基因結(jié)構(gòu)與表達(dá)的基本策略

1基因結(jié)構(gòu)與表達(dá)分析的基本策略StrategyforStructureandExpressionAnalysesofGenes分子生物學(xué)系22分子生物學(xué)的三大核心技術(shù)DNA序列分析—DNA測(cè)序，1977聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)—DNA擴(kuò)增，1985DNA重組技術(shù)—基因克隆，19733一、DNA序列分析二、核酸分子雜交三、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)四、基因芯片和微陣列五、Western免疫印跡主要內(nèi)容4（一）雙脫氧末端終止法

(Sanger,1977)一、DNA序列分析（二）DNA自動(dòng)化序列分析（三）化學(xué)降解法(Gilbert,1977)5FrederickSanger1918～

WalterGilbert1932～

TheNobelPrizeinChemistry1980PaulBerg1926～6DNA測(cè)序技術(shù)基礎(chǔ)：高分辨率變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE）技術(shù)，可分離差別僅1個(gè)堿基的單鏈寡核苷酸DNA片段。

7(一）雙脫氧末端終止法

（dideoxychaintermination）8ATP、dATP和ddATP的結(jié)構(gòu)ATPAOHOHHHdATPddATPNTP:核苷三磷酸ATP、GTP、CTP、UTP的合稱；dNTP:脫氧核苷三磷酸dATP、dGTP、dCTP、dTTP；ddNTP:ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP；9摻入N個(gè)核苷酸DNA合成反應(yīng)模式圖10DNA單鏈模板引物摻入ddNTP延伸的新合成鏈

末端終止111.雙脫氧氧末端端終止止法原原理DNA合成反反應(yīng)中中，ddNTP不存在在3′-OH末端，故不不能與與下一一個(gè)核核苷酸酸的5′-磷酸基基團(tuán)形成3′，5′-磷酸二二酯鍵鍵，導(dǎo)導(dǎo)致DNA新鏈的的延伸伸提前前終止止于ddNTP。12ddCTPddATPddTTPddGTPdCTPdATPdTTPdGTPAGCT5′T4711GAATGA3′ACGCT132.DNA測(cè)序主要步步驟14A反應(yīng)管G反應(yīng)管G反應(yīng)管T反應(yīng)管C反應(yīng)管T反應(yīng)管1516GATC17●變性聚丙烯烯酰胺凝膠膠電泳●單鏈鏈DNA模板的制備備●DNA模板與測(cè)序序引物退火火●摻入入法標(biāo)記反反應(yīng)●延伸伸-終止反應(yīng)●放射射自顯影●閱讀讀測(cè)序結(jié)果果測(cè)序序步步驟驟18（二二））DNA測(cè)序序自自動(dòng)動(dòng)化化原原理理采用用4種不不同同的的熒熒光光分分別別標(biāo)標(biāo)記記4種ddNTP終止止反反應(yīng)應(yīng)產(chǎn)產(chǎn)物物，，替替代代放放射射性性同同位位素素標(biāo)標(biāo)記記是是實(shí)實(shí)現(xiàn)現(xiàn)DNA測(cè)序序自自動(dòng)動(dòng)化化的的基基礎(chǔ)礎(chǔ)。。19ddCTPddATPddTTPddGTPdCTPdATPdTTPdGTP5′TGAATGA3′ACGCT2021表示示一一個(gè)個(gè)SNP位點(diǎn)點(diǎn)，，該該位位點(diǎn)點(diǎn)出出現(xiàn)現(xiàn)了了雙雙峰峰，，對(duì)對(duì)應(yīng)應(yīng)的的核核苷苷酸酸分分別別為為C和T,因此此該該位位點(diǎn)點(diǎn)為為CT雜合合型型，，如如果果該該位位點(diǎn)點(diǎn)只只有有一一個(gè)個(gè)峰峰C或者者T，則則該該位位點(diǎn)點(diǎn)基基因因型型為為CC或TT純合合型型22DNA自動(dòng)動(dòng)測(cè)測(cè)序序步步驟驟4種不不同同熒熒光光染染料料標(biāo)標(biāo)記記終終止止物物ddNTPsSanger測(cè)序序反反應(yīng)應(yīng)反應(yīng)應(yīng)產(chǎn)產(chǎn)物物同一一泳道道電電泳泳分分離離激光激激發(fā)不不同大大小DNA片段上上的熒熒光分分子，，發(fā)射射出四四種不不同波波長的的熒光光熒光信信號(hào)采采集、、計(jì)算算機(jī)分分析與與DNA自動(dòng)排排序23DyelabeleddideoxyterminatorsonABI3730capillaries24

