第三章方法選擇與檢測(cè)系統(tǒng)性能評(píng)價(jià)2013管理

第三章方法選擇與檢測(cè)系統(tǒng)性能評(píng)價(jià)溫州醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)學(xué)院生化教研室溫醫(yī)附屬一院實(shí)驗(yàn)診斷中心教材第29頁(yè)袁謙

方法學(xué)評(píng)價(jià)是通過(guò)實(shí)驗(yàn)途徑來(lái)測(cè)定分析方法的性能指標(biāo)，并評(píng)價(jià)其是否可接受。

方法學(xué)評(píng)價(jià)的目的在于評(píng)估該分析方法在穩(wěn)定狀態(tài)下具有的誤差，并對(duì)這些誤差做出判斷，來(lái)決定該分析方法是否可以用于常規(guī)測(cè)定。

方法學(xué)評(píng)價(jià)內(nèi)容，通常應(yīng)包括：精密度、準(zhǔn)確度、檢測(cè)限、生物參考區(qū)間和可報(bào)告范圍等。第一節(jié)

實(shí)驗(yàn)方法的選擇

一、實(shí)驗(yàn)方法的分級(jí)

IFCC根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確度與精密度的不同可以分為三級(jí):

決定性方法、參考方法、常規(guī)方法。（一）決定性方法（definitivemethod）

準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過(guò)詳細(xì)的研究，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因，測(cè)定結(jié)果與“真值”最接近。用于發(fā)展及評(píng)價(jià)參考方法和一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品。此類實(shí)驗(yàn)室往往存在于發(fā)達(dá)國(guó)家。特點(diǎn)

①準(zhǔn)確度最高，相對(duì)誤差最小，測(cè)量結(jié)果為“確定值”。②系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)詳細(xì)研究沒(méi)有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生系統(tǒng)誤差的原因。③常為絕對(duì)測(cè)量法（結(jié)果是絕對(duì)值）。在化學(xué)分析中，重量法和庫(kù)侖法屬絕對(duì)測(cè)量法，同位素稀釋-質(zhì)譜分析法（ID-MS）或中子活化法也可進(jìn)行絕對(duì)測(cè)量法。④需精密儀器、高純度試劑、訓(xùn)練有素的技術(shù)人員以及相應(yīng)的環(huán)境。（二）參考方法（referencemethod）是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)充分證實(shí)的分析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差與重復(fù)測(cè)定的隨機(jī)誤差相比可以忽略不計(jì)，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異性、線性及較寬的分析范圍。用于評(píng)價(jià)常規(guī)方法和試劑盒，為二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控物定值。這類方法在條件許可的實(shí)驗(yàn)室（參考實(shí)驗(yàn)室）中使用。（三）常規(guī)方法（routinemethod）

性能指標(biāo)符合臨床或其他常規(guī)目的需要，有足夠的精密度、準(zhǔn)確度、特異性和適當(dāng)?shù)姆治龇秶?，?jiǎn)便經(jīng)濟(jì)實(shí)用。常規(guī)方法經(jīng)充分評(píng)價(jià)，經(jīng)學(xué)術(shù)組織認(rèn)可，可以作為推薦方法。如IFCC推薦方法、衛(wèi)生部臨檢中心推薦方法等。臨床化學(xué)決定性方法、參考方法、常規(guī)方法項(xiàng)目決定性方法參考方法常規(guī)方法CaID-MS原子吸收分光光度法 鄰甲酚酞絡(luò)合酮法、MTB法MgID-MS原子吸收分光光度法MTB法KID-MS火焰光度法 ISE法PID-MS 米吐?tīng)栔苯臃∟a重量分析法.中子活化法火焰光度法ISE法Cl電量滴定法.中子活化法電量滴定法ISE法、硫氰酸汞比色法CrID-MS離子交換層析法 苦味酸比色法UreaID-MS尿素酶法 二乙酰一肟法、脲酶波氏法UAID-MS尿酸酶法（紫外法）磷鎢酸比色法GluID-MS己糖激酶法 葡萄糖氧化酶法TCID-MSAbell-Kendel法膽固醇酶法（ID-MS：同位素稀釋－質(zhì)譜法）舉例二、參考物的分級(jí)

