微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)一微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)普通光學(xué)顯微鏡的使用培養(yǎng)基的制備消毒與滅菌細(xì)菌三型的觀察實(shí)驗(yàn)一微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)普通光學(xué)顯微鏡的使用2普通光學(xué)顯微鏡的使用目的要求1.學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理及使用方法2.復(fù)習(xí)普通臺(tái)式顯微鏡的結(jié)構(gòu)、各部分的結(jié)構(gòu)、使用方法普通光學(xué)顯微鏡的使用目的要求3基本原理（油鏡的原理）1.增加照明亮度在油鏡與載玻片間加折射率與玻璃相近的介質(zhì)（如：香柏油）減少光線的折射與反射損失2.增加顯微鏡的分辨率基本原理（油鏡的原理）4油鏡的使用方法1.準(zhǔn)備工作（復(fù)習(xí)）顯微鏡的放置光源的調(diào)節(jié)目鏡的調(diào)節(jié)聚光器的調(diào)節(jié)油鏡的使用方法1.準(zhǔn)備工作（復(fù)習(xí)）5油鏡的使用方法2.顯微觀察低倍鏡觀察高倍鏡觀察油鏡觀察在觀察目標(biāo)區(qū)域滴加香柏油，仔細(xì)微調(diào)，認(rèn)真觀察尋找觀察目標(biāo)油鏡的使用方法2.顯微觀察尋找觀察目標(biāo)6油鏡的使用方法3.顯微鏡使用完畢的處理上升鏡筒，取下載玻片用擦鏡紙檫去油用擦鏡紙蘸無(wú)水乙醚乙醇用干凈擦鏡紙擦拭物鏡與目鏡還原各部分注意：切勿用手、其他紙擦拭鏡頭油鏡的使用方法3.顯微鏡使用完畢的處理7實(shí)驗(yàn)觀察內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容：觀察金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的染色標(biāo)本試驗(yàn)報(bào)告：繪出金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌在油鏡下的形態(tài)。實(shí)驗(yàn)觀察內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容：觀察金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌8微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件9微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件10微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件11鏈球菌鏈球菌12桿菌桿菌13培養(yǎng)基的制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備目的要求1.明確培養(yǎng)基的制備原理2.掌握配置培養(yǎng)基的一般方法與步驟培養(yǎng)基的制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備14培養(yǎng)基的制備原理牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是應(yīng)用最廣泛的、最普通的細(xì)菌培養(yǎng)基,也稱普通培養(yǎng)基培養(yǎng)基的制備原理牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是應(yīng)用最廣泛的、最普通的細(xì)15組成牛肉膏：碳源、能源、磷酸鹽、維生素蛋白胨：氮源、維生素NaCl:無(wú)機(jī)鹽水瓊脂：塑型組成16培養(yǎng)基的制備方法1.稱量(牛肉膏,蛋白胨,NaCl)2.溶化3.調(diào)pH4.過(guò)濾5.分裝6.加塞7.包扎8.滅菌9.擱置斜面培養(yǎng)基的制備方法1.稱量(牛肉膏,蛋白胨,NaCl)6.加塞17注意事項(xiàng)1.蛋白胨易吸水，稱取要迅速2.瓊脂溶化過(guò)程中注意溫度，勿使過(guò)熱溢出注意事項(xiàng)1.蛋白胨易吸水，稱取要迅速18消毒與滅菌消毒與滅菌的概念消毒：一般是指消滅病原菌與有害微生物的營(yíng)養(yǎng)體滅菌：指殺滅一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體、芽孢、孢子消毒與滅菌的主要方法加熱法過(guò)濾法照射法化學(xué)藥品消毒與滅菌消毒與滅菌的概念19加熱法干熱滅菌火焰灼燒滅菌：接種環(huán)、接種針、金屬用具、無(wú)菌操作時(shí)在火焰上短暫灼燒瓶口等熱空氣滅菌：玻璃器皿加熱法干熱滅菌20加熱法－－濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌鍋15-30min培養(yǎng)基、工作服、橡皮物品、玻璃器皿等加熱法－－濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌21常壓蒸汽滅菌某些不適宜高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基不具備高壓蒸汽滅菌條件的僅能殺死大多數(shù)微生物、可用常壓間歇滅菌法常壓蒸汽滅菌22加熱法－－濕熱滅菌煮沸消毒法注射器、解剖器械等10-15min可殺死細(xì)菌所有營(yíng)養(yǎng)體、部分芽孢超高溫殺菌135-150℃、2-8s牛奶及其他液態(tài)食品殺死微生物、保存營(yíng)養(yǎng)加熱法－－濕熱滅菌煮沸消毒法23其他方法過(guò)濾除菌血清、抗生素、糖溶液等不適宜加熱消毒滅菌輻射滅菌紫外線照射化學(xué)藥品滅菌重金屬離子、抗生素、來(lái)蘇爾、７５％的乙醇。其他方法過(guò)濾除菌24干熱滅菌目的要求：１.了解干熱滅菌的原理和應(yīng)用范圍２.