丹參 栽培學(xué)課件

丹參組長(zhǎng)：Chinapharmaceuticaluniversity概述1國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀及所取得的主要成果2研究具體方法步驟和關(guān)鍵技術(shù)3目前存在問(wèn)題4研究發(fā)展前景和展望5概述丹參為雙子葉植物唇形科Labiatae鼠尾草屬植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根莖。丹參是我國(guó)傳統(tǒng)中藥，具有安神止痛、活血化疲之功效，其活性成分主要有兩大類(lèi)：脂溶性二萜醌類(lèi)化合物（亦稱(chēng)丹參酮類(lèi)化合物）和水溶性酚酸類(lèi)化合物。70年代以來(lái)，臨床上主要用于治療冠心病心絞痛、心肌便塞等心血管疾病。

市場(chǎng)上的丹參制劑有丹參注射液、復(fù)方丹參注射液、丹參酮ⅡA、磺酸鈉注射液、丹參片、丹參舒心膠囊、復(fù)方丹參片、復(fù)方丹參滴丸等等高效拮抗乙肝病毒核心抗（HBeAg）、有較好的抗艾滋病毒（HIV）作用、丹參酚酸A具有很強(qiáng)的抗氧化作用，2.丹參毛狀根生物反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)的研究自從1983年以來(lái)，植物的毛狀根培養(yǎng)已在攪拌、氣升、噴淋床、霧化等形式的生物反應(yīng)器中進(jìn)行。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)球狀氣升式反應(yīng)器培養(yǎng)的丹參毛狀根的增殖倍數(shù)為241.71倍，高于三角瓶搖瓶培養(yǎng)的丹參毛狀根的增殖倍數(shù)。而且其總丹參酮的含量與三角瓶搖瓶培養(yǎng)的丹參毛狀根的總丹參酮的含量相當(dāng)。這一結(jié)果提示我們利用球狀氣升式反應(yīng)器進(jìn)行丹參毛狀根的初級(jí)放大是可行的。而在70L的氣升式反應(yīng)器培養(yǎng)50d時(shí)所獲得的丹參毛狀根中與10L的球狀氣升式反應(yīng)器培養(yǎng)50d時(shí)所獲得的丹參毛狀根中原兒茶醛和丹酚酸B的含量相當(dāng)，又說(shuō)明丹參毛狀根在氣升式反應(yīng)器中可以進(jìn)行進(jìn)一步地放大，達(dá)到中試的規(guī)模。國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀及所取得的主要成果國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀及所取得的主要成果

3.丹參組織培養(yǎng)及植株再生研究

丹參愈傷組織的產(chǎn)生受激素配比的影響.莖段接種在8種培養(yǎng)基上,3d左右兩端開(kāi)始膨大,10d后整個(gè)切段逐漸形成黃綠色愈傷組織,生長(zhǎng)旺盛,但在BA與NAA組合的培養(yǎng)基上,愈傷組織產(chǎn)生的量少;在2,4-D與BA組合的培養(yǎng)基上,隨著2,4-D濃度的增加,愈傷組織產(chǎn)生的量有所增加.葉片只在4、5、6、7、8號(hào)培養(yǎng)基上產(chǎn)生愈傷組織,首先在切口周?chē)纬捎鷤M織,之后整個(gè)外植體形成愈傷組織,但在4號(hào)培養(yǎng)基上愈傷組織產(chǎn)生的量少.莖段比葉片易于誘導(dǎo)愈傷組織,且誘導(dǎo)的愈傷組織生長(zhǎng)速度大于葉片誘導(dǎo)的愈傷組織,但莖、葉兩種外植體在以上培養(yǎng)基上產(chǎn)生的愈傷組織上都有少量白色的不定根.2,4-D誘導(dǎo)丹參愈傷組織的效果強(qiáng)于NAA,不同外植體對(duì)不同激素的反應(yīng)不盡相同,這可能是不同外植體內(nèi)源激素水平不同所致.研究具體方法步驟和關(guān)鍵技術(shù)