參考物，也稱標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，是一類具有一種或多種成分、含量均勻確定的物質(zhì)。參考物用以校準(zhǔn)儀器設(shè)備、評(píng)價(jià)測(cè)量方法或給其它物質(zhì)賦值。參考物的結(jié)果含量一般表示為：標(biāo)準(zhǔn)值±總不確定度1.一級(jí)參考物（原級(jí)參考物）

是一種穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，它的數(shù)值已由決定性方法確定，或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定，所含雜質(zhì)也已經(jīng)定量，且有證書。用于校正決定性方法，評(píng)價(jià)及校正參考方法以及為“二級(jí)參考物”定值。一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品的特點(diǎn)

（1）是已經(jīng)確定的穩(wěn)定而均一的物質(zhì)。（2）所含雜質(zhì)已被定性或定量地標(biāo)明。（3）其數(shù)值由決定性方法確定，或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定。（4）有公認(rèn)機(jī)構(gòu)頒發(fā)的證書。

SRM-927（70g/L牛血清白蛋白溶液）

為測(cè)定蛋白的一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品其技術(shù)指標(biāo)有：①經(jīng)醋纖電泳及免疫電泳證實(shí)，雜蛋白含量<2%，經(jīng)PAGE證實(shí)，白蛋白單體含量>95%。②糖含量<0.005%，脂質(zhì)<0.5%，游離氨基酸和非多肽成分<0.05%，灰分<0.1%，總金屬離子<0.02%。③吸光度測(cè)定：A405nm<

0.2（用于檢測(cè)羥基血紅素），A500nm

和A600nm

均<

0.05，在450-600nm之間無(wú)明顯吸收峰，Amax（280nm）/Amin（255nm）大于2。經(jīng)以上技術(shù)指標(biāo)鑒定后，用嚴(yán)格的干重稱量法作為蛋白一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品的定量方法。

舉例2.二級(jí)參考物（次級(jí)參考物）這類標(biāo)準(zhǔn)品可由實(shí)驗(yàn)室自已配制或?yàn)樯唐?，它的值必須用一?jí)標(biāo)準(zhǔn)品和參考方法并由訓(xùn)練有素的，能熟練掌握參考方法的操作者確定。主要用于常規(guī)方法的校準(zhǔn)或?yàn)橘|(zhì)控品定值和常規(guī)測(cè)定的結(jié)果計(jì)算。3.校準(zhǔn)物（校準(zhǔn)品）

用于常規(guī)分析儀器校準(zhǔn)并具有可溯源性的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

常規(guī)測(cè)定用校準(zhǔn)品：可以不是二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品。如一些知名公司提供的校準(zhǔn)液或稱定標(biāo)液。但必須具有可溯源性。4.控制物（質(zhì)控品）用于常規(guī)質(zhì)量控制，用來(lái)控制患者標(biāo)本的測(cè)定誤差。質(zhì)控物不能用于儀器的校準(zhǔn)。決定性方法用途：評(píng)價(jià)參考方法及一級(jí)參考物一級(jí)參考物發(fā)展及評(píng)價(jià)參考方法，校準(zhǔn)決定性方法及參考方法，為二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品定值參考方法為二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品定值，評(píng)價(jià)常規(guī)方法二級(jí)參考物、校準(zhǔn)品常規(guī)方法的標(biāo)準(zhǔn)品，為質(zhì)控品定值常規(guī)方法臨床實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)定量分析

質(zhì)控品質(zhì)量保證評(píng)價(jià)校準(zhǔn)校準(zhǔn)評(píng)價(jià)定值評(píng)價(jià)校準(zhǔn)定值各級(jí)分析方法與參考物的互相關(guān)系測(cè)定結(jié)果測(cè)定控制測(cè)定三、常規(guī)方法選擇的原則

（一）常規(guī)方法的要求國(guó)際臨床化學(xué)協(xié)會(huì)（IFCC）提出：常規(guī)方法應(yīng)具有適用性和可靠性兩方面的要求。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)條件（儀器設(shè)備、技術(shù)力量、實(shí)驗(yàn)成本等因素），選擇常規(guī)分析方法和簡(jiǎn)便的參考方法。