學(xué)習(xí)干熱滅菌的操作技術(shù)基本原理：干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固與其本身的含水量有關(guān)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之，含水量越小，凝固緩慢。因此與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高（１６０～１７０℃），時(shí)間長(zhǎng)。干熱滅菌目的要求：25干熱滅菌器材：培養(yǎng)皿，試管，吸管，電烘箱等操作步驟：裝入待滅菌的物品：避免物品太擠妨礙空氣流通升溫恒溫降溫開(kāi)箱取物：溫度未降至70℃前勿開(kāi)箱，防爆干熱滅菌器材：26高壓蒸汽滅菌一、目的要求：１.了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍。２.學(xué)習(xí)高壓蒸汽滅菌的基本方法。二、基本原理高壓使水的沸點(diǎn)增高，產(chǎn)生超過(guò)100℃的高溫蒸汽，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性水蒸氣的穿透性強(qiáng)濕熱的蒸汽有潛熱高壓蒸汽滅菌一、目的要求：27高壓蒸汽滅菌器材：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、高壓蒸汽滅菌鍋操作步驟取出內(nèi)層鍋，向外層鍋內(nèi)加適量的水放置內(nèi)層鍋及待滅菌物加蓋，并將蓋上排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽加熱同時(shí)打開(kāi)排氣閥滅菌所需時(shí)間到后關(guān)閉電源，降溫取出滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，檢查無(wú)菌生長(zhǎng)則可用試驗(yàn)報(bào)告檢查滅菌是否徹底高壓蒸汽滅菌器材：28紫外線滅菌一、目的要求：了解紫外線滅菌的基本原理及方法二、基本原理紫外線可誘導(dǎo)胸腺嘧啶二聚體的形成、DNA鏈的交聯(lián)，抑制DNA的復(fù)制幅射使空氣中的氧電離產(chǎn)生[o],使o2生成臭氧（O3）或使H2O生成H2O2,利用O3H2O2的氧化殺菌作用紫外線滅菌一、目的要求：29紫外線滅菌器材：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、溶液或試劑、紫外線燈操作步驟紫外線燈直接照射30min、檢查培養(yǎng)基37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，無(wú)菌生長(zhǎng)則可用化學(xué)消毒劑與紫外線照射結(jié)合使用試驗(yàn)報(bào)告檢查滅菌是否徹底紫外線滅菌器材：30微孔濾膜過(guò)濾除菌一、目的要求：１.了解過(guò)濾除菌的基本原理。２.掌握過(guò)濾除菌方法。二、基本原理通過(guò)機(jī)械作用濾去液體或空氣中的細(xì)菌微孔濾膜過(guò)濾除菌一、目的要求：31微孔濾膜過(guò)濾除菌器材培養(yǎng)基、2%葡萄糖溶液、肉湯蛋白胨平板注射器、微孔濾膜過(guò)濾器、0.22um濾膜、無(wú)菌試管、鑷子、玻璃刮棒操作步驟組裝濾膜、滅菌連接壓濾無(wú)菌檢查清洗試驗(yàn)報(bào)告記錄無(wú)菌檢查結(jié)果微孔濾膜過(guò)濾除菌器材32實(shí)驗(yàn)二微生物的染色與形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察主要內(nèi)容細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法革蘭氏染色法細(xì)菌的芽孢染色法莢膜染色法實(shí)驗(yàn)二微生物的染色與形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察主要內(nèi)容33細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法一、目的要求：１.學(xué)習(xí)微生物的涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法。２.初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征。3.鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無(wú)菌操作技術(shù)。二、基本原理常用堿性染料：美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等在中性、堿性、弱酸性環(huán)境中細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，而堿性染料電離時(shí)其分子的染色部分帶正電荷，染料易使細(xì)菌著色。細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法一、目的要求：34細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法器材菌種：枯草芽孢桿菌12-18h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物染色劑：呂氏堿性美藍(lán)染液、齊氏石炭酸復(fù)紅染液操作步驟涂片：載玻片中央滴加一滴生理鹽水，接種環(huán)無(wú)菌操作挑少許菌苔涂成薄膜干燥：室溫自然干燥固定：熱固定載玻片涂面朝上通過(guò)火焰2-3次染色：載玻片平放，滴加染液覆蓋薄膜，染約1min水洗：用自來(lái)水輕輕的從玻片一端直接沖去染液干燥鏡檢試驗(yàn)報(bào)告根據(jù)觀察結(jié)果繪出細(xì)菌形態(tài)圖細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法器材35革蘭氏染色法一、目的要求：１.學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法。