steponeplus型pcr儀操作規(guī)程和pcr儀簡易設(shè)置指引

StepOnePlus型PCR^操作規(guī)程StepOnePlus上機(jī)可由兩種方式來進(jìn)行：由StepOneSoftwareQuickStart進(jìn)行上機(jī)或由StepOnePlus機(jī)器面板直接觸控上機(jī)。由StepOneSoftwareQuickStart進(jìn)行上機(jī)：開啟StepOneSoftware進(jìn)入主畫面后點(diǎn)選QuickStart窗口進(jìn)行快速上機(jī)設(shè)定。進(jìn)入ExperimentProperties后輸入：ExperimentName及檔案儲存位置；選擇ExperimentType選擇使用熒光系統(tǒng)；選擇RampSpee選擇實(shí)驗(yàn)樣品種類；點(diǎn)選RunMethod確定PCR反應(yīng)條件是否需要修改后，按下STARTRUN如欲使用StepOnePlus機(jī)器上VeriFlexBlock的功能，請由左方Setup功能列上點(diǎn)PlateStepup窗口，在“AssignTargetsandSamples”窗口下，勾選EnableVeriFlexBlock選項(xiàng)，此時Block即被分成六個區(qū)塊。接著點(diǎn)選RunMethod,在runprogram上點(diǎn)一下欲調(diào)整的溫度步驟，選擇Setdifferenttemperaturesforoneormorezones”并設(shè)定每個區(qū)塊的溫度，請注意兩相鄰區(qū)塊溫度差異不可以超過5度，第一和第六區(qū)塊最多可差異25度。按下StartRunNow進(jìn)彳Tdata收集，反應(yīng)結(jié)束后，則會回到“MainMenu'畫面，觸控CollectResult將data存出。由StepOnePlus機(jī)器面板直接觸控上機(jī)：開啟電源后，進(jìn)入主畫面，由觸控式屏幕來進(jìn)行StepOnePlus的設(shè)定。按下TaqMancDNAStandard）進(jìn)入PCRThermalCycleProgram,可利用下面工具列再重新編輯反應(yīng)條件，如果條件相同則直接按下Save。如欲使用StepOnePlus機(jī)型上VeriFlexBlock的功能，請點(diǎn)選Options下的VeriFlexstep并設(shè)定每個區(qū)塊溫度，請注意兩相鄰區(qū)塊溫度差異不可以超過5度以上，第一和第六區(qū)塊最多可差異25度。觸控需要更改之處則會跳出觸控式鍵盤，重新給予實(shí)驗(yàn)名稱、選擇檔案儲存的Folder、并更改實(shí)際反應(yīng)樣品體積，按下Save&Exit；然后在BrowseLastAccessedExperiments下選擇剛設(shè)定好的實(shí)驗(yàn)，按下StartRun。此時跳出警告標(biāo)示，提醒之前的檔案是否存出，如果已經(jīng)將前一個檔案存出的話，則可直接觸控Overwrite進(jìn)行Data收集；如未儲存的話則觸控Collect將Data存出。確定反應(yīng)體積及實(shí)驗(yàn)名稱無誤后，觸控StartRunNow，則會進(jìn)入PCRProgram實(shí)時顯示畫面。反應(yīng)結(jié)束后，則會回到“MainMenu”畫面，觸控CollectResults將data存出后，再回到StepOneSoftware進(jìn)行實(shí)驗(yàn)盤建立及分析。清潔與維護(hù)保養(yǎng)：外殼要用柔軟的布配合溫和的清潔液清洗，不要用酒精或其他洗滌用品；加熱孔可以用酒精棉球擦洗，但在清洗前應(yīng)注意加熱板的溫度需降至室溫。注意保持熱蓋和Block的清潔，特別注意不能將帶有熒光染料的試劑濺灑在熱蓋或者Block里，否則需用蘸有70%酒精（純酒精稀釋在蒸餾水里）的干凈棉球擦洗，直到不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。注意事項(xiàng)：為避免觸電事故，儀器的輸入電源線必須可靠接地。操作人員不得擅自打開儀器，元件的更換或機(jī)內(nèi)調(diào)節(jié)須由持證的專業(yè)人員進(jìn)行。在連接交流電源前，需保證電源電壓與儀器要求電壓一致220V（允許偏差土10%），并確保電源插座的額定負(fù)載不小于儀器要求。StepOne定量PCR^簡易設(shè)置指南啟動電腦，打開定量PCR0Z電源開關(guān)：雙擊桌面“StepOneSoftware”圖標(biāo)，出現(xiàn)Login登錄界面，點(diǎn)擊“OK,打開軟件。LoginTologintothesoftware,either■Cfick"LoginasGuesftologinanonymously,or，Selectmexistinguseriromthedrop-downlistcrenteranewusernameinthe1ield,Thenclick-OK"UserNameLogin曜Gu&st起始界面如圖所示，點(diǎn)擊紅色橢圓的三角圖標(biāo)，展開軟件功能按鈕UserNameLogin曜Gu&st起始界面如圖所示，點(diǎn)擊紅色橢圓的三角圖標(biāo)，展開軟件功能按鈕點(diǎn)擊左側(cè)“SetUp”功能選項(xiàng)中的“AdvancedSetup”高級設(shè)置向?qū)tL'kEK?4-r.IMmitL'kEK?4-r.IMmVtJi?■)IB?IIMhE.iM1ml|i在打開的設(shè)置界面，左側(cè)為導(dǎo)航樹，選擇不同的功能選項(xiàng)，右側(cè)顯現(xiàn)為不同的設(shè)置功能。默認(rèn)條件下，顯示為“ExperimentProperties”實(shí)驗(yàn)屬性。右側(cè)界面，帶有紅色*號位置需要輸入或者通過鼠標(biāo)進(jìn)行選擇。不帶*號位置為選填，可以保持空白。在途中位置輸入實(shí)驗(yàn)名稱，該名稱根據(jù)需要進(jìn)行填寫。