與末端終止法不同，化學(xué)降解法是建立在對(duì)原有DNA的化學(xué)降解過程基礎(chǔ)上。

（三）化學(xué)降解法25

將待測(cè)DNA片段3′或5′端進(jìn)行同位素標(biāo)記，標(biāo)記的DNA片段分成五個(gè)反應(yīng)，分別用不同的化學(xué)試劑處理，造成堿基特異性切割，使DNA片段分別于某一種（類）堿基處斷裂。電泳分離5組DNA混合物，放射自顯影檢測(cè)末端標(biāo)記的DNA鏈的電泳區(qū)帶位置?；瘜W(xué)降解法原理26化學(xué)降降解G反應(yīng)模模式圖圖硫酸二甲酯哌啶MetMetMetMet27最新測(cè)測(cè)序技技術(shù)454技術(shù)(Roche)焦磷酸酸測(cè)序序（Pyrosequencing）Solexa測(cè)序技技術(shù)(Illumina)SOLiD技術(shù)(ABI)連接法法測(cè)序序28舉例：：Solexa測(cè)序HiSeq200029Solexa測(cè)序：：在一一個(gè)反反應(yīng)中中同時(shí)時(shí)加入入4種核苷苷的標(biāo)標(biāo)簽，，采用用邊合合成邊邊測(cè)序序（SBS－sequencingbysynthesis）。完成人人類基基因組組草圖圖不同同測(cè)序序儀的的比較較圖30二、核酸分分子雜雜交（NucleicAcidHybridization）（一））Southern印跡雜雜交：：檢測(cè)測(cè)DNA(Southernblothybridization)SouthernEM,1975（二二））Northern印跡跡雜雜交交：：檢檢測(cè)測(cè)RNA(Northernblothybridization)StarkGR，197731核酸酸分分子子雜雜交交原原理理標(biāo)記記的的單鏈鏈核核酸酸探探針針與待待檢檢測(cè)測(cè)的的靶靶單單鏈鏈DNA或RNA局部部互互補(bǔ)補(bǔ)結(jié)結(jié)合合形形成成雜雜交交雙雙鏈鏈。。應(yīng)用用：：核酸酸靶靶DNA或RNA序列列的的定定性性與與定定量量分分析析。。323333印跡跡技技術(shù)術(shù)利用用各各種種物物理理方方法法使使電電泳泳膠膠中中的的生生物物大大分分子子轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移移到到NC等各種膜上上，使之成成為固相化化分子。這一技術(shù)類類似于用吸吸墨紙吸收收紙張上的的墨跡，因因此稱之為為“blotting”,譯為印跡技技術(shù)。3434探針技術(shù)用放射性核核素、生物物素或熒光光染料標(biāo)記記其末端或或全鏈的已已知序列的的多聚核苷苷酸鏈被稱稱為“探針”。探針可以與與固定在NC膜上的核苷苷酸結(jié)合，，判斷是否否有同源的的核酸分子子存在。35Southern印跡雜交原原理將電泳分離離的待測(cè)DNA片段結(jié)合到到一定的固固相支持物物上，然后后與存在于于液相中標(biāo)標(biāo)記的核酸酸探針進(jìn)行行雜交的過過程。（一）Southern印跡雜交應(yīng)用：DNA（基因組DNA）分子的定定性或定量分析。361.制備基因組組DNA2.用限制性內(nèi)內(nèi)切核酸酶酶消化基因因組DNA3.瓊脂糖凝膠膠電泳分離離DNA酶切片段4.凝膠預(yù)處理理（如強(qiáng)堿，，DNA雙鏈變?yōu)閱螁捂湥?.Southern印跡轉(zhuǎn)移6.標(biāo)記核酸探探針、探針針與DNA片段雜交7.雜交結(jié)果顯顯示Southern印跡雜交基基本過程37Southern印跡雜交示示意圖38將電泳分離離的待測(cè)DNA片段結(jié)合到到一定的固固相支持物物上，然后后與存在于于液相中標(biāo)標(biāo)記的核酸酸探針進(jìn)行行雜交的過過程。3940地中海貧血血的Southernblot基因診斷（1）僅一條染染色體上的的一個(gè)α基因缺失或或缺陷，則則α鏈的合成部部分受抑制制，稱為α+地貧；（2）每條染色色體上的2個(gè)α基因均缺失失或缺陷，，稱為α0地貧；(3)αα1、α2序列基本一一致；基因不同同程度的缺缺失可引起起不同類型型的地中海貧血血。α1α2αααα+α+α+ααα0α+α0α0α041BamHIBamHIα2α1α210kb14kbprobe地中中海海貧貧血血的的直直接接基基因因診診斷斷42αα/αααααα/α-ααα/--αα-//--正常缺缺1缺2缺3缺414kb10kb43（二）Northern印跡雜交交(Northernblothyb指將RNA變性及電電泳分離離后，并并轉(zhuǎn)移到到固相支支持物上上，用雜雜交反應(yīng)應(yīng)來鑒定定其中特特定mRNA分子的含含量及其其大小。。用于mRNA進(jìn)行定性性和定量量分析。。44RNA瓊脂糖凝凝膠電泳泳3kb0.4kbNt36382604623Northernblothybridization28S18S應(yīng)用舉例例45GAPDH0d2d4d6d8dNorthernblot雜交分析析mRNA的表達(dá)靶mRNA3-磷酸甘油油醛脫氫氫酶4646三、其他他雜交技技術(shù)1.斑點(diǎn)雜交交(dotblothybridization）將RNA或DNA變性后直直接點(diǎn)樣樣于硝酸酸纖維素素膜或尼尼龍膜上上，用于于基因組組中特定定基因及及其表達(dá)達(dá)的定性性及定量量研究。。47472.原位雜交交