２.了解革蘭氏染色的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。二、基本原理1884年丹麥病理學(xué)家ChristainGram創(chuàng)立?；窘M成為結(jié)晶紫、碘液、酒精、復(fù)紅。細(xì)胞保持藍(lán)紫色為革蘭氏陽(yáng)性菌，成紅色為革蘭氏陰性菌。染色性與細(xì)菌細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)有關(guān)。革蘭氏染色法一、目的要求：36革蘭氏染色法器材菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物、蠟樣芽孢桿菌12-20h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物。染色劑：革蘭氏染液操作步驟制片：常規(guī)涂片、干燥、固定初染：滴加結(jié)晶紫染色1-2min，水洗媒染：用碘液沖去殘水，加碘液覆蓋染1min，水洗脫色：濾紙吸去殘水，95%乙醇脫色，水洗復(fù)染：用復(fù)紅液染2min干燥鏡檢試驗(yàn)報(bào)告根據(jù)觀察結(jié)果說(shuō)明細(xì)菌的形狀、顏色、及革蘭氏染色反應(yīng)革蘭氏染色法器材37細(xì)菌的芽孢染色法一、目的要求：１.學(xué)習(xí)并掌握芽孢染色法。２.初步了解芽孢桿菌的形態(tài)。二、基本原理芽孢是某些細(xì)菌生長(zhǎng)到一定階段在菌體內(nèi)形成的休眠體，其特征是鑒定細(xì)菌的依據(jù)之一。用著色能力強(qiáng)的染液（如：孔雀綠、石炭酸復(fù)紅）在加熱情況下透過(guò)菌體進(jìn)入芽孢使其著色，通過(guò)水洗菌體的顏色被洗掉，芽孢的染色則被保留，從而區(qū)分菌體與芽孢。細(xì)菌的芽孢染色法一、目的要求：38細(xì)菌的芽孢染色法器材菌種：蠟樣芽孢桿菌2d營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物、球形芽孢桿菌1-2d營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物。染色劑：5%孔雀綠水溶液、0.5%番紅水溶液操作步驟（Schaeffer-Fulton氏染色法）制片：常規(guī)涂片、干燥、固定染色：滴加數(shù)滴孔雀綠染液，火焰上加熱至染料冒蒸汽時(shí)開(kāi)始記時(shí)染5min，水洗復(fù)染：用番紅液復(fù)染2min，水洗干燥鏡檢試驗(yàn)報(bào)告根據(jù)觀察結(jié)果繪出芽孢桿菌的形態(tài)特征細(xì)菌的芽孢染色法器材39莢膜染色法一、目的要求：學(xué)習(xí)并掌握莢膜染色法。二、基本原理莢膜是包圍在細(xì)菌細(xì)胞外的一層黏液狀或膠質(zhì)狀物質(zhì)，主要成分為多糖、糖蛋白或多肽。莢膜與染液親和力低、不易著色，且可溶于水，通過(guò)水洗可在菌體的周圍形成一透明圈。莢膜染色法一、目的要求：40莢膜染色法器材菌種：褐球固氮菌約2d無(wú)氮瓊脂斜面培養(yǎng)物。染色劑：繪圖墨水、1%甲基紫水溶液、1%結(jié)晶紫水溶液、6%葡萄糖水溶液、20%硫酸銅水溶液操作步驟濕墨水法制備菌和墨水混合液加蓋玻片鏡檢（低、高倍鏡）結(jié)果：灰色背景下在菌體周圍呈現(xiàn)明亮的透明圈既為莢膜莢膜染色法器材41莢膜染色法操作步驟干墨水法制備混合液：6%葡萄糖液、菌體、墨水制片：涂片—干燥—熱固定染色：1%甲基紫染1-2min,水洗鏡檢（低、高倍鏡）結(jié)果：灰色背景，菌體紫色，菌體周圍的清晰透明圈既為莢膜莢膜染色法操作步驟42莢膜染色法操作步驟Anthony氏法制片：涂片—自然干燥染色：1%結(jié)晶紫染2min脫色：用20%硫酸銅水溶液沖洗鏡檢（油鏡）結(jié)果：菌體深紫色，菌體周圍的莢膜呈淡紫色莢膜染色法操作步驟43實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌形態(tài)觀察放線菌形態(tài)的觀察霉菌形態(tài)的觀察實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌形態(tài)觀察放線菌形態(tài)的觀察44放線菌形態(tài)的觀察一、目的要求：１.學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法。２.初步了解放線菌的形態(tài)特征。二、基本原理放線菌是能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽(yáng)性菌，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的稱基內(nèi)菌絲；向空氣中生長(zhǎng)的稱氣生菌絲能否產(chǎn)生菌絲體及由菌絲體分化產(chǎn)生的各種形態(tài)特征是鑒定放線菌的重要依據(jù)。放線菌形態(tài)的觀察一、目的要求：45放線菌形態(tài)的觀察器材菌種：細(xì)黃鏈霉菌培養(yǎng)基：滅菌的高氏Ｉ號(hào)瓊脂染色劑：石炭酸復(fù)紅染液操作步驟扦片法倒平板滅菌的高氏Ｉ號(hào)瓊脂接種扦片培養(yǎng)蓋玻片鏡檢（低、高倍鏡）結(jié)果：放線菌形態(tài)的觀察器材46放線菌形態(tài)的觀察操作步驟玻璃紙法倒平板滅菌的高氏Ｉ號(hào)瓊脂接種扦片培養(yǎng)蓋玻片鏡檢（低、高倍鏡）結(jié)果：放線菌形態(tài)的觀察操作步驟47放線菌形態(tài)的觀察操作步驟印片法倒平板滅菌的高氏Ｉ號(hào)瓊脂接種培養(yǎng)印片染色石炭酸復(fù)紅染液1min，水洗鏡檢（油鏡）結(jié)果：放線菌形態(tài)的觀察操作步驟48霉菌形態(tài)的觀察一、目的要求：１.學(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法。２.了解四類常見(jiàn)霉菌的基本形態(tài)特征。