1.適用性

（1）微量快速適用于急診和成批分析。（2）方法簡(jiǎn)便無(wú)需特殊培訓(xùn)，試劑種類少，易于自動(dòng)化分析。（3）安全可靠試劑無(wú)毒害，保存簡(jiǎn)便。（4）成本低廉試劑、儀器和輔助設(shè)備成本。（二）可靠性

具有較高的精密度、準(zhǔn)確度和特異性，以及較大的檢測(cè)范圍。精密度：不精密度一般應(yīng)小于3%。準(zhǔn)確度：不準(zhǔn)確度一般應(yīng)小于5%。特異性：盡可能只對(duì)待測(cè)物特異。檢測(cè)范圍：能適合正常和大多數(shù)病理標(biāo)本。

四、常規(guī)方法的選擇步驟

臨床提出要求廣泛查閱文獻(xiàn)確定候選方法進(jìn)行評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)…

五.定量測(cè)定的方法學(xué)比對(duì)ISO15189規(guī)定：當(dāng)同樣的檢驗(yàn)應(yīng)用于不同的程序或設(shè)備，或在不同地點(diǎn)進(jìn)行，應(yīng)有確切機(jī)制以驗(yàn)證在整個(gè)臨床適用的區(qū)域內(nèi)檢驗(yàn)結(jié)果的可比性。

（簡(jiǎn)單地說(shuō)：一個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目在不同儀器、方法、地點(diǎn)檢測(cè)，應(yīng)該得到相同的結(jié)果。）比對(duì)方案：CLSIEP9-A2文件“用患者標(biāo)本進(jìn)行方法學(xué)比較和偏倚評(píng)估批準(zhǔn)指南”

（CLSI美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究院）進(jìn)行EP9-A2的準(zhǔn)備和步驟：1.熟悉檢測(cè)系統(tǒng)，熟悉評(píng)價(jià)方案。2.對(duì)整個(gè)過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量控制。3.至少應(yīng)有40份患者新鮮標(biāo)本，這些標(biāo)本應(yīng)涵蓋線性范圍，不要收集對(duì)實(shí)驗(yàn)有干擾的標(biāo)本。4.按標(biāo)本號(hào)1、2、3、4、5、6、7、8測(cè)定一次，然后8、7、6、5、4、3、2、1測(cè)定一次，不同檢測(cè)系統(tǒng)同時(shí)進(jìn)行。5.剔除離群值，繪制散點(diǎn)圖，建立線性回歸方程。6.判斷是否可接受。六.定性試驗(yàn)的方法學(xué)評(píng)價(jià)（一）評(píng)價(jià)準(zhǔn)備熟悉實(shí)驗(yàn)方法，選擇合適的試劑，使用質(zhì)量控制，使用陰陽(yáng)性對(duì)照…（二）定性試驗(yàn)重復(fù)性評(píng)價(jià)

1.確定方法的臨界值（cut-off），是判定陰性陽(yáng)性的分界點(diǎn)。

2.準(zhǔn)備臨界值±20%濃度標(biāo)本。

3.分別測(cè)定以上標(biāo)本20次，記錄陰性陽(yáng)性結(jié)果。

4.測(cè)定結(jié)果陰性和陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)該各占一半。

5.結(jié)論：測(cè)定結(jié)果陰性和陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)分別大于95%了解（三）定性試驗(yàn)方法學(xué)比較樣本種類和數(shù)量患者新鮮標(biāo)本，穩(wěn)定。陰性和陽(yáng)性標(biāo)本應(yīng)分別在50例以上。2.實(shí)驗(yàn)過(guò)程在常規(guī)條件下，10-20天完成。3.以符合率進(jìn)行結(jié)果描述。了解

量值溯源的目的，是讓常規(guī)標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果得到和參考系列相同的測(cè)量值。參考方法常規(guī)方法患者新鮮標(biāo)本參考值結(jié)果常規(guī)測(cè)定結(jié)果結(jié)果一致一級(jí)參考校準(zhǔn)測(cè)定得到第二節(jié)量值溯源、誤差及不確定度掌握幾個(gè)基本概念二級(jí)參考校準(zhǔn)一、量值溯源的概念量值的溯源性