（insituhybridization）用標(biāo)記的的核酸探探針與組組織切片片或細(xì)胞胞中的待待測(cè)核酸酸互補(bǔ)序序列雜交交，可對(duì)對(duì)核酸進(jìn)進(jìn)行定性性、定位位和相對(duì)對(duì)定量分分析。483．核酸酶酶S1保護(hù)分析析法(nucleaseS1protectionassay）單鏈DNA探針與待測(cè)RNA形成DNA/RNA雜交雙鏈鏈，加入入核酸酶酶S1專一性地地降解未未形成雜雜交體的的DNA或RNA單鏈，DNA/RNA雜交雙鏈鏈則受到到保護(hù)而而不被降降解。494．RNA酶保護(hù)分分析法（RNaseprotectionassay，RPA）50RPA基本程序序：●待測(cè)RNA的分離●體外轉(zhuǎn)錄錄標(biāo)記RNA探針●待測(cè)RNA與探針RNA進(jìn)行液相相雜交●RNA酶消化●不同大小小雜交片片段凝膠膠電泳分分離51三、聚合合酶鏈?zhǔn)绞椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR)（一）PCR技術(shù)原理理（二）耐耐熱DNA聚合酶（三）PCR引物及設(shè)設(shè)計(jì)原則則（四）PCR條件的優(yōu)優(yōu)化（五）PCR改進(jìn)技術(shù)術(shù)（六）其其它PCR技術(shù)52聚合酶鏈鏈?zhǔn)椒磻?yīng)應(yīng)(PCR):（一）PCR技術(shù)原理理

Mullis

K.

