《大腸菌群測定》課件

GB4789.3-2010大腸菌群測定GB4789.3-2010大腸菌群測定GB4789.3-2010大腸菌群測定定義：大腸菌群：一群在36℃培養(yǎng)48h可發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏染色陰性無芽孢桿菌。該菌主要來源自人畜糞便，作為糞便污染指標評價食品的衛(wèi)生狀況，推斷食品中腸道致病菌污染的可能。2GB4789.3-2010大腸菌群測定定義：大腸菌群：一群大腸菌群的食品衛(wèi)生學(xué)意義作為糞便污染食品的指標菌，MPN值愈低則說明食品受糞便污染程度及對人體健康危害程度愈低作為腸道致病菌污染食品的指針，大腸菌群數(shù)量越多則腸道致病菌存在的可能性就越高，但兩者之間并不總是呈平行關(guān)系要求食品中大腸菌群完全不存在是不可能的，重要的是其污染程度，即菌量3大腸菌群的食品衛(wèi)生學(xué)意義作為糞便污染食品的指標菌，MPN值愈產(chǎn)氣克雷白氏菌ETEC

EIEC

陰溝腸桿菌EHEC

大腸菌群耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）大腸桿菌產(chǎn)氣克雷白氏菌大腸埃希氏菌檸檬酸桿菌O157：H7大腸桿菌是人和溫血動物腸道內(nèi)普遍存在的細菌，是糞便中的主要菌種。一般生活在人大腸中并不致病，但它侵入人體一些部位時，可引起感染。大腸菌群并非細菌學(xué)分類命名，而是衛(wèi)生細菌領(lǐng)域的用語，它不代表某一個或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細菌，這些細菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致。一般認為可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。

總大腸菌群系指一群在37℃培養(yǎng)24小時能發(fā)酵乳酸、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。耐熱大腸菌群即糞大腸菌群，作為一種衛(wèi)生指標菌，耐熱大腸菌群中很可能含有糞源微生物，因此耐熱大腸菌群的存在表明可能受到了糞便污染，可能存在大腸桿菌。但是，耐熱大腸菌群的存在并不代表對人有什么直接的危害。致病性大腸桿菌能引起食物中毒。致病性菌株能侵入腸粘膜上皮細胞，具有痢疾桿菌樣致病力。腸致病性大腸桿菌（EPEC）、腸毒素性大腸桿菌（ETEC）和腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）等。O157:H7（EHEC)腸出血性大腸桿菌，感染性腹瀉是近年來新發(fā)現(xiàn)的危害嚴重的腸道傳染病，已逐漸成為威脅人群健康的重要公共衛(wèi)生問題。大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌的從屬關(guān)系4產(chǎn)氣克雷白氏菌ETECEIEC陰溝腸桿菌EHEC大腸菌第一法大腸菌群MPN計數(shù)法初發(fā)酵：月桂基硫酸鹽蛋白胨肉湯（LST）替代了乳糖膽鹽發(fā)酵培基確證實驗：煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）替代了乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基，取消了革蘭氏染色實驗培養(yǎng)時間：由24h延長至48h單位：由MPN/100g變?yōu)?/p>

