乙肝五項(xiàng)操作規(guī)程

乙肝五項(xiàng)操作規(guī)程乙肝五項(xiàng)操作規(guī)程乙肝五項(xiàng)操作規(guī)程xxx公司乙肝五項(xiàng)操作規(guī)程文件編號(hào)：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準(zhǔn)審核制定方案設(shè)計(jì)，管理制度乙肝五項(xiàng)（乳膠法）操作規(guī)程1.檢測(cè)目的乙型肝炎病毒標(biāo)志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)檢測(cè)。2.測(cè)定原理HBsAg檢測(cè)采用雙抗體夾心法原理，試劑含有被事先固定于膜上測(cè)試區(qū)（T區(qū)）的抗體。檢測(cè)時(shí)，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的乳膠顆粒（即標(biāo)記物）結(jié)合的HBsAb（即標(biāo)記抗體）反應(yīng)，該結(jié)合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽(yáng)性，乳膠抗體（標(biāo)記抗體）在層析過(guò)程中先與標(biāo)本中的HBsAg結(jié)合，隨后結(jié)合物會(huì)被固定在T區(qū)膜上的HBsAb捕獲，形成HBsAb標(biāo)記抗體-HBsAg-HBsAb復(fù)合物，從而在T區(qū)形成一條紅杠。如為陰性，則T區(qū)沒(méi)有紅杠。HBsAb檢測(cè)采用雙抗原夾心法原理，試劑含有事先固定于膜上測(cè)試區(qū)（T區(qū)）的HBsAg。檢測(cè)時(shí)，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的乳膠顆粒結(jié)合的HBsAg反應(yīng)（即標(biāo)記抗原）反應(yīng)，該結(jié)合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽(yáng)性，乳膠抗原（標(biāo)記抗原）在層析過(guò)程中先與標(biāo)本中的HBsAb結(jié)合，隨后結(jié)合物會(huì)被固定在T區(qū)膜上的HBsAg捕獲，形成HBsAg標(biāo)記抗原-HBsAb-HBsAg復(fù)合物，從而在T區(qū)形成一條紅杠。如為陰性，則T區(qū)沒(méi)有紅杠。HBeAg檢測(cè)采用雙抗體夾心法原理。試劑含有事先固定于膜上測(cè)試區(qū)（T區(qū)）的HBeAb。檢測(cè)時(shí)，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的乳膠顆粒結(jié)合的HBeAb反應(yīng)（即標(biāo)記抗體）反應(yīng)，該結(jié)合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽(yáng)性，乳膠抗體（標(biāo)記抗體）在層析過(guò)程中先與標(biāo)本中的HBeAg結(jié)合，隨后結(jié)合物會(huì)被固定在T區(qū)膜上的HBeAb捕獲，形成HBeAb標(biāo)記抗原-HBeAg-HBeAb復(fù)合物，從而在T區(qū)形成一條紅杠。如為陰性，則T區(qū)沒(méi)有紅杠。HBeAg、HBcAb采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法原理，試劑含有事先固定于膜上測(cè)試區(qū)（T區(qū)）的抗體。檢測(cè)時(shí)，標(biāo)本滴入試劑加樣處，隨之標(biāo)本在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如標(biāo)本中含有相應(yīng)的抗體，則同膜上測(cè)試區(qū)(T)的單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)，與預(yù)包被在乳膠顆粒上的相應(yīng)抗原反應(yīng)。如標(biāo)本中沒(méi)有相應(yīng)的抗體，則預(yù)包被在乳膠顆粒上的相應(yīng)抗原與膜上測(cè)試區(qū)(T)的單克隆抗體全部結(jié)合。陽(yáng)性標(biāo)本，測(cè)試區(qū)(T)將沒(méi)有紅色條帶；陰性標(biāo)本，測(cè)試區(qū)(T)會(huì)出現(xiàn)明顯的紅色條帶。3.標(biāo)本采集樣本采集后應(yīng)盡快分離血清或血漿以避免溶血。檢測(cè)進(jìn)應(yīng)盡量使用新鮮的樣本。樣本若不能及時(shí)送檢，可在2-8℃冷藏3天。長(zhǎng)期保存需冷凍于-20℃，忌反復(fù)凍融。發(fā)臭、溶血等異常樣本請(qǐng)勿使用。4.試劑艾博生物醫(yī)藥有限公司5.操作步驟使用前將試劑板和血清／血漿標(biāo)本恢復(fù)至室溫(20～30％)。從原包裝鋁箔袋中取出試劑盒(注意：在扣開鋁箔前應(yīng)先恢復(fù)至室溫)，在1小時(shí)內(nèi)應(yīng)盡快地使用。將試劑盒置于干凈平坦的臺(tái)面上，用吸管吸取血清／血漿標(biāo)本，逐滴垂直加入于試劑板的五個(gè)加樣子L中(每孔2-3滴)。加樣后立刻開始計(jì)時(shí)，等待紅色條帶的出現(xiàn)，在15分鐘時(shí)讀取測(cè)試結(jié)果。在20分鐘后讀取的結(jié)果無(wú)效。6.結(jié)果判定由于前三個(gè)項(xiàng)目HBsAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗體(原)夾心法原理，后兩個(gè)項(xiàng)日HBeAb、HbcAb使用競(jìng)爭(zhēng)法原理。因此前一：個(gè)項(xiàng)日與后兩個(gè)項(xiàng)目判讀方法是不同的，請(qǐng)注意區(qū)別。.HBsAg、HBsAb、HbeAg陽(yáng)性(+)：兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測(cè)試區(qū)(T)內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)(C)。陽(yáng)性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有待測(cè)物質(zhì)。陰性(-)：質(zhì)控區(qū)(c)出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)(T)內(nèi)無(wú)紅色條帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表明：標(biāo)本中檢測(cè)不出待測(cè)物質(zhì)。