1985年發(fā)明的一種模擬天然DNA復(fù)制過程的核酸體外擴(kuò)增技術(shù)。

TheNobelPrizeinChemistry199353ThereplicationofDNA54原理：PCR是模擬天天然DNA復(fù)制過程程，利用用DNA聚合酶催催化一對(duì)對(duì)引物間間特異DNA片段合成成的體外外擴(kuò)增技技術(shù)。其其主要要熱循環(huán)環(huán)過程為為：變性性、退火火、延伸伸三個(gè)步步驟。551.PCR循環(huán)由三步步組成：①變性（denaturation）②退火（annealing）③延伸（extension）高溫合適溫度合適溫度5657582.PCR擴(kuò)增終產(chǎn)物物大小:介于兩條退退火引物5′末端之間的的雙鏈DNA片段。循環(huán)一59循環(huán)二60循環(huán)三61一對(duì)引物：：正向和反反向

限制制了PCR擴(kuò)增的片段段的范圍5/——5/—3/3/—5/——5/—3/3/—625′CAGTTAAGGGGGCAGGAGTGGCGCTGCTCACCTCTGGTGCCAAAGGGCGGCGCAGCGGCTGCCGAGCTCGGCCCTGGAGGCGGCAGAACATGGTGCGCAGGTTCTTGGTGACCCTCCGGATTCGGCGCGCGTGCGGCCCGCCGCGAGTGAGGGTTTTCGTGGTTCACATCCCGCGGCTCACGGGGGAGTGGGCAGCGCCAGGGGCGCCCGCCGCTGTGGCCCTCGTGCTGATGCTACTGAGGAGCCAGCGTCTAGGGCAGCAGCCGCTTCCTAGAAGACCAGGTCATGATGATGGGCAGCGCCCGAGTGGCGGAGCTGCTGCTGCTCCACGGCGCG3′GGTCCAGTACTACTACCCGTAGAACATGGTGCGCAGGTT3.引物設(shè)計(jì)實(shí)實(shí)例63Y=A（1+E）nY:擴(kuò)增產(chǎn)物的的量A:最初靶DNA分子數(shù)E:PCR擴(kuò)增效率n:循環(huán)次數(shù)3.PCR產(chǎn)量當(dāng)E＝100％,A=1時(shí)Y=2n>>2n(引物延伸產(chǎn)產(chǎn)物的量））64（二）平臺(tái)臺(tái)期與平臺(tái)臺(tái)效應(yīng)1.平臺(tái)效應(yīng)（plateaueffect）：PCR經(jīng)過一定數(shù)數(shù)量的循環(huán)環(huán)后，DNA片段不再呈呈指數(shù)累積積，而是進(jìn)進(jìn)入線性增增長期或靜靜止期，即平臺(tái)效應(yīng)應(yīng)。影響因素：：①引物物及dNTP底物濃度降降低。②酶與與模板比例例下降。65PCR平臺(tái)效應(yīng)66（二）耐熱熱DNA聚合酶TaqDNA聚合酶（實(shí)現(xiàn)了PCR自動(dòng)化）從嗜熱水生生菌thermusaquaticsYT-1株中直接分分離出來。?！?5℃的半衰期:40min●最適溫度:72℃～80℃●催化反應(yīng)速率:150～300核苷酸/秒/酶分子6768TaqDNA聚合酶特性性：●5′→3′′聚合酶活性性；●5′→3′′外切酶活性性；●較弱弱的非模板板依賴性；；●缺乏乏3′→5′′外切酶活性性。69PCRthermalcycler70PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電電泳分析500bp400bp200bp300bp1000bp600bp700bp800bp900bpMarkerPCR產(chǎn)物71無機(jī)離子及及抑制劑的的影響TaqDNA聚合酶的活活性對(duì)Mg2+濃度和單價(jià)價(jià)離子（K+或NH4+）的性質(zhì)和和濃度較敏敏感。