二、基本原理霉菌能形成復(fù)什分枝的菌，有基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，后者生長(zhǎng)到一定程度分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子菌絲體或孢子的形態(tài)特征是鑒定霉菌的重要依據(jù)。霉菌形態(tài)的觀察一、目的要求：49霉菌形態(tài)的觀察器材菌種：曲霉、青霉培養(yǎng)2-5d的馬鈴薯瓊脂平板培養(yǎng)物培養(yǎng)基：土豆瓊脂染色劑：乳酸石炭酸棉藍(lán)染液儀器和其他用具：無(wú)菌吸管、平皿、載玻片、蓋玻片、U形玻棒、解剖針、解剖刀、鑷子、50％乙醇、20％甘油等霉菌形態(tài)的觀察器材50霉菌形態(tài)的觀察操作步驟（直接制片觀察法）在載玻片上加一滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染液，用解剖針從霉菌菌落邊緣挑取少量已產(chǎn)生孢子的霉菌菌絲，先置于50％乙醇中浸一下洗去脫落的孢子，再放在載玻片上的染液中，用解剖針小心地將菌絲分散開(kāi)。加蓋玻片，用低倍鏡觀察，必要時(shí)換高倍鏡。試驗(yàn)報(bào)告：繪圖說(shuō)明霉菌的形態(tài)特征霉菌形態(tài)的觀察操作步驟（直接制片觀察法）51微生物的分離與純化一、目的要求：掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù)。二、基本原理微生物的分離與純化指從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程常用方法：簡(jiǎn)易單細(xì)胞挑取法平板分離法微生物的分離與純化一、目的要求：52微生物的分離與純化平板分離法基本原理選擇性培養(yǎng)：選擇適合于待分離微生物的生長(zhǎng)條件（營(yíng)養(yǎng)、酸堿度、溫度、氧等）要求或加入某種抑制劑造成只適合于該微生物的生長(zhǎng)，抑制其他微生物生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰一些微生物單個(gè)菌落平板劃線法：微生物在固體培養(yǎng)基上可形成單個(gè)菌落，挑取該菌落在瓊脂平板上劃線培養(yǎng)可純化細(xì)菌微生物的分離與純化平板分離法基本原理53微生物的分離與純化器材菌種：米曲霉培養(yǎng)基：淀粉瓊脂、牛肉膏蛋白胨瓊脂馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基、查氏瓊脂培養(yǎng)基溶液和試劑：10％酚盛9ml無(wú)菌水的玻璃試管、盛90ml無(wú)菌水并帶玻璃珠的三角燒瓶、4％水瓊脂儀器和其他用具：無(wú)菌玻棒、無(wú)菌吸管、接種環(huán)、無(wú)菌培養(yǎng)皿、鏈霉素、土樣等微生物的分離與純化器材54微生物的分離與純化操作步驟稀釋涂布平板法平板劃線分離法簡(jiǎn)易單孢子分離法實(shí)驗(yàn)報(bào)告微生物的分離與純化操作步驟55酵母菌形態(tài)的觀察

及死活細(xì)胞的鑒別一、目的要求：１.觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式，學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活的實(shí)驗(yàn)方法。２.掌握酵母菌的一般形態(tài)特征及其與細(xì)菌的區(qū)別。二、基本原理

酵母菌是不運(yùn)動(dòng)的單細(xì)胞真核微生物，比長(zhǎng)見(jiàn)的細(xì)菌大十倍左右，大多數(shù)酵母以出芽方式進(jìn)行無(wú)性繁殖。美藍(lán)的氧化型為藍(lán)色，還原型為無(wú)色。用美藍(lán)對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型還原成無(wú)色的還原型，借此可鑒別酵母細(xì)胞的死活。酵母菌形態(tài)的觀察

及死活細(xì)胞的鑒別一、目的要求：56酵母菌形態(tài)的觀察

及死活細(xì)胞的鑒別器材菌種：釀酒酵母培養(yǎng)約2d的麥芽汁斜面培養(yǎng)物溶液和試劑：0.05％和0.1％呂氏堿性美藍(lán)染液、革蘭氏染色用碘液。儀器和其他用具：載玻片、蓋玻片等酵母菌形態(tài)的觀察

及死活細(xì)胞的鑒別器材57酵母菌形態(tài)的觀察

及死活細(xì)胞的鑒別操作步驟（美藍(lán)浸片法）染色：0.1％呂氏堿性美藍(lán)染液和酵母菌菌苔在載玻片上混勻，加蓋玻片。觀察：3min后用低倍鏡、高倍鏡觀察酵母的形態(tài)和出芽情況，根據(jù)顏色區(qū)分死活細(xì)胞；30min后再次觀察，注意死活細(xì)胞數(shù)量的變化。用0.05％呂氏堿性美藍(lán)染液重復(fù)實(shí)驗(yàn)酵母菌形態(tài)的觀察

及死活細(xì)胞的鑒別操作步驟（美藍(lán)浸片法）58酵母菌形態(tài)的觀察

及死活細(xì)胞的鑒別操作步驟（水－碘液浸片法）在載玻片上加一滴革蘭氏染色用碘液，再加三滴水，取少許酵母菌苔在其中混合，加蓋玻片后鏡檢。實(shí)驗(yàn)報(bào)告繪圖說(shuō)明觀察到的酵母菌的形態(tài)特征。酵母菌形態(tài)的觀察

及死活細(xì)胞的鑒別操作步驟（水－碘液浸片法）59微生物大小的測(cè)定一、目的要求：１.學(xué)習(xí)并掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物大小的方法。２.增強(qiáng)微生物細(xì)胞大小的感性認(rèn)識(shí)。二、基本原理

