GM試驗(yàn)的原理操作及應(yīng)用(推廣課件)

GM試驗(yàn)的原理、操作及應(yīng)用客服技術(shù)培訓(xùn)中心2013年8月目錄一、侵襲性曲霉菌病二、GM試驗(yàn)原理及使用方法三、GM試驗(yàn)的臨床應(yīng)用曲霉菌曲霉菌(Aspergillus)是廣泛存在于自然界一種腐生菌，孢子較小，直徑2~3um，可在空氣中漂浮，可通過(guò)呼吸道進(jìn)入人體。[1]LinSJ,etal.JClinInfectDis,2001,32(3):358-366多種曲霉菌都可引起侵襲性曲霉病，如煙曲霉、黑曲霉、土曲霉、黃曲霉和構(gòu)巢曲霉等，90%報(bào)道的患者都是由煙曲霉感染所致病[1]。煙曲霉黃曲霉黑曲霉

侵襲性曲霉患者在血液科和ICU最為常見(jiàn)1994-1999年法國(guó)一項(xiàng)前瞻性流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果Cornetmetal.JHospinfect.2002;514:288-296曲霉菌感染的發(fā)生率相關(guān)重點(diǎn)科室：血液科，呼吸科，ICU科，腫瘤科，移植科室等Teutsch,etal.ClinInfectDis.2001,32:358不同基礎(chǔ)疾患下侵襲性曲霉感染的死亡率100%90%80%70%60%50%40%30%20%0%白血病骨髓移植腎移植肺/心臟移植肝移植AIDS49%92%68%44%75%89%曲霉菌感染的死亡率不同診治情況下侵襲性曲霉感染的死亡率100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%0%死亡率未能診斷，未治療病程10天以上經(jīng)驗(yàn)性早期診治有效藥物治療100%90%65%40%DavidWDenning,TheLancet,2000,February5,Vol355IFD診斷延遲時(shí)間與死亡率的關(guān)系50%40%30%20%10%0%死亡率IFD診斷延遲1天IFD診斷延遲2天IFD診斷延遲3天及以上36%41%24%GareyKWetal.ClinInfectDis2006,43:25–31早期診斷和治療已成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)領(lǐng)域共同關(guān)注的重大問(wèn)題！

臨床及影像學(xué)表現(xiàn)病原學(xué)證據(jù)無(wú)菌部位培養(yǎng)陽(yáng)性

（培養(yǎng)和非培養(yǎng)方法）組織病理學(xué)陽(yáng)性

高危患者擬診

臨床診斷

確診

預(yù)防用藥經(jīng)驗(yàn)性治療

搶先治療

靶向治療深部真菌病診斷與治療策略

曲霉菌的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法涂片：敏感性和特異性均較低。無(wú)菌體液培養(yǎng)：耗時(shí)長(zhǎng)，陽(yáng)性率低。1,3-β-D-葡聚糖檢測(cè)：G試驗(yàn)不能鑒別菌屬半乳甘露聚糖抗原檢測(cè)：GM試驗(yàn)

曲霉菌抗體檢測(cè)：抗半乳甘露聚糖抗體檢測(cè)試驗(yàn)一、傳統(tǒng)方法二、針對(duì)真菌感染標(biāo)記物的早期快速檢測(cè)方法病理切片：取材困難，陽(yáng)性率低。金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)曲霉菌屬GM試驗(yàn)被列入真菌診斷和治療的指南歐洲癌癥治療研究組織(EORTC)美國(guó)國(guó)家過(guò)敏癥與傳染病研究所霉菌病研究組(MSG)批準(zhǔn)用于真菌診斷中國(guó)血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)與治療原則(第3次修訂)

GM實(shí)驗(yàn)在歐洲已用了十多年，2003年經(jīng)FDA認(rèn)可在美國(guó)使用。

有2/3的血液腫瘤患者在其他診斷方法陽(yáng)性之前6-14d（平均8天）即可檢測(cè)到GM抗原【1】

。適于侵襲性曲霉感染的早期診斷。

【1】

MaertensJ,Van-EldereJ,VerhagenJ,etal.Useofcirculatinggalactomannanscreeningforearlydiagnosisofinvasiveaspergillosisinallogeneicstemcelltraspants.JInfectDis,2002,186(9):1297-1306GM試驗(yàn)陽(yáng)性是侵襲性曲霉菌感染診斷標(biāo)準(zhǔn)中重要的微生物學(xué)依據(jù)可實(shí)現(xiàn)侵襲性曲霉菌感染的早期診斷可實(shí)現(xiàn)對(duì)高危人群曲霉菌感染的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)可對(duì)抗真菌治療提供用藥依據(jù)和進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)GM試驗(yàn)的臨床意義侵襲性真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)