最適Mg2+濃度：2mmol/LK+濃度：50mmol/L72幾種高保保真的耐耐熱DNA聚合酶1.TthDNA聚合酶2.VentDNA聚合酶3.PfuDNA聚合酶73（三）PCR引物設(shè)計(jì)計(jì)原則引物的化化學(xué)本質(zhì)質(zhì)是什么么？單鏈寡核核苷酸DNA或RNA片段。DNA復(fù)制引物物：單鏈鏈RNA片段PCR引物：單單鏈鏈DNA片段74PCR引物設(shè)計(jì)計(jì)原則：1.引物與模模板的序序列要完完全互補(bǔ)補(bǔ)2.引物與引引物之間間避免形形成穩(wěn)定定的二聚聚體或發(fā)發(fā)夾結(jié)構(gòu)構(gòu)3.引物不能能在模板板的非目目的位點(diǎn)點(diǎn)引發(fā)DNA聚合反應(yīng)應(yīng)(錯(cuò)配)755′CACTGAACGTAGGCCT3′3′GCAGGTTCAGTGACTTGCATCCGGATGCAAC5′特異擴(kuò)增增5′CACTGAACGTAGGCCT3′′3′GGATCTACATGCGACTTAATCCGGAGATACC5′′錯(cuò)誤誤引引發(fā)發(fā)1.引物物與與模模板板的的序序列列要要緊緊密密互互補(bǔ)補(bǔ)2.引物物不不能能在在模模板板的的非非目目的的位位點(diǎn)點(diǎn)引引發(fā)發(fā)DNA聚合合反反應(yīng)應(yīng)(錯(cuò)配配)76引物物之之間間應(yīng)應(yīng)避避免免3′′端互互補(bǔ)補(bǔ)3.引物物與與引引物物之之間間避避免免形形成成穩(wěn)穩(wěn)定定的的二二聚聚體體或或發(fā)發(fā)夾夾結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)77引物物自自身身不不應(yīng)應(yīng)形形成成發(fā)發(fā)夾夾結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)784.其它它原原則則:①引物物長長度度:10～30nt②堿基基分分布布:A、T、G、C隨機(jī)機(jī)分分布布③G+C含量：40～60%Tm=4(G+C)+2(A+T)④引物3′末端堿基：最好選T、C、G，不選A避免出現(xiàn)3個(gè)以上的連連續(xù)堿基，，如GGG或CCC⑤引物5′末端堿堿基可可不與與模板板DNA互補(bǔ)791A260oligoDNA≈33μμgN:引物堿基數(shù)數(shù)X：合成成的oligoDNAA260單位Y：引物物的pmol數(shù)106Y（pmol）=X·33××───330.NX=───××105N2.引物用用量計(jì)計(jì)算80模板引物TaqDNA聚合酶酶dNTPMg2+退火變性延伸PCR反應(yīng)81（四））PCR條件的的優(yōu)化化1.TaqDNA聚合酶酶濃度度：1.0～2.5U/100μμl反應(yīng)液液2.dNTP濃度：：20～200μμmol/L3.Mg2+濃度：：0.5～2.5mmol/L4.引物濃濃度：：0.1～0.5μμmol/L82（五））PCR改進(jìn)技技術(shù)1.RT-PCR(reversetranscriptionPCR)以mRNA為模板板逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄合合成cDNA，再以以此cDNA為模板板進(jìn)行行PCR反應(yīng)。83RT-PCR原理84逆轉(zhuǎn)錄錄酶①AMV（avianmyeloblastosisvirus）酶活性性最適適溫度度42℃℃②MMLV（Moloneymurineleukemiavirus）：最最適溫溫度37℃℃852.