MPN/g5第一法大腸菌群MPN計數(shù)法初發(fā)酵：月桂基硫酸鹽蛋白胨肉湯（第一法大腸菌群MPN計數(shù)法未接種的LST肉湯未接種的乳糖膽鹽肉湯6第一法大腸菌群MPN計數(shù)法未接種的LST肉湯未接種的乳糖膽第一法大腸菌群MPN計數(shù)法LST肉湯乳糖膽鹽肉湯7第一法大腸菌群MPN計數(shù)法LST肉湯乳糖膽鹽肉湯7大腸菌群計數(shù)檢驗流程0將產(chǎn)氣的試管內(nèi)樣品接種到BGLB肉湯LST不產(chǎn)氣（-）小導(dǎo)管里無氣泡LST產(chǎn)氣（+）8大腸菌群計數(shù)檢驗流程0將產(chǎn)氣的試管內(nèi)樣品接種到BGLB肉湯L如何報告結(jié)果？根據(jù)經(jīng)確證后的對應(yīng)濃度陽性管數(shù)查MPN表MPN：最可能數(shù)，基于泊松分布的一種間接計數(shù)方法陽性管數(shù)MPN95%可信限0.100.010.001下限上限000<3.0-9.50013.00.159.61003.60.1718333>1100420-9如何報告結(jié)果？根據(jù)經(jīng)確證后的對應(yīng)濃度陽性管數(shù)查MPN表陽性管如何報告結(jié)果？現(xiàn)國標的MPN表與原國標的MPN表的不同點：1現(xiàn)表里的數(shù)字是有小數(shù)點的，而原標準對小數(shù)點進行了四舍五入的處理。2現(xiàn)標準的MPN表比原標準的MPN表要簡化一些。原標準MPN表有64個組合，而現(xiàn)標準MPN表只有40個組合。3報告單位不同?，F(xiàn)報告單位為g/ml，而原報告單位是100g/ml。10如何報告結(jié)果？現(xiàn)國標的MPN表與原國標的MPN表的不同點：1關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題新國標的MPN表的基準問題。

1、新國標的MPN表采用了3個稀釋度，分別是十倍－百倍－千倍，加樣量是3管，每管1毫升，意味著加入樣品的量為0.333克。

2、在樣品加入量為0.333克的情況下，使用新國標MPN表，得到MPN/克的數(shù)值。11關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題新國標的MPN表的基準問關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題改變加樣量的問題。在實際操作中，因為一些原因需要改變加樣量，一般是10倍增加或者降低，同樣使用本表，得到的數(shù)值需要做10倍調(diào)整。

比如：

加樣量為3.33克（這樣的情況一般是十倍稀釋液用3管，每管10毫升，需要用雙料管。十倍百倍稀釋液，各用三管，每管1毫升）。

12關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題改變加樣量的問題。12關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題改變加樣量的問題。這樣查表得到的數(shù)值，應(yīng)該降低10倍。

加樣量為3.33克，陽性管為2－1－0，查表為15，這樣的話，結(jié)果應(yīng)該為MPN1.5/克，或者MPN15/10克，或者MPN150/100克。

13關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題改變加樣量的問題。13關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題改變加樣量的問題。再比如：

加樣量為0.0333克（這樣的情況是，不使用十倍稀釋液，而使用百倍－千倍－萬倍稀釋液，各用三管，每管1毫升）。

這樣查表得到的數(shù)值，應(yīng)該增高10倍。

加樣量為0.0333克，陽性管為2－1－0，查表為15，這樣的話，結(jié)果應(yīng)該為MPN150/克，或者MPN1500/10克，或者MPN15000/100克。14關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題改變加樣量的問題。14關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題關(guān)于和產(chǎn)品標準對應(yīng)的問題。

大家應(yīng)該注意到，這個問題其實是一個稀釋度的選擇問題。另外，這個問題也可以回答是否可以直接換算的問題。

比如：某產(chǎn)品要求MPN<30/100克。

在這種情況下，我們?nèi)绻褂眉訕恿?.333，如果全部是陰性0-0-0，得到的結(jié)果為<3/克，或者是<30/10克，或者是<300/100克。很明顯，在這種加樣量情況下是不能做出是否符合結(jié)果的判定的。15關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題關(guān)于和產(chǎn)品標準對應(yīng)的問題關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題關(guān)于和產(chǎn)品標準對應(yīng)的問題。

這樣的話，就需要增加加樣量，變成加樣量為3.33克，如果全部是陰性0-0-0，得到結(jié)果為<0.3/克，或者是<3/10克，或者是<30/100克。這樣的結(jié)果才能符合要求。

如果更精確的操作，應(yīng)該是加樣量為33.3克。這樣如果全部是陰性0-0-0，得到<3/100克，結(jié)果為2-1-0，得到MPN15/100克，也是合格產(chǎn)品。16關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題關(guān)于和產(chǎn)品標準對應(yīng)的問題關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題關(guān)于和產(chǎn)品標準對應(yīng)的問題。