歐洲癌癥研究和治療組織/侵襲性真菌感染協(xié)作組（EORTC/MCG）（2008修訂版）宿主因素臨床表現(xiàn)微生物學(xué)依據(jù)

腦脊液隱球菌莢膜多糖抗原陽(yáng)性——確診

半乳甘露聚糖（GM）試驗(yàn)、G試驗(yàn)——臨床診斷組織病理依據(jù)早期診斷GM試驗(yàn)檢測(cè)的是半乳甘露聚糖，主要適于侵襲性曲霉菌感染的早期診斷，是曲霉菌特有的細(xì)胞壁成分，當(dāng)菌絲生長(zhǎng)時(shí)，半乳甘露聚糖從薄弱的菌絲頂端釋放，是最早釋放的抗原。GM試驗(yàn)檢測(cè)早于臨床癥狀和影像學(xué)判斷【1】：可比侵襲性曲霉病(IA)臨床癥狀平均早5-8天；比高分辨CT掃描平均早7.2天；比開(kāi)始經(jīng)驗(yàn)性抗真菌治療平均早12·5天。【1】

PazosCetal.JClinMicrobiol,2005,43:299-305為臨床用藥提供依據(jù)不同病原感染在臨床用藥方面的差異曲霉菌:伏立康唑,伊曲康唑,卡泊芬凈,兩性霉素-B等念珠菌:白色念珠菌:氟康唑;

非白念:伏立康唑或卡泊芬凈;卡氏肺囊蟲(chóng):復(fù)方新諾明、卡泊芬凈毛霉菌:目前只有兩性霉素-B2012年衛(wèi)生部對(duì)抗菌藥物分級(jí)管理政策非限制使用級(jí)，如：青霉素，苯唑西林氟康唑限制使用級(jí)，如：哌拉西林/他唑巴坦伏立康唑特殊使用級(jí)，如：亞胺培南卡泊芬凈2012年“專(zhuān)項(xiàng)整治”重點(diǎn)內(nèi)容非限制級(jí)抗菌藥物使用前送檢率≥30%限制級(jí)抗菌藥物使用前送檢率≥50%特殊級(jí)抗菌藥物使用前送檢率≥80%GM試驗(yàn)是真菌送檢項(xiàng)目之一，對(duì)控制抗菌藥物濫用有重要意義。評(píng)價(jià)療效和病情監(jiān)測(cè)

GM釋放量與菌量成正比，可以反映感染程度，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血清GM水平的變化有助于判斷抗真菌治療的效果。在治療期間,如果病人GM持續(xù)陽(yáng)性或保持較高水平則預(yù)后差。GM抗原清除早的病人預(yù)后好，提示連續(xù)的血清GM檢測(cè)能夠監(jiān)測(cè)病情變化。不同患者BG(●)andGM(?)體液變化情況GM試驗(yàn)與療效評(píng)價(jià)GM抗原含量隨著抗真菌藥物的使用逐漸降低GM試驗(yàn)原理及使用方法

半乳甘露聚糖（Galactomannan，簡(jiǎn)寫(xiě)GM）是曲霉菌細(xì)胞壁上的一種多聚抗原，其包含了甘露糖骨干與半乳糖旁基的多糖，更準(zhǔn)確的一點(diǎn)來(lái)說(shuō)，是直線(xiàn)狀（1-4）-β-D型甘露糖骨架于它們6-連接點(diǎn)連接到α-D型半乳糖的多糖，即1-6-連結(jié)的α-D型吡喃半乳糖。曲霉菌半乳甘露聚糖抗原檢測(cè)（GM試驗(yàn)）產(chǎn)品名稱(chēng)：曲霉菌半乳甘露聚糖檢測(cè)試劑盒方法：競(jìng)爭(zhēng)法ELISA規(guī)格：96人份/盒檢測(cè)樣本：血清檢測(cè)物質(zhì)：半乳甘露聚糖抗原敏感性和特異性：敏感性83%，特異性90%檢測(cè)時(shí)間：2小時(shí)陰陽(yáng)性判斷：陽(yáng)性GM濃度≥0.95μg/L

疑似0.95μg/L>GM濃度≥0.75μg/L

陰性GM濃度<0.75μg/L獲得歐盟CE認(rèn)證獲得國(guó)家SFDA認(rèn)證一、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA)技術(shù)是以抗原、抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原或抗體的檢測(cè)與酶對(duì)底物的高效催化作用結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的免疫檢測(cè)技術(shù)。二、按反應(yīng)方式的不同，ELISA實(shí)驗(yàn)的方法分多種。本次推出的真菌抗原和抗體檢測(cè)產(chǎn)品分別采用了競(jìng)爭(zhēng)法和間接法。三、ELISA試驗(yàn)的操作過(guò)程由樣本處理、加樣、孵育、洗滌、顯色、終止等幾個(gè)基本環(huán)節(jié)組成。各環(huán)節(jié)的具體要求因產(chǎn)品而異。