定量RT-PCR（QRT-PCR）半定定量量RT-PCR以樣樣本本mRNA為模模板板逆逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄錄合合成成cDNA，在在不不同同引引物物對(duì)對(duì)引引導(dǎo)導(dǎo)下下共共同同PCR擴(kuò)增增“看看家家””基基因因和目的的基基因因cDNA。86①選擇擇內(nèi)內(nèi)對(duì)對(duì)照照基基因因組織織中中普普遍遍表表達(dá)達(dá)、、表表達(dá)達(dá)量量比比較較恒恒定定的的““看看家家””基基因因mRNA。如如GAPDH和β-actinmRNA等。。②半定定量量標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)計(jì)算算PCR產(chǎn)物物：：靶cDNA/GAPDHcDNA87③KPNA2在在正正常常生生理理狀狀態(tài)態(tài)東東方方田田鼠鼠和和小小鼠鼠體體內(nèi)內(nèi)表表達(dá)達(dá)分分析析88893.實(shí)時(shí)時(shí)熒熒光光定定量量RT-PCRReal-timefluorescentquaPCR擴(kuò)增指指數(shù)期期內(nèi)極極小的的擴(kuò)增增效率率改變變會(huì)極極大地地影響響產(chǎn)量量。應(yīng)用：：用于基因因DNA拷貝數(shù)數(shù)和mRNA表達(dá)定定量分分析。。90①熒光染染料9192每形成成一個(gè)個(gè)DNA雙鏈，，就有有一定定數(shù)量量的染染料結(jié)結(jié)合上上去，，染料料一結(jié)結(jié)合就就產(chǎn)生生熒光光信號(hào)號(hào)，信號(hào)強(qiáng)強(qiáng)度與與DNA分子總總數(shù)目目成正正比。93②TaqManProbe一種水水解式式熒光光標(biāo)記記探針針。寡寡核苷苷酸探探針的5′端標(biāo)記記一個(gè)個(gè)熒光光報(bào)告告基團(tuán)團(tuán)（reporter），3′端標(biāo)記記一個(gè)個(gè)熒光淬滅基團(tuán)（quencher）。94每產(chǎn)生生一條條DNA鏈，就就切斷斷一條條探針針，每每切斷斷一條95。③分子信標(biāo)探探針（MolecularBeaconProbe）該探針具有有發(fā)夾結(jié)構(gòu)構(gòu)，5′端標(biāo)記熒光光報(bào)告基團(tuán)團(tuán)，3′端標(biāo)記淬滅滅基團(tuán)。96探針與靶序序列雜交結(jié)結(jié)合，報(bào)告告熒光染料料與淬滅染染料分離，，發(fā)出熒光光。97④實(shí)時(shí)熒光光定量PCR計(jì)算原理PCR擴(kuò)增效率的的差異使相相同的樣品品最終產(chǎn)量量有很大差差異9899CT或Tc或Ct值：臨界點(diǎn)循環(huán)環(huán)（Thresholdcycle），即從基基線到指數(shù)數(shù)增長的拐拐點(diǎn)所對(duì)應(yīng)應(yīng)的循環(huán)數(shù)數(shù)100101●傳染病診斷斷、監(jiān)測(cè)與與療效預(yù)后后評(píng)估：●揭示疾病發(fā)發(fā)病機(jī)制102⑤熒光定量PCR儀帶有激發(fā)光光源和熒光光信號(hào)檢測(cè)測(cè)系統(tǒng)的PCR儀，配有電電腦系統(tǒng)及及分析軟件件。103（六）其它它PCR技術(shù)1.反向PCR（inversePCR）原理1042.Alu-PCR1053.原位PCR(in-situPCR)4.巢式PCR（nestedPCR）5.不對(duì)稱PCR（asymmetricPCR）106DNAChipandMicroarray四、基因芯片和和微陣列●基因芯片上上的陣列是是由有規(guī)則則排列的cDNA或寡核苷酸酸等樣本所所組成的。。