食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)產(chǎn)氣莢膜梭菌課件

食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)

產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)

Introduction產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)又稱魏氏梭菌(C．welchii)，為厭氧芽孢桿菌屬成員。廣泛存在于自然界的水源、土壤及人和動物腸道之中。條件致病菌，主要引起人的食物中毒、氣性壞疽和動物猝死癥等疾病。毒性作用較肉毒梭菌和破傷風(fēng)梭菌要弱，但產(chǎn)生毒素種類繁多。Contents產(chǎn)氣莢膜梭菌的生物學(xué)性狀產(chǎn)氣莢膜梭菌的致病性產(chǎn)氣莢膜梭菌的流行病學(xué)產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗(yàn)產(chǎn)氣莢膜梭菌的快速檢測方法產(chǎn)氣莢膜梭菌的污染及控制產(chǎn)氣莢膜梭菌純培養(yǎng)的鏡下形態(tài)電鏡下的產(chǎn)氣莢膜梭菌（C.perfringens）產(chǎn)氣莢膜梭菌的生物學(xué)性狀2.培養(yǎng)特性生長活躍，代謝迅速。血瓊脂平板：雙層溶血環(huán)（靶形溶血）內(nèi)環(huán)完全溶血外環(huán)不完全溶血含鐵牛奶培養(yǎng)基：“洶涌發(fā)酵”（stormyfermentation）皰肉培養(yǎng)基中的產(chǎn)氣莢膜梭菌血瓊脂平板上的菌落形態(tài)含鐵牛奶中的產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)氣莢膜梭菌的生物學(xué)性狀3.生化特性能發(fā)酵多種糖類，如葡萄糖、麥芽糖、蔗糖和乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣；不發(fā)酵甘露糖或水楊酸。能液化明膠，產(chǎn)生硫化氫，不能消化已凝固的蛋白質(zhì)和血清。返回所致疾病1.氣性壞疽致病條件與破傷風(fēng)梭菌相同潛伏期短，發(fā)病迅速，病情險(xiǎn)惡，死亡率高。以組織壞死、氣腫和全身中毒為特征。2.食物中毒食入被大量細(xì)菌污染的食物（肉類）臨床表現(xiàn)：劇烈腹絞痛、腹瀉；可自愈3.壞死性腸炎返回四、產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗(yàn)設(shè)備和材料冰箱：0℃-4℃。恒溫培養(yǎng)箱：36℃士1℃恒溫水浴鍋：46℃士1℃顯微鏡：10×～100×均質(zhì)器或滅菌乳缽厭氧培養(yǎng)裝置：常溫催化除氧式或堿性焦性沒石子酸除氧式滅菌吸管：1mL（具0.01mL刻度），10mL（具0.1mL刻度）滅菌試管：16mmX160mm滅菌平皿：直徑90mm滅菌錐形瓶：500mL產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗(yàn)活菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)檢驗(yàn)程序產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗(yàn)確證試驗(yàn)檢驗(yàn)程序確證實(shí)驗(yàn)1.革蘭氏染色鏡檢：產(chǎn)氣莢膜梭菌為革蘭氏陽性粗大桿菌，其耐熱株可能形成卵形芽孢，位于菌體中央或近末端，其寬度一般不大于菌體。2.動力-硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)用接種環(huán)（針）穿刺接種動力一硝酸鹽培養(yǎng)基，于36℃士1℃培養(yǎng)24h，觀察接種線的生長情況，判斷有無動力。然后，滴加甲萘胺液和對氨基苯磺酸液各0.5mL，觀察硝酸鹽是否被還原。產(chǎn)氣莢膜梭菌無動力，能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。確證實(shí)驗(yàn)3.取生長旺盛的FT培養(yǎng)液1mL接種于含鐵牛乳培養(yǎng)基，46℃水浴中培養(yǎng)2h，觀察有無“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象，5h內(nèi)不發(fā)酵者為陰性。產(chǎn)氣莢膜梭菌發(fā)酵乳糖，凝固酪蛋白并大量產(chǎn)氣，呈“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象，但培養(yǎng)基不變黑。4.用接種環(huán)取FT培養(yǎng)液點(diǎn)種于卵黃瓊脂平板（每張平板至少可接種10點(diǎn)），于36℃士1℃厭氧培養(yǎng)24h，觀察接種點(diǎn)的變化。產(chǎn)氣英膜梭菌產(chǎn)生卵磷脂酶，分解卵黃中的卵磷脂，接種點(diǎn)的底部及周圍形成乳白色的混濁帶。產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗(yàn)菌數(shù)計(jì)算根據(jù)黑色菌落的計(jì)數(shù)和確證試驗(yàn)的結(jié)果，計(jì)算每克（毫升）食品檢樣的含菌數(shù)。例如：10-4稀釋液的平板長有黑色菌落100個(gè)，而供做確證試驗(yàn)的10個(gè)菌落中有7個(gè)被確證為產(chǎn)氣莢膜梭菌，則每克（毫升）食品檢樣所含產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)為：100X0.7X104＝7X105返回六、產(chǎn)氣莢膜梭菌的污染及控制掌握產(chǎn)氣莢膜梭菌血清型在我國地