反應(yīng)診斷意義:O效價(jià)H效價(jià)診斷意義升高升高感染可能性大不高不高感染可能性小不高