微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，是分類鑒定的依據(jù)之一。在顯微鏡下用測(cè)微尺可對(duì)微生物細(xì)胞大小進(jìn)行測(cè)定。微生物大小的測(cè)定一、目的要求：60微生物大小的測(cè)定器材菌種：大腸桿菌染色標(biāo)本片、釀酒酵母培養(yǎng)約1d的麥芽汁斜面培養(yǎng)物儀器和其他用具：載玻片、蓋玻片、目鏡測(cè)微尺、物鏡測(cè)微尺等微生物大小的測(cè)定器材61微生物大小的測(cè)定操作步驟裝目鏡測(cè)微尺校正目鏡測(cè)微尺菌體大小的測(cè)定實(shí)驗(yàn)報(bào)告填寫(xiě)目鏡測(cè)微尺校正表填寫(xiě)各菌大小測(cè)定結(jié)果微生物大小的測(cè)定操作步驟62微生物數(shù)量的測(cè)定（顯微鏡直接計(jì)數(shù)法）微生物數(shù)量的測(cè)定（顯微鏡直接計(jì)數(shù)法）63微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件64微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件65微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件66微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件67微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件68微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件69微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件70微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件71微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件72微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件73微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件74微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件75微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件76微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件77微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件78微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件79微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件80微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件81微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件82微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件83微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件84微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件85微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件86微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件87微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)88實(shí)驗(yàn)一微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)普通光學(xué)顯微鏡的使用培養(yǎng)基的制備消毒與滅菌細(xì)菌三型的觀察實(shí)驗(yàn)一微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)普通光學(xué)顯微鏡的使用89普通光學(xué)顯微鏡的使用目的要求1.學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理及使用方法2.復(fù)習(xí)普通臺(tái)式顯微鏡的結(jié)構(gòu)、各部分的結(jié)構(gòu)、使用方法普通光學(xué)顯微鏡的使用目的要求90基本原理（油鏡的原理）1.增加照明亮度在油鏡與載玻片間加折射率與玻璃相近的介質(zhì)（如：香柏油）減少光線的折射與反射損失2.增加顯微鏡的分辨率基本原理（油鏡的原理）91油鏡的使用方法1.準(zhǔn)備工作（復(fù)習(xí)）顯微鏡的放置光源的調(diào)節(jié)目鏡的調(diào)節(jié)聚光器的調(diào)節(jié)油鏡的使用方法1.準(zhǔn)備工作（復(fù)習(xí)）92油鏡的使用方法2.顯微觀察低倍鏡觀察高倍鏡觀察油鏡觀察在觀察目標(biāo)區(qū)域滴加香柏油，仔細(xì)微調(diào)，認(rèn)真觀察尋找觀察目標(biāo)油鏡的使用方法2.顯微觀察尋找觀察目標(biāo)93油鏡的使用方法3.顯微鏡使用完畢的處理上升鏡筒，取下載玻片用擦鏡紙檫去油用擦鏡紙蘸無(wú)水乙醚乙醇用干凈擦鏡紙擦拭物鏡與目鏡還原各部分注意：切勿用手、其他紙擦拭鏡頭油鏡的使用方法3.顯微鏡使用完畢的處理94實(shí)驗(yàn)觀察內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容：觀察金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的染色標(biāo)本試驗(yàn)報(bào)告：繪出金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌在油鏡下的形態(tài)。