通過(guò)一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測(cè)量結(jié)果或標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)，通常是與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來(lái)的特性。二、參考物的量值溯源了解大小三、誤差的分類和表示系統(tǒng)誤差是指測(cè)定值與“真值”的符合程度。以變異系數(shù)來(lái)表示特點(diǎn)：?jiǎn)蜗蛐?，沒(méi)有隨機(jī)性，有一定的大小和方向；找到原因，采取措施后可以基本消除。

分恒定系統(tǒng)誤差和比例系統(tǒng)誤差。2.隨機(jī)誤差是多次測(cè)定結(jié)果之間的符合程度。以偏倚表示特點(diǎn)：誤差沒(méi)有一定的大小和方向，呈正態(tài)分布，不可預(yù)測(cè)，不可避免，但可控制在一定范圍內(nèi)；重復(fù)測(cè)定的均值可減少隨機(jī)誤差。測(cè)定值、樣本均值、真值

和

系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差的關(guān)系真值樣本均值測(cè)定值SERE比例系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差比較方法結(jié)果試驗(yàn)方法結(jié)果系統(tǒng)誤差類型示意圖理想情況四、測(cè)量不確定度基本概念表征合理地賦予被測(cè)量之值的分散性，與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)。（理解：測(cè)量不確定度是指由于測(cè)量誤差的存在，而對(duì)被測(cè)量值不能肯定的程度，它表征被測(cè)量的真值所處的測(cè)量范圍。）測(cè)量不確定度計(jì)算

A類不確定度估算=測(cè)量值標(biāo)準(zhǔn)偏差s×因子

B類不確定度估算=儀器誤差總不確定度的合成：“平方和開(kāi)平方”第三節(jié)檢測(cè)系統(tǒng)性能評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)的意義方法學(xué)評(píng)價(jià)，是通過(guò)實(shí)驗(yàn)途徑測(cè)定分析方法的技術(shù)性能，并評(píng)價(jià)分析性能是否被臨床所接受。評(píng)價(jià)的基本步驟

1.確定方法的質(zhì)量目標(biāo)，總允許誤差

2.選定評(píng)價(jià)指標(biāo)，重復(fù)、回收、干擾、比較…3.收集評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

4.判斷方法的臨床可接收性什么是檢測(cè)系統(tǒng)？完成一個(gè)項(xiàng)目檢測(cè)涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、測(cè)定方法、質(zhì)量控制、保養(yǎng)計(jì)劃等的（規(guī)定）組合。貝克曼LX20生化儀羅氏的檢測(cè)試劑盒貝克曼的校準(zhǔn)品葡萄糖氧化酶法如：葡萄糖測(cè)定貝克曼LX20生化儀貝克曼的檢測(cè)試劑盒貝克曼的校準(zhǔn)品葡萄糖氧化酶法兩個(gè)不同的檢測(cè)系統(tǒng)一、檢測(cè)系統(tǒng)的概念及分類完整的檢測(cè)系統(tǒng)自建的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行性能核實(shí)進(jìn)行詳盡的評(píng)估二、檢測(cè)系統(tǒng)的評(píng)估方法一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)從廠家的實(shí)驗(yàn)室搬運(yùn)到我們的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室，諸如環(huán)境（供電、供水、溫度、濕度等）和操作人員等的改變，其性能是否還能保持和說(shuō)明書上的描述一致？……因此需要評(píng)估（一）評(píng)估內(nèi)容與檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量相關(guān)的：精密度、準(zhǔn)確度、可報(bào)告范圍等。（二）評(píng)估方法重點(diǎn)是檢測(cè)系統(tǒng)性能評(píng)價(jià)（方法學(xué)評(píng)價(jià)）

性能評(píng)價(jià)參考文件美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究院（CLSI）公布一系列與方法學(xué)評(píng)價(jià)相關(guān)的文件，如：

EP5-A 精密度評(píng)價(jià)

EP6-A 線性評(píng)價(jià)

EP7-A 干擾實(shí)驗(yàn)

EP9-A2 方法比對(duì)。。。。。。必要時(shí)可以利用上述EP文件對(duì)我們的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的評(píng)估。三、精密度評(píng)價(jià)–