選擇儀器類型、實(shí)驗(yàn)類型、熒光標(biāo)記方法以及反應(yīng)速度。左側(cè)導(dǎo)航樹，選擇"PlateSetup”設(shè)置選項(xiàng)。右側(cè)“De巾neTargets”選項(xiàng)下“TargetName處設(shè)置檢測基因的名稱，如FluA,Reporter下拉菜單選擇“FAM,Quencher下拉菜單選擇“None”

點(diǎn)擊“AddNewTarget”，并按照第7步所述進(jìn)行設(shè)置。根據(jù)需要添加所需基因,如SWH1SWFluAI和RNP在“DefineSamples”填寫檢測樣本的名稱，如果需要多個樣本，通過“AddNewSample”添加多個樣本。

矍“門r時一1也.|八"d?fJ.齊1矍“門r時一1也.|八"d?fJ.齊1,J爐Mla^-Or!■IJl-■?■■■■?■',>,■■h-I.』.「二仲~h，4Ii*.buii.41.“xVvth心S招cddE0Rwgml'jr-qkdrrt*“財(cái)?shù)募幢O(jiān)[hMifW兀鼻第知事旬與?1||||(1^]''I■p',.I-"-i-j相?MH^ueBHni.享加學(xué)年rV#2弋S+&rh>T*■)■>』￡:“!vqd:iMSnd<xUfUlM鼠標(biāo)點(diǎn)擊“AssignTargetsandSamples”切換設(shè)置界面。鼠標(biāo)滑倒圖中橢圓所處位置，變化為雙向箭頭，通過拖動鼠標(biāo)，可以改變左右兩側(cè)窗口大??；。%心邛,火寸修點(diǎn)修千擷抓孑出■修…Vfe^!電id山皿1<]-r^7；r-tetle]』(<|〉.-?;uri'iMri>?=5晝匕，；。%心邛,火寸修點(diǎn)修千擷抓孑出■修…Vfe^!電id山皿1<]-r^7；r-tetle]』(<|〉.-?;uri'iMri>?=5晝匕，-txpwllnwiii!MotiU4CI七中ertnan*方用HI/他Hm9ienlSIAiqMnnRH日kmwM后方也口切丁?￡/1?電爐史121toff￥BJIUIiWlii才勺，E*而，J觸ul?k?￡口)M:“tfinXR-舊FH?斤JUERSn/值*1種HmiTE"B'pE*"口不口《?一Iv閨叱〕ig#utai*Brtinf：'flit^71mi|e9rtpiiiirniiiFi,s4nrinur,-mVivrzlHnIipifIii4i|nrTvrt*inBiifp'nlvT\hEriMiiivgahDfim—FT*Mh|bAhCMM*■*?*WwchRang爾的FRfll鼠標(biāo)選擇樣品放置的位置，如B4,鼠標(biāo)勾選樣品名稱及所要檢測的基因。根據(jù)樣品孔的數(shù)量，依次進(jìn)行設(shè)置。|