無(wú)效：質(zhì)控區(qū)(c)未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過(guò)程或試劑盒已經(jīng)變質(zhì)損壞。在此情況下，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，并用新的試劑盒重新測(cè)試。如果問(wèn)題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號(hào)產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。注意：在進(jìn)行HBsAg、HBsAb、HbeAg測(cè)試時(shí)，測(cè)試區(qū)(T)內(nèi)的紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。只要在規(guī)定的觀察時(shí)間內(nèi)，不論該條帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)該判為陽(yáng)性結(jié)果。、HBcAb陽(yáng)性(+)：僅質(zhì)控區(qū)(C)出現(xiàn)一條紅色條帶．在測(cè)試區(qū)(T)內(nèi)無(wú)紅色條帶出現(xiàn)。陽(yáng)性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有待測(cè)物質(zhì)。弱陽(yáng)性(+)：質(zhì)控區(qū)(C)出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)(T)內(nèi)有非常弱的紅色條帶出現(xiàn)。陽(yáng)性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有待測(cè)物質(zhì)。陰性(-)：兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測(cè)試區(qū)(T)內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)(C)。陰性結(jié)果表明：標(biāo)本中檢測(cè)不出待測(cè)物質(zhì)。無(wú)效：質(zhì)控區(qū)(C)未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過(guò)程或試劑盒已經(jīng)變質(zhì)損壞。在此情況下，應(yīng)重新測(cè)試。如果問(wèn)題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號(hào)產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。7.質(zhì)量控制請(qǐng)控制判讀時(shí)間，測(cè)試結(jié)果應(yīng)在測(cè)定開始后20分鐘左右讀取，30分鐘后讀判定無(wú)效。質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C區(qū))一條紅色條帶的出現(xiàn)是試驗(yàn)結(jié)果可靠的前提。質(zhì)控內(nèi)(C)所顯現(xiàn)的紅色條帶是判定標(biāo)本是否足夠，層析過(guò)程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。8.注意事項(xiàng)乳膠法乙肝五項(xiàng)檢測(cè)試劑板(血清／血漿)只是定性的篩選乙肝病毒血清標(biāo)志物的存在，不能確定血樣中病毒的含量。由于在技術(shù)上和操作上可能出現(xiàn)的失誤，同時(shí)也由于標(biāo)本中存在的干擾物質(zhì)，檢測(cè)結(jié)果可能有錯(cuò)誤。對(duì)可疑結(jié)果應(yīng)作相應(yīng)的進(jìn)一步檢測(cè)。8.生物安全防護(hù)在檢測(cè)前，所有標(biāo)本均應(yīng)視為“陽(yáng)性”標(biāo)本即生物危險(xiǎn)品。如操作中不慎灑落血液，要及時(shí)對(duì)污染臺(tái)面消毒處理。操作前一定要做好自身防護(hù)(穿白大衣、帶口罩、白帽、膠皮手套)。HBV對(duì)低溫、干燥、紫外線、70％乙醇均有耐受性。煮沸100℃10分鐘、高壓蒸汽滅菌121℃15分鐘或加熱160℃2小時(shí)均可滅活HBV。5～10g／L次氯酸鈉30分鐘，1：4000福爾馬林37℃72小時(shí)，％過(guò)氧乙酸15分鐘均可破壞其傳染性。9.臨床意義HBsAg陽(yáng)性：血清HBsAg陽(yáng)性，表示受檢者處于HBV的感染狀態(tài)。HBsAg也可從許多乙肝檢驗(yàn)對(duì)象體液和分泌物中測(cè)出，如唾液、精液、乳汁、陰道分泌物等。HBsAb陽(yáng)性：多見(jiàn)于乙型肝炎處于恢復(fù)期或既往曾感染過(guò)HBV，現(xiàn)在已恢復(fù)，而且對(duì)HBV有一定的免疫力；同時(shí)，HBsAb陽(yáng)性是對(duì)接種乙肝疫苗后產(chǎn)生效果，即接種免疫成功的指標(biāo)。HBeAg陽(yáng)性：見(jiàn)于HBV感染的早期，表示血液中含有較多的病毒顆粒，提示肝細(xì)胞有進(jìn)行性損害和高度傳染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于預(yù)測(cè)肝炎病情，HBeAg持續(xù)陽(yáng)性，易轉(zhuǎn)為慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均為陽(yáng)性的孕婦，可以將乙型肝炎傳播病毒給新生兒，其感染的陽(yáng)性率為70％～90％。HBeAb陽(yáng)性：多見(jiàn)于HBeAg轉(zhuǎn)陰的檢驗(yàn)對(duì)象，意味著HBV部分被清除或抑制，病毒復(fù)制減少，傳染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌檢驗(yàn)對(duì)象可檢出HBeAb；在HBsAg和HBsAb陰性時(shí)，如能檢出HBeAh和HBcAb，也能確診為乙型肝炎近期感染。HBcAb陽(yáng)性：說(shuō)明既往感染過(guò)乙肝病毒。它是感染病毒后最早呈陽(yáng)性,也是最晚轉(zhuǎn)陰性的一項(xiàng)，而且有些人一輩子都是陽(yáng)性。附：HBcAb-lgG陽(yáng)性：高滴度表示正在感染HBV，低滴度則是既往感染過(guò)HBV的指標(biāo)，具有流行病學(xué)的意義。HBcAb-IgM陽(yáng)性：抗-HB