實(shí)驗(yàn)觀察內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容：觀察金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌95微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件96微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件97微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件98鏈球菌鏈球菌99桿菌桿菌100培養(yǎng)基的制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備目的要求1.明確培養(yǎng)基的制備原理2.掌握配置培養(yǎng)基的一般方法與步驟培養(yǎng)基的制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備101培養(yǎng)基的制備原理牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是應(yīng)用最廣泛的、最普通的細(xì)菌培養(yǎng)基,也稱普通培養(yǎng)基培養(yǎng)基的制備原理牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是應(yīng)用最廣泛的、最普通的細(xì)102組成牛肉膏：碳源、能源、磷酸鹽、維生素蛋白胨：氮源、維生素NaCl:無(wú)機(jī)鹽水瓊脂：塑型組成103培養(yǎng)基的制備方法1.稱量(牛肉膏,蛋白胨,NaCl)2.溶化3.調(diào)pH4.過(guò)濾5.分裝6.加塞7.包扎8.滅菌9.擱置斜面培養(yǎng)基的制備方法1.稱量(牛肉膏,蛋白胨,NaCl)6.加塞104注意事項(xiàng)1.蛋白胨易吸水，稱取要迅速2.瓊脂溶化過(guò)程中注意溫度，勿使過(guò)熱溢出注意事項(xiàng)1.蛋白胨易吸水，稱取要迅速105消毒與滅菌消毒與滅菌的概念消毒：一般是指消滅病原菌與有害微生物的營(yíng)養(yǎng)體滅菌：指殺滅一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體、芽孢、孢子消毒與滅菌的主要方法加熱法過(guò)濾法照射法化學(xué)藥品消毒與滅菌消毒與滅菌的概念106加熱法干熱滅菌火焰灼燒滅菌：接種環(huán)、接種針、金屬用具、無(wú)菌操作時(shí)在火焰上短暫灼燒瓶口等熱空氣滅菌：玻璃器皿加熱法干熱滅菌107加熱法－－濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌鍋15-30min培養(yǎng)基、工作服、橡皮物品、玻璃器皿等加熱法－－濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌108常壓蒸汽滅菌某些不適宜高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基不具備高壓蒸汽滅菌條件的僅能殺死大多數(shù)微生物、可用常壓間歇滅菌法常壓蒸汽滅菌109加熱法－－濕熱滅菌煮沸消毒法注射器、解剖器械等10-15min可殺死細(xì)菌所有營(yíng)養(yǎng)體、部分芽孢超高溫殺菌135-150℃、2-8s牛奶及其他液態(tài)食品殺死微生物、保存營(yíng)養(yǎng)加熱法－－濕熱滅菌煮沸消毒法110其他方法過(guò)濾除菌血清、抗生素、糖溶液等不適宜加熱消毒滅菌輻射滅菌紫外線照射化學(xué)藥品滅菌重金屬離子、抗生素、來(lái)蘇爾、７５％的乙醇。其他方法過(guò)濾除菌111干熱滅菌目的要求：１.了解干熱滅菌的原理和應(yīng)用范圍２.學(xué)習(xí)干熱滅菌的操作技術(shù)基本原理：干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固與其本身的含水量有關(guān)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之，含水量越小，凝固緩慢。因此與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高（１６０～１７０℃），時(shí)間長(zhǎng)。干熱滅菌目的要求：112干熱滅菌器材：培養(yǎng)皿，試管，吸管，電烘箱等操作步驟：裝入待滅菌的物品：避免物品太擠妨礙空氣流通升溫恒溫降溫開(kāi)箱取物：溫度未降至70℃前勿開(kāi)箱，防爆干熱滅菌器材：113高壓蒸汽滅菌一、目的要求：１.了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍。２.學(xué)習(xí)高壓蒸汽滅菌的基本方法。二、基本原理高壓使水的沸點(diǎn)增高，產(chǎn)生超過(guò)100℃的高溫蒸汽，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性水蒸氣的穿透性強(qiáng)濕熱的蒸汽有潛熱高壓蒸汽滅菌一、目的要求：114高壓蒸汽滅菌器材：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、高壓蒸汽滅菌鍋操作步驟取出內(nèi)層鍋，向外層鍋內(nèi)加適量的水放置內(nèi)層鍋及待滅菌物加蓋，并將蓋上排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽加熱同時(shí)打開(kāi)排氣閥滅菌所需時(shí)間到后關(guān)閉電源，降溫取出滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，檢查無(wú)菌生長(zhǎng)則可用試驗(yàn)報(bào)告檢查滅菌是否徹底高壓蒸汽滅菌器材：115紫外線滅菌一、目的要求：了解紫外線滅菌的基本原理及方法二、基本原理紫外線可誘導(dǎo)胸腺嘧啶二聚體的形成、DNA鏈的交聯(lián)，抑制DNA的復(fù)制幅射使空氣中的氧電離產(chǎn)生[o],使o2生成臭氧（O3）或使H2O生成H2O2,利用O3H2O2的氧化殺菌作用紫外線滅菌一、目的要求：116紫外線滅菌器材：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、溶液或試劑、紫外線燈操作步驟紫外線燈直接照射30min、檢查培養(yǎng)基37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，無(wú)菌生長(zhǎng)則可用化學(xué)消毒劑與紫外線照射結(jié)合使用試驗(yàn)報(bào)告檢查滅菌是否徹底紫外線滅菌器材：117微孔濾膜過(guò)濾除菌一、目的要求：１.