重復(fù)性試驗(yàn)

精密度是指同一樣本在規(guī)定條件下多次重復(fù)測(cè)得的一系列單次值之間的接近程度，是表示測(cè)定結(jié)果中隨機(jī)誤差大小的指標(biāo)。精密度一般以變異系數(shù)CV%表示重復(fù)性試驗(yàn)是評(píng)價(jià)精密度的常用方法。2.基本方法

對(duì)同一材料分成數(shù)份試驗(yàn)樣品，進(jìn)行多次分析測(cè)定，一般為20次。批內(nèi)重復(fù)性：20次測(cè)定，計(jì)算x、s、cv%。批間重復(fù)性：一天內(nèi)分?jǐn)?shù)批重復(fù)20次測(cè)定，計(jì)算x、s、cv%。一般分5批每批作4次測(cè)定。cv%比批內(nèi)大。日間重復(fù)性：每天1次，重復(fù)20天，計(jì)算x、s、cv。其cv反映實(shí)際工作情況。cv比批間大。－－－3.試驗(yàn)要點(diǎn)（1）

分析樣品性質(zhì)和分析物濃度分析樣品：校準(zhǔn)品、質(zhì)控血清、病人標(biāo)本都可分析物濃度：一般二個(gè)濃度參考值或在醫(yī)學(xué)決定水平附近（2）

試驗(yàn)條件盡量在相同條件下進(jìn)行性能可接受判斷（1）批內(nèi)或日內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)小于等于CLIA88規(guī)定的總允許誤差的1/4（2）日間的標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)小于等于CLIA88規(guī)定的總允許誤差的1/3醫(yī)學(xué)決定水平，就是臨床上按照不同病情給予不同處理的指標(biāo)閾值。EP5-A精密度評(píng)價(jià)方案介紹1.實(shí)驗(yàn)標(biāo)本每天測(cè)定2次（2次測(cè)定間隔不得少于2小時(shí)），每次測(cè)定均作雙份，共測(cè)定20天，收集80個(gè)數(shù)據(jù)（見(jiàn)表3-5）。2.統(tǒng)計(jì)處理

每雙份的差值（批內(nèi)差）反映了批內(nèi)精密度每天2次均值的差值反映了天內(nèi)的精密度

20天有20個(gè)批間差，減去批內(nèi)差，反映了批間精密度

…（見(jiàn)p46）四、準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)（一）準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)指標(biāo)有：方法比較試驗(yàn)、回收試驗(yàn)和干擾試驗(yàn)。（二）方法比較試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方案：EP9-A21.基本方法：用兩種方法同時(shí)對(duì)一組新鮮標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)測(cè)定結(jié)果的差異，得到恒定或比例系統(tǒng)誤差。

2.實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：（1）比較方法的選擇：盡可能選擇性能高的方法，如參考方法。（2）實(shí)驗(yàn)標(biāo)本與測(cè)定（見(jiàn)定量檢測(cè)的方法學(xué)比對(duì)）標(biāo)本例數(shù)、濃度分布、測(cè)定時(shí)間、測(cè)定順序…比例系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差比較方法結(jié)果試驗(yàn)方法結(jié)果3.結(jié)果分析理想情況4.臨床可接受判斷：SE<?TEa為可接受水平。（三）回收試驗(yàn)

概念在常規(guī)分析樣品中加入純分析物，測(cè)定值是否與理論值相同的試驗(yàn)。目的是測(cè)定比例系統(tǒng)誤差，以衡量候選方法的準(zhǔn)確度。1.