從這個意義上講，稀釋度的選擇是根據(jù)產(chǎn)品要求進行的，理論上：

如果要求得到每克產(chǎn)品菌群含量，加樣量應(yīng)該是0.333克比較合適。

如果要求得到每10克產(chǎn)品菌群含量，加樣量應(yīng)該是3.33克比較合適。

如果要求得到每100克產(chǎn)品菌群含量，加樣量應(yīng)該是33.3克比較合適。17關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題關(guān)于和產(chǎn)品標準對應(yīng)的問題第二法大腸菌群平板計數(shù)法選擇30~150平板計數(shù)典型和可疑菌落36℃±1℃18h~24h挑選10個菌落接種到BGLB典型菌落為紫紅色周圍有紅色膽鹽沉淀環(huán)，0.5mm18第二法大腸菌群平板計數(shù)法選擇30~150平板計數(shù)典型和可疑第三法大腸菌群PetrifilmTM測試片法19第三法大腸菌群PetrifilmTM測試片法19結(jié)果判讀20結(jié)果判讀2021可編輯感謝下載21可編輯感謝下載GB4789.3-2010大腸菌群測定GB4789.3-2010大腸菌群測定GB4789.3-2010大腸菌群測定定義：大腸菌群：一群在36℃培養(yǎng)48h可發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏染色陰性無芽孢桿菌。該菌主要來源自人畜糞便，作為糞便污染指標評價食品的衛(wèi)生狀況，推斷食品中腸道致病菌污染的可能。23GB4789.3-2010大腸菌群測定定義：大腸菌群：一群大腸菌群的食品衛(wèi)生學(xué)意義作為糞便污染食品的指標菌，MPN值愈低則說明食品受糞便污染程度及對人體健康危害程度愈低作為腸道致病菌污染食品的指針，大腸菌群數(shù)量越多則腸道致病菌存在的可能性就越高，但兩者之間并不總是呈平行關(guān)系要求食品中大腸菌群完全不存在是不可能的，重要的是其污染程度，即菌量24大腸菌群的食品衛(wèi)生學(xué)意義作為糞便污染食品的指標菌，MPN值愈產(chǎn)氣克雷白氏菌ETEC

EIEC

陰溝腸桿菌EHEC

大腸菌群耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）大腸桿菌產(chǎn)氣克雷白氏菌大腸埃希氏菌檸檬酸桿菌O157：H7大腸桿菌是人和溫血動物腸道內(nèi)普遍存在的細菌，是糞便中的主要菌種。一般生活在人大腸中并不致病，但它侵入人體一些部位時，可引起感染。大腸菌群并非細菌學(xué)分類命名，而是衛(wèi)生細菌領(lǐng)域的用語，它不代表某一個或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細菌，這些細菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致。一般認為可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。

總大腸菌群系指一群在37℃培養(yǎng)24小時能發(fā)酵乳酸、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。耐熱大腸菌群即糞大腸菌群，作為一種衛(wèi)生指標菌，耐熱大腸菌群中很可能含有糞源微生物，因此耐熱大腸菌群的存在表明可能受到了糞便污染，可能存在大腸桿菌。但是，耐熱大腸菌群的存在并不代表對人有什么直接的危害。致病性大腸桿菌能引起食物中毒。致病性菌株能侵入腸粘膜上皮細胞，具有痢疾桿菌樣致病力。腸致病性大腸桿菌（EPEC）、腸毒素性大腸桿菌（ETEC）和腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）等。O157:H7（EHEC)腸出血性大腸桿菌，感染性腹瀉是近年來新發(fā)現(xiàn)的危害嚴重的腸道傳染病，已逐漸成為威脅人群健康的重要公共衛(wèi)生問題。大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌的從屬關(guān)系25產(chǎn)氣克雷白氏菌ETECEIEC陰溝腸桿菌EHEC大腸菌第一法大腸菌群MPN計數(shù)法初發(fā)酵：月桂基硫酸鹽蛋白胨肉湯（LST）替代了乳糖膽鹽發(fā)酵培基確證實驗：煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）替代了乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基，取消了革蘭氏染色實驗培養(yǎng)時間：由24h延長至48h單位：由MPN/100g變?yōu)?/p>