107宏陣列(Macroarray)高密度微陣列(Microarray)舉例：HPV診斷芯片108DNA微陣列：●寡核苷苷酸微陣列列（oligomicroarray）●cDNA微陣列（cDNAmicroarray）在一微小的的基片（硅硅片等）表表面集成了了大量分子子識(shí)別探針針，能夠平平行分析大大量基因轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄表達(dá)，，因此又被被稱為cDNA芯片。109DNA芯片（cDNA芯片）主要技術(shù)流程：樣品熒光標(biāo)記及芯片制備雜交反應(yīng)及過程控制雜交信號(hào)檢測(cè)信號(hào)分析與解讀110CBACy5-標(biāo)記cDNACy3-標(biāo)記cDNACBACBACBACBACBACBA樣品1樣品2Cy5/Cy3熒光標(biāo)記RNA提取競爭性雜交交顯示基因表達(dá)量量差異二種樣品競爭性雜交示意圖基因表達(dá)譜芯片的原理111DNA芯片技術(shù)的的主要應(yīng)用用基因組分析析及發(fā)現(xiàn)新新的基因基因表達(dá)的的研究DNA序列分析基因診斷和和基因藥物物設(shè)計(jì)112五、Western免疫印跡Westernblotting原理與核酸酸分子雜交交相似，只只是以偶聯(lián)聯(lián)標(biāo)記物的的抗體分子作為探探針，檢測(cè)測(cè)轉(zhuǎn)移到固固相支持物物上的蛋白質(zhì)分子。113Western免疫印跡信信號(hào)檢測(cè)原原理114蛋白質(zhì)樣品品制備SDS分離蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜膜Westernblot程序115抗體與抗原原雜交信號(hào)檢測(cè)分分析116謝謝大家??！9、靜夜四無鄰鄰，荒居舊業(yè)業(yè)貧。。12月-2212月-22Friday,December23,202210、雨中黃葉樹樹，燈下白頭頭人。。06:10:1606:10:1606:1012/23/20226:10:16AM11、以我我獨(dú)沈沈久，，愧君君相見見頻。。。12月月-2206:10:1606:10Dec-2223-Dec-2212、故人江海別別，幾度隔山山川。。06:10:1606:10:1606:10Friday,December23,202213、乍見翻疑夢(mèng)夢(mèng)，相悲各問問年。。12月-2212月-2206:10:1606:10:16December23,202214、他鄉(xiāng)生白白發(fā)，舊國國見青山。。。23十二二月20226:10:17上上午06:10:1712月-2215、比不了得得就不比，，得不到的的就不要。。。。十二月226:10上上午12月-2206:10December23,202216、行動(dòng)出出成果，，工作出出財(cái)富。。。2022/12/236:10:1706:10:1723December202217、做前，，能夠環(huán)環(huán)視四周周；做時(shí)時(shí)，你只只能或者者最好沿沿著以腳腳為起點(diǎn)點(diǎn)的射線線向前。。。6:10:17上午午6:10上午午06:10:1712月-229、沒有失敗，，只有暫時(shí)停停止成功！。。12月-2212月-22Friday,December23,202210、很多事情努努力了未必有有結(jié)果，但是是不努力卻什什么改變也沒沒有。。06:10:1706:10:1706:1012/23/20226:10:17AM11、成功就是日日復(fù)一日那一一點(diǎn)點(diǎn)小小努努力的積累。。。12月-2206:10:1706:10Dec-2223-Dec-2212、世間成事，，不求其絕對(duì)對(duì)圓滿，留一一份不足，可可得無限完美美。。06:10:1706:10:1706:10Friday