基本步驟

將被分析的純品標(biāo)準(zhǔn)液加入樣品中，成為分析樣品。原樣品加入同量的無(wú)分析物的溶液作基礎(chǔ)樣品。然后用實(shí)驗(yàn)方法分析，兩者測(cè)定結(jié)果的差值為回收量。32.回收率計(jì)算

加入濃度=標(biāo)準(zhǔn)液濃度回收濃度=分析樣品測(cè)得濃度–基礎(chǔ)樣品測(cè)得濃度回收率（%）=一般要求回收率95-105%比例系統(tǒng)誤差

=100%-平均回收率%3回收率接近100％分析不受基質(zhì)影響。無(wú)論在純?nèi)芤哼€是復(fù)雜的基質(zhì)環(huán)境中，分析方法的反應(yīng)能力是一樣的。（準(zhǔn)確度不受影響）回收率明顯偏離100％分析明顯受不同的基質(zhì)影響。在不同的基質(zhì)環(huán)境下，分析方法的反應(yīng)能力有明顯差異。（準(zhǔn)確度受影響）回收率的理解：基質(zhì)：分析樣品中，除了被測(cè)物質(zhì)之外的，都稱為~3.

試驗(yàn)要點(diǎn)（1）加入標(biāo)準(zhǔn)液的體積在整個(gè)樣品中要少于等于10%。（2）要準(zhǔn)確吸量。一般每樣品重復(fù)測(cè)定2-3次取均值。（3）分析樣品濃度必須在測(cè)定方法的分析范圍內(nèi)。一般需做高中低三個(gè)濃度的回收試驗(yàn)，計(jì)算平均回收率。（4）分析樣品濃度最好在醫(yī)學(xué)決定水平上。可接受判斷

一般：SE+RE<TEa（四）干擾試驗(yàn)

1.概念

在加入一定濃度的干擾物的，形成恒定系統(tǒng)誤差，并將其測(cè)定出來(lái)。目的也是用來(lái)衡量候選方法的準(zhǔn)確度。但干擾物濃度不同，誤差大小也不同。干擾作用可有物理作用、化學(xué)作用以及非特異反應(yīng)等。

2.方法基本與回收試驗(yàn)一樣，但是加入的是疑有干擾或非特異性反應(yīng)的物質(zhì)。4干擾物測(cè)定物3.可疑干擾物的濃度應(yīng)達(dá)到病理標(biāo)本的最高濃度值，在確證有影響后，還應(yīng)確定使分析結(jié)果影響臨床應(yīng)用價(jià)值的最低干擾物質(zhì)濃度值。4.被試驗(yàn)的物質(zhì)：

可根據(jù)該方法的反應(yīng)原理，提示出可能的干擾物，一般應(yīng)考慮的是用高膽紅素、溶血（血紅蛋白）、脂濁、防腐劑、抗凝劑等進(jìn)行試驗(yàn)。但干擾試驗(yàn)有一定的局限性，因?yàn)槿藗冎荒茉囼?yàn)?zāi)承┪镔|(zhì)的影響，還有許多藥物和食物成分可能有干擾。五、檢測(cè)限評(píng)價(jià)可檢測(cè)的最低分析物濃度為檢測(cè)系統(tǒng)的分析靈敏度或稱檢測(cè)限。分析靈敏度：具有定性含義的檢測(cè)低限

具有定量含義的生物檢測(cè)限

功能靈敏度如果空白吸光度的波動(dòng)服從正態(tài)分布規(guī)律，則95％空白吸光度：空白均值±2s空白待測(cè)樣品吸光度只有超過(guò)空白均值＋2s空白才被認(rèn)為樣品中有分析物99.7％空白吸光度：空白均值±3s空白待測(cè)樣品吸光度只有超過(guò)空白均值＋3s空白才被認(rèn)為樣品中有分析物(一)檢測(cè)低限空白管的波動(dòng)原因：試劑空白的穩(wěn)定性，比色皿的一致性，比色計(jì)的穩(wěn)定性，……如：某5μg/L分析物的吸光度落在檢測(cè)低限＝5μg/L（定性）（低于5μg/L時(shí)其吸光度與空白吸光度有重疊，無(wú)法分辨）對(duì)于患者標(biāo)本的檢測(cè)，稍大于檢測(cè)低限的吸光度說(shuō)明樣品內(nèi)有分析物，但是，這時(shí)還不能正確報(bào)告定量結(jié)果。因?yàn)槭菃未螠y(cè)定。對(duì)于這個(gè)接近檢測(cè)低限的樣品做多次重復(fù)測(cè)定，按照正態(tài)分布規(guī)律其響應(yīng)值范圍應(yīng)該是X±2s或X±3s，即有50％測(cè)定結(jié)果會(huì)“無(wú)分析物”，有50％的測(cè)定結(jié)果“有分析物”。