*kMDEfeH工ejhm—iil—hllMvAMNTD-nhvdEM+?!--l>NH<*l>>l1|iMi|◎Am?廣11-".-*kMDEfeH工ejhm—iil—hllMvAMNTD-nhvdEM+?!--l>NH<*l>>l1|iMi|◎Am?廣11-".-r?.!iiiul..IAMlfwTBfQMC3nT3vip*M由，■r?uEi*1iMrTF*g1支『，>€18￡，—'爐.p,士聲?i。liiiBvttenvTflM>?iirdfWWMfiMWhMj^awq■工NIKl'V|LM|^M(iMllBitlhM,4tn1V-lM4l4Pintf11WnHMlAMViVFce^upirtiFw?:wtWf.EilfciWii.yWip!*jeimtinr-??,iwik?iwwp■由EKmp5ttwi*輛e州a星Ls$&jf]，他典■晶'I』但]i+,-iV*-lr￥,rh?*-k”i?“尸.mm-u*surdi-aQ收r%diN=LMg4fu而『￡鼠標(biāo)拖動橢圓位置，向下拖動。在“Selectthedyetouseasthepassivereference”的下拉菜單處選擇“None_-?■_"I■T--f■:i?F3rnaIlirMl---JS?Xft：J.點(diǎn)擊“RunMethod”設(shè)置反應(yīng)條件：在“ReactionVolumePerWell”處輸入反應(yīng)體積，如20ul或者25ul。點(diǎn)擊溫度或者時間，通過輸入數(shù)值可以更改溫度的大小及時間的長短。在

nNumberofCycles可以輸入循環(huán)數(shù)。SwfIwai^-y211■>11it-lrife"Rrf&，?k，?Jni?*TI澗■in?u尸hd￡岬-I澗■in?u尸hd￡岬-，liI!?CPIrtqMar：**HcjgtfinirsMullahLiftRunT.Anafyifit￥?*riKI?.『事咤SSFT-tjf!jCMJIVF.青4I!--"Ulll4dO根據(jù)試劑盒的說明書，改變反應(yīng)條件。在軟件上，Stage指溫度階段，有HoldingStage和CyclingStage兩種類型。HoldingStage只有一個Step（溫度步驟），CyclingStage可以有幾個Step（溫度步驟），并且多次循環(huán)該溫度參數(shù)。點(diǎn)擊“AddStage”可以選擇添加Stage及類型。二?5（電叫119rsiBuEiwiu'F

■JjMA^M4MfiMpmian4lRllMlHiHmlL,Inn?H4tunwil事f.*■熟在CyclingStage可以添加Step（溫度步驟）MahHHhnE“住Lb!<*|titiqpuimirtfl?DC^120口日㈣ai店Il/M…科凋MahHHhnE“住Lb!<*|titiqpuimirtfl?DC^120口日㈣ai店Il/M…科凋a*」uiHI:■cnrBTtrilnu儀???!!"?UI?-j選中某個溫度步驟，如黃色區(qū)域所指的60c位置。點(diǎn)擊“AddStep"，選擇Before（之前）或者After（之后）