MPN/g26第一法大腸菌群MPN計數(shù)法初發(fā)酵：月桂基硫酸鹽蛋白胨肉湯（第一法大腸菌群MPN計數(shù)法未接種的LST肉湯未接種的乳糖膽鹽肉湯27第一法大腸菌群MPN計數(shù)法未接種的LST肉湯未接種的乳糖膽第一法大腸菌群MPN計數(shù)法LST肉湯乳糖膽鹽肉湯28第一法大腸菌群MPN計數(shù)法LST肉湯乳糖膽鹽肉湯7大腸菌群計數(shù)檢驗流程0將產(chǎn)氣的試管內(nèi)樣品接種到BGLB肉湯LST不產(chǎn)氣（-）小導(dǎo)管里無氣泡LST產(chǎn)氣（+）29大腸菌群計數(shù)檢驗流程0將產(chǎn)氣的試管內(nèi)樣品接種到BGLB肉湯L如何報告結(jié)果？根據(jù)經(jīng)確證后的對應(yīng)濃度陽性管數(shù)查MPN表MPN：最可能數(shù)，基于泊松分布的一種間接計數(shù)方法陽性管數(shù)MPN95%可信限0.100.010.001下限上限000<3.0-9.50013.00.159.61003.60.1718333>1100420-30如何報告結(jié)果？根據(jù)經(jīng)確證后的對應(yīng)濃度陽性管數(shù)查MPN表陽性管如何報告結(jié)果？現(xiàn)國標的MPN表與原國標的MPN表的不同點：1現(xiàn)表里的數(shù)字是有小數(shù)點的，而原標準對小數(shù)點進行了四舍五入的處理。2現(xiàn)標準的MPN表比原標準的MPN表要簡化一些。原標準MPN表有64個組合，而現(xiàn)標準MPN表只有40個組合。3報告單位不同。現(xiàn)報告單位為g/ml，而原報告單位是100g/ml。31如何報告結(jié)果？現(xiàn)國標的MPN表與原國標的MPN表的不同點：1關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題新國標的MPN表的基準問題。

1、新國標的MPN表采用了3個稀釋度，分別是十倍－百倍－千倍，加樣量是3管，每管1毫升，意味著加入樣品的量為0.333克。

2、在樣品加入量為0.333克的情況下，使用新國標MPN表，得到MPN/克的數(shù)值。32關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題新國標的MPN表的基準問關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題改變加樣量的問題。在實際操作中，因為一些原因需要改變加樣量，一般是10倍增加或者降低，同樣使用本表，得到的數(shù)值需要做10倍調(diào)整。

比如：

加樣量為3.33克（這樣的情況一般是十倍稀釋液用3管，每管10毫升，需要用雙料管。十倍百倍稀釋液，各用三管，每管1毫升）。

33關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題改變加樣量的問題。12關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題改變加樣量的問題。這樣查表得到的數(shù)值，應(yīng)該降低10倍。

加樣量為3.33克，陽性管為2－1－0，查表為15，這樣的話，結(jié)果應(yīng)該為MPN1.5/克，或者MPN15/10克，或者MPN150/100克。

34關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題改變加樣量的問題。13關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題改變加樣量的問題。再比如：

加樣量為0.0333克（這樣的情況是，不使用十倍稀釋液，而使用百倍－千倍－萬倍稀釋液，各用三管，每管1毫升）。

這樣查表得到的數(shù)值，應(yīng)該增高10倍。

加樣量為0.0333克，陽性管為2－1－0，查表為15，這樣的話，結(jié)果應(yīng)該為MPN150/克，或者MPN1500/10克，或者MPN15000/100克。35關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題改變加樣量的問題。14關(guān)于新國標大腸菌群MPN表的理解問題關(guān)于和產(chǎn)品標準對應(yīng)的問題。

大家應(yīng)該注意到，這個問題其實是一個稀釋度的選擇問題。另外，這個問題也可以回答是否可以直接換算的問題。

比如：某產(chǎn)品要求MPN<30/100克。

在這種情況下，我們?nèi)绻褂眉訕恿?.333，如果全部是陰性0-0-0，得到的結(jié)果為<3/克，或者是<30/10克，或者是<300/100克。很明顯，在這種加樣量情況下是不能做出