了解過(guò)濾除菌的基本原理。２.掌握過(guò)濾除菌方法。二、基本原理通過(guò)機(jī)械作用濾去液體或空氣中的細(xì)菌微孔濾膜過(guò)濾除菌一、目的要求：118微孔濾膜過(guò)濾除菌器材培養(yǎng)基、2%葡萄糖溶液、肉湯蛋白胨平板注射器、微孔濾膜過(guò)濾器、0.22um濾膜、無(wú)菌試管、鑷子、玻璃刮棒操作步驟組裝濾膜、滅菌連接壓濾無(wú)菌檢查清洗試驗(yàn)報(bào)告記錄無(wú)菌檢查結(jié)果微孔濾膜過(guò)濾除菌器材119實(shí)驗(yàn)二微生物的染色與形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察主要內(nèi)容細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法革蘭氏染色法細(xì)菌的芽孢染色法莢膜染色法實(shí)驗(yàn)二微生物的染色與形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察主要內(nèi)容120細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法一、目的要求：１.學(xué)習(xí)微生物的涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法。２.初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征。3.鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無(wú)菌操作技術(shù)。二、基本原理常用堿性染料：美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等在中性、堿性、弱酸性環(huán)境中細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，而堿性染料電離時(shí)其分子的染色部分帶正電荷，染料易使細(xì)菌著色。細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法一、目的要求：121細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法器材菌種：枯草芽孢桿菌12-18h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物染色劑：呂氏堿性美藍(lán)染液、齊氏石炭酸復(fù)紅染液操作步驟涂片：載玻片中央滴加一滴生理鹽水，接種環(huán)無(wú)菌操作挑少許菌苔涂成薄膜干燥：室溫自然干燥固定：熱固定載玻片涂面朝上通過(guò)火焰2-3次染色：載玻片平放，滴加染液覆蓋薄膜，染約1min水洗：用自來(lái)水輕輕的從玻片一端直接沖去染液干燥鏡檢試驗(yàn)報(bào)告根據(jù)觀察結(jié)果繪出細(xì)菌形態(tài)圖細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法器材122革蘭氏染色法一、目的要求：１.學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法。２.了解革蘭氏染色的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。二、基本原理1884年丹麥病理學(xué)家ChristainGram創(chuàng)立?；窘M成為結(jié)晶紫、碘液、酒精、復(fù)紅。細(xì)胞保持藍(lán)紫色為革蘭氏陽(yáng)性菌，成紅色為革蘭氏陰性菌。染色性與細(xì)菌細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)有關(guān)。革蘭氏染色法一、目的要求：123革蘭氏染色法器材菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物、蠟樣芽孢桿菌12-20h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物。染色劑：革蘭氏染液操作步驟制片：常規(guī)涂片、干燥、固定初染：滴加結(jié)晶紫染色1-2min，水洗媒染：用碘液沖去殘水，加碘液覆蓋染1min，水洗脫色：濾紙吸去殘水，95%乙醇脫色，水洗復(fù)染：用復(fù)紅液染2min干燥鏡檢試驗(yàn)報(bào)告根據(jù)觀察結(jié)果說(shuō)明細(xì)菌的形狀、顏色、及革蘭氏染色反應(yīng)革蘭氏染色法器材124細(xì)菌的芽孢染色法一、目的要求：１.學(xué)習(xí)并掌握芽孢染色法。２.初步了解芽孢桿菌的形態(tài)。二、基本原理芽孢是某些細(xì)菌生長(zhǎng)到一定階段在菌體內(nèi)形成的休眠體，其特征是鑒定細(xì)菌的依據(jù)之一。用著色能力強(qiáng)的染液（如：孔雀綠、石炭酸復(fù)紅）在加熱情況下透過(guò)菌體進(jìn)入芽孢使其著色，通過(guò)水洗菌體的顏色被洗掉，芽孢的染色則被保留，從而區(qū)分菌體與芽孢。細(xì)菌的芽孢染色法一、目的要求：125細(xì)菌的芽孢染色法器材菌種：蠟樣芽孢桿菌2d營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物、球形芽孢桿菌1-2d營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物。染色劑：5%孔雀綠水溶液、0.5%番紅水溶液操作步驟（Schaeffer-Fulton氏染色法）制片：常規(guī)涂片、干燥、固定染色：滴加數(shù)滴孔雀綠染液，火焰上加熱至染料冒蒸汽時(shí)開(kāi)始記時(shí)染5min，水洗復(fù)染：用番紅液復(fù)染2min，水洗干燥鏡檢試驗(yàn)報(bào)告根據(jù)觀察結(jié)果繪出芽孢桿菌的形態(tài)特征細(xì)菌的芽孢染色法器材126莢膜染色法一、目的要求：學(xué)習(xí)并掌握莢膜染色法。