那么多少檢測(cè)吸光度時(shí)才能較好地報(bào)告定量結(jié)果呢？ˉˉXB-2sBXBXB+2sB(檢測(cè)低限）50％50％(二)生物檢測(cè)限對(duì)于多個(gè)接近檢測(cè)低限的樣品做多次重復(fù)測(cè)定，按照正態(tài)分布規(guī)律其吸光度值范圍應(yīng)該是X±2s（或X±3s），這些較均值小的值就有可能和檢測(cè)低限（空白吸光度值的上限）交叉。因此，這些樣品檢測(cè)吸光度的95％（或99.7％）單次檢測(cè)吸光度的最低值也應(yīng)該比檢測(cè)低限大，從而保證樣品在任何情況下，單次檢測(cè)吸光度都不是空白吸光度，這些樣品具有的分析物濃度才可以定量的報(bào)告?？瞻拙礨B+2sB

生物檢測(cè)低限的定義：某樣品單次檢測(cè)可能具有的最小吸光度剛大于檢測(cè)低限吸光度，該樣品內(nèi)含有的分析物濃度為生物檢測(cè)限。（可以定量報(bào)告結(jié)果的限值）(三)功能靈敏度以日間重復(fù)測(cè)定的CV為20％時(shí)，對(duì)應(yīng)的檢測(cè)限樣品具有的平均濃度作為檢測(cè)系統(tǒng)可定量報(bào)告的最低濃度。需要多個(gè)檢測(cè)限濃度的樣品來(lái)做精密度試驗(yàn)，從中選擇CV接近20％的對(duì)應(yīng)濃度，作為可定量報(bào)告的最低濃度值。分析物濃度越低，精密度實(shí)驗(yàn)CV值越大。六、可報(bào)告范圍

可報(bào)告范圍指可以報(bào)告的所有結(jié)果的范圍。

1.分析測(cè)量范圍：沒(méi)有進(jìn)行任何預(yù)處理（稀釋，濃縮等）的樣本，由方法儀器直接測(cè)出的結(jié)果范圍。（也稱線性范圍）

2.臨床可報(bào)告范圍：對(duì)臨床診斷、治療有意義的待測(cè)物濃度范圍，可以通過(guò)稀釋、濃縮等方法擴(kuò)大分析測(cè)量范圍。

與標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法相同。在專用的標(biāo)準(zhǔn)曲線紙上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理得出回歸方程y=a+bx和相關(guān)系數(shù)（r）。線性好差沒(méi)有很客觀的判斷指標(biāo)，r接近1為好，0.99以上？？一般認(rèn)為，如果b在0.97-1.03范圍，a接近0，則可以判斷測(cè)定方法可報(bào)告范圍在實(shí)驗(yàn)所涉及的范圍。基本步驟（1）樣品準(zhǔn)備：評(píng)價(jià)標(biāo)本的基質(zhì)應(yīng)與實(shí)際測(cè)定的標(biāo)本相一致，理想的標(biāo)本是病人的低值或高值標(biāo)本。這往往不易收集到，亦可用病人的混合標(biāo)本加入分析物作為高值標(biāo)本，用正常人標(biāo)本作為低值標(biāo)本（必要時(shí)可作處理如分析物為酶可以加熱，小分子化合物可以透析，脂類可用超離心或多價(jià)陰離子沉淀）。

濃度范圍應(yīng)以分析項(xiàng)目的線性要求為準(zhǔn)。線性評(píng)價(jià)應(yīng)有5個(gè)不同濃度，可選擇低值和高值標(biāo)本各一個(gè)，低值標(biāo)本為1號(hào)，高值標(biāo)本為5號(hào)，二者3:1混勻?yàn)?號(hào)，等份混勻?yàn)?號(hào)，1:3混勻?yàn)?號(hào)，2-4號(hào)標(biāo)本的濃度按下式計(jì)算：C2=1/5C1*3+1/5C5*1

C3=1/5C1*2+1/5C5*2

C4=

1/5C1*1+1/5C5*3（2）測(cè)定方法

5個(gè)樣品各測(cè)定3