ELISA的基本原理本公司使用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法，其原理是標(biāo)本中的抗原和酶標(biāo)板上包被的固相抗原均與試劑中半乳甘露聚糖抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多，與試劑中半乳甘露聚糖抗體結(jié)合越多，剩余的抗體與包被抗原結(jié)合的越少，抗原抗體結(jié)合物與酶標(biāo)抗體結(jié)合的越少，最后的顯色也愈淺。標(biāo)本和試劑反應(yīng)后所產(chǎn)生的OD值與標(biāo)本中待測(cè)定的GM含量成反比關(guān)系。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，便可以從反應(yīng)顯色的OD值上計(jì)算出待測(cè)標(biāo)本中GM的含量。Y包被抗原一抗Y標(biāo)本（含抗原）YY酶標(biāo)抗體底物YE洗滌Y包被抗原YYE包被抗原YE曲霉菌半乳甘露聚糖檢測(cè)（GM試驗(yàn)）試劑盒使用方法一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備二、樣本處理三、樣本混合四、樣本轉(zhuǎn)移五、洗滌六、加酶標(biāo)抗體七、洗滌后顯色八、讀數(shù)開(kāi)展GM實(shí)驗(yàn)需具備的基本條件單道及多道移液器高速離心機(jī)酶標(biāo)儀（450nm波長(zhǎng)）恒溫培養(yǎng)箱①②③④GM試驗(yàn)必需儀器設(shè)備1.酶標(biāo)儀：必須能使用450nm波長(zhǎng)用于檢測(cè)。2.高速離心機(jī)：必須達(dá)到10,000g離心力以上，一般迷你離心機(jī)達(dá)不到這個(gè)離心力的要求。如果離心機(jī)不能制冷，可在樣本經(jīng)沸水浴處理之后室溫冷卻15min再離心。3.37℃恒溫培養(yǎng)箱（或其他可替代的恒溫空氣浴設(shè)備）：必須設(shè)置溫度為37℃，其他溫度（如35℃）不可以使用，否則會(huì)影響檢測(cè)值，同時(shí)要保證恒溫箱的潔凈。4.沸水?。阂话愕碾姶艩t或者其他可以保證沸水浴的設(shè)備皆可，但暫不推薦干浴5.漩渦混合儀GM試驗(yàn)必需器具及耗材1.100μL和300μL多道移液器（排槍?zhuān)┘芭涮孜^：可以減少不同孔的加樣時(shí)間差。如果使用洗板機(jī)，無(wú)需用300μL多道移液器。2.100μL和1000μL單道移液器及配套吸頭3.配制洗液的量筒和保存洗液的試劑瓶4.混合板：必須用廠(chǎng)家標(biāo)配的混合板，可以有效地縮短轉(zhuǎn)移時(shí)間5.加樣槽：每種試劑使用專(zhuān)用加樣槽加樣，使用后清洗干凈。6.封板膜：需用戶(hù)根據(jù)每盒試劑做實(shí)驗(yàn)次數(shù)自備一部分備用7.浮漂：沸水浴使用數(shù)據(jù)處理軟件廠(chǎng)家提供的配套數(shù)據(jù)處理軟件推薦耗材：帶鎖扣的離心管：密閉性強(qiáng)，可以有效防止沸水浴時(shí)，EP管因加熱而導(dǎo)致蓋子彈開(kāi)和引入污染。也可以用普通離心管代替，但是注意離心管內(nèi)液面低于管外液面3mm左右即可，以保證沸水浴時(shí)管蓋不彈開(kāi)。選配儀器：微孔板孵育/振蕩器，洗板機(jī)，全自動(dòng)酶免分析儀推薦設(shè)備：酶標(biāo)儀：Bio-Tek：Elx808IU,Thermo：MultiskanFCwithincubator,Tecan：sunriseRC2.洗板機(jī)：

Bio-TekElx50GM實(shí)驗(yàn)操作流程預(yù)處理混勻，100℃水浴3min待測(cè)樣本(300μL)樣本處理液(100μL)+4℃，10000g離心10min取上清檢測(cè)樣本檢測(cè)取100μL對(duì)應(yīng)轉(zhuǎn)移到酶標(biāo)板內(nèi)洗板后加100μL酶標(biāo)抗體洗板后加100μL顯色液加50μL終止液并讀數(shù)37℃,30min37℃,30min37℃,30min37℃,15min60μL樣本與一抗1:1混合混合轉(zhuǎn)移加酶標(biāo)抗體顯色終止樣本采集與保存樣本種類(lèi)采集要求離心條件保存條件血清按采血管采血標(biāo)準(zhǔn)操作流程操作（建議使