二、基本原理莢膜是包圍在細(xì)菌細(xì)胞外的一層黏液狀或膠質(zhì)狀物質(zhì)，主要成分為多糖、糖蛋白或多肽。莢膜與染液親和力低、不易著色，且可溶于水，通過(guò)水洗可在菌體的周圍形成一透明圈。莢膜染色法一、目的要求：127莢膜染色法器材菌種：褐球固氮菌約2d無(wú)氮瓊脂斜面培養(yǎng)物。染色劑：繪圖墨水、1%甲基紫水溶液、1%結(jié)晶紫水溶液、6%葡萄糖水溶液、20%硫酸銅水溶液操作步驟濕墨水法制備菌和墨水混合液加蓋玻片鏡檢（低、高倍鏡）結(jié)果：灰色背景下在菌體周圍呈現(xiàn)明亮的透明圈既為莢膜莢膜染色法器材128莢膜染色法操作步驟干墨水法制備混合液：6%葡萄糖液、菌體、墨水制片：涂片—干燥—熱固定染色：1%甲基紫染1-2min,水洗鏡檢（低、高倍鏡）結(jié)果：灰色背景，菌體紫色，菌體周圍的清晰透明圈既為莢膜莢膜染色法操作步驟129莢膜染色法操作步驟Anthony氏法制片：涂片—自然干燥染色：1%結(jié)晶紫染2min脫色：用20%硫酸銅水溶液沖洗鏡檢（油鏡）結(jié)果：菌體深紫色，菌體周圍的莢膜呈淡紫色莢膜染色法操作步驟130實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌形態(tài)觀察放線菌形態(tài)的觀察霉菌形態(tài)的觀察實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌形態(tài)觀察放線菌形態(tài)的觀察131放線菌形態(tài)的觀察一、目的要求：１.學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法。２.初步了解放線菌的形態(tài)特征。二、基本原理放線菌是能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽(yáng)性菌，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的稱基內(nèi)菌絲；向空氣中生長(zhǎng)的稱氣生菌絲能否產(chǎn)生菌絲體及由菌絲體分化產(chǎn)生的各種形態(tài)特征是鑒定放線菌的重要依據(jù)。放線菌形態(tài)的觀察一、目的要求：132放線菌形態(tài)的觀察器材菌種：細(xì)黃鏈霉菌培養(yǎng)基：滅菌的高氏Ｉ號(hào)瓊脂染色劑：石炭酸復(fù)紅染液操作步驟扦片法倒平板滅菌的高氏Ｉ號(hào)瓊脂接種扦片培養(yǎng)蓋玻片鏡檢（低、高倍鏡）結(jié)果：放線菌形態(tài)的觀察器材133放線菌形態(tài)的觀察操作步驟玻璃紙法倒平板滅菌的高氏Ｉ號(hào)瓊脂接種扦片培養(yǎng)蓋玻片鏡檢（低、高倍鏡）結(jié)果：放線菌形態(tài)的觀察操作步驟134放線菌形態(tài)的觀察操作步驟印片法倒平板滅菌的高氏Ｉ號(hào)瓊脂接種培養(yǎng)印片染色石炭酸復(fù)紅染液1min，水洗鏡檢（油鏡）結(jié)果：放線菌形態(tài)的觀察操作步驟135霉菌形態(tài)的觀察一、目的要求：１.學(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法。２.了解四類常見(jiàn)霉菌的基本形態(tài)特征。二、基本原理霉菌能形成復(fù)什分枝的菌，有基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，后者生長(zhǎng)到一定程度分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子菌絲體或孢子的形態(tài)特征是鑒定霉菌的重要依據(jù)。霉菌形態(tài)的觀察一、目的要求：136霉菌形態(tài)的觀察器材菌種：曲霉、青霉培養(yǎng)2-5d的馬鈴薯瓊脂平板培養(yǎng)物培養(yǎng)基：土豆瓊脂染色劑：乳酸石炭酸棉藍(lán)染液儀器和其他用具：無(wú)菌吸管、平皿、載玻片、蓋玻片、U形玻棒、解剖針、解剖刀、鑷子、50％乙醇、20％甘油等霉菌形態(tài)的觀察器材137霉菌形態(tài)的觀察操作步驟（直接制片觀察法）在載玻片上加一滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染液，用解剖針從霉菌菌落邊緣挑取少量已產(chǎn)生孢子的霉菌菌絲，先置于50％乙醇中浸一下洗去脫落的孢子，再放在載玻片上的染液中，用解剖針小心地將菌絲分散開(kāi)。加蓋玻片，用低倍鏡觀察，必要時(shí)換高倍鏡。試驗(yàn)報(bào)告：繪圖說(shuō)明霉菌的形態(tài)特征霉菌形態(tài)的觀察操作步驟（直接制片觀察法）138微生物的分離與純化一、目的要求：掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù)。二、基本原理微生物的分離與純化指從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程常用方法：簡(jiǎn)易單細(xì)胞挑取法平板分離法微生物的分離與純化一、目的要求：139微生物的分離與純化平板分離法基本原理選擇性培養(yǎng)：選擇適合于待分離微生物的生長(zhǎng)條件（營(yíng)養(yǎng)、酸堿度、溫度、氧等）要求或加入某種抑制劑造成只適合于該微生物的生長(zhǎng)，抑制其他微生物生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰一些微生物單個(gè)菌落平板劃線法：微生物在固體培養(yǎng)基上可形成單個(gè)菌落，挑取該菌落在瓊脂平板上劃線培養(yǎng)可純化細(xì)菌微生物的分離與純化平板分離法基本原理140微生物的分離與純化器材菌種：米曲霉培養(yǎng)基：淀粉瓊脂、牛肉膏蛋白胨瓊脂馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基、查氏瓊脂培養(yǎng)基溶液和試劑：10％酚盛9ml無(wú)菌水的玻璃試管、盛90ml無(wú)菌水并帶玻璃珠的三角燒瓶、4％水瓊脂儀器和其他用具：無(wú)菌玻棒、無(wú)菌