——丹參毛狀根生物反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)利用丹參的無(wú)菌苗作為試驗(yàn)材料。用發(fā)根農(nóng)桿菌15834直接感染的方式進(jìn)行Ri-質(zhì)粒轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)毛狀根。

具體方法：將丹參毛狀根先在固體67-V培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)使之增殖。丹參毛狀根10L球狀氣升式反應(yīng)器培養(yǎng)時(shí)，用0.12Mpa，121℃高壓蒸氣滅菌20min，冷卻后于超凈工作臺(tái)上接入3.68g的丹參毛狀根,并加入7500ml經(jīng)121℃高壓蒸氣滅菌20min后冷卻至室溫的67-V液體培養(yǎng)基。反應(yīng)器的通氣量為0.05vvm。三角瓶培養(yǎng)是采用1000ml玻璃三角瓶,內(nèi)裝250ml67-V液體培養(yǎng)基,三角瓶培養(yǎng)培養(yǎng)基的滅菌方法及毛狀根接種方法與球狀氣升式反應(yīng)器培養(yǎng)時(shí)相同,接種量為0.12g，在轉(zhuǎn)速為150rpm的搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。 所有培養(yǎng)工作都在25℃和弱光下進(jìn)行。培養(yǎng)50d后收獲各自的毛狀根,測(cè)定其鮮重,并在經(jīng)70℃烘干至衡重后測(cè)定其干重量。研究具體方法步驟和關(guān)鍵技術(shù)

采用張蔭麟等報(bào)道的紫外分光光度法測(cè)定丹參毛狀根總丹參酮的含量。對(duì)于75L的氣升式反應(yīng)器,則內(nèi)裝56.25L67-V液體培養(yǎng)基,并采用原位高溫蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌,當(dāng)反應(yīng)器中的培養(yǎng)基冷卻至室溫后,用火焰接種法將丹參毛狀根切段接入反應(yīng)器中,反應(yīng)器的通氣量為0.05vvm。

有關(guān)培養(yǎng)也在25℃中進(jìn)行。培養(yǎng)50d后收獲毛狀根,測(cè)定其鮮重,并經(jīng)70℃烘干至衡重時(shí)測(cè)定其干重量。采用孫丕和何麗一報(bào)道的高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定丹參毛狀根中的原兒茶醛和丹酚酸B的含量。目前存在問(wèn)題3.優(yōu)質(zhì)品種的繁育研究滯后

藥用植物的優(yōu)質(zhì)品種選育嚴(yán)重滯后是中藥生產(chǎn)中的共性問(wèn)題,調(diào)查發(fā)現(xiàn)大部分地區(qū)采用種子育苗,結(jié)合分根的方式進(jìn)行繁殖,這種方式引起種苗的質(zhì)量差異較大。也有部分地區(qū)采用"分根+蘆頭"的無(wú)性繁殖方式,已導(dǎo)致四川中江的大葉型丹參向不育系退化。研究表明四川居群內(nèi)遺傳比較相似。分根和蘆頭繁殖方式屬無(wú)性克隆,而種子繁殖是有性繁殖,存在基因交流,無(wú)性繁殖對(duì)丹參總體質(zhì)量最好。目前在陜西商洛,河南部分地區(qū),山東種植丹參以種子繁殖育苗移栽居多。因此,丹參的良種繁育技術(shù)的研究有待提高。研究發(fā)展前景和展望

2.利用組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)保存丹參稀有種質(zhì)、快速繁殖、多倍體育種、單倍體育種以及與其它遺傳改良技術(shù)結(jié)合創(chuàng)新種質(zhì)等方面具有重要的實(shí)踐意義。隨著生物技術(shù)的深入研究,組織培養(yǎng)技術(shù)將作為其不可或缺的一個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)而得到進(jìn)一步發(fā)展。由于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化和誘導(dǎo)子技術(shù)的應(yīng)用,通過(guò)丹參組織和器官進(jìn)行有效成分的人工大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)顯示出巨大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

3.利用植物細(xì)胞工程和基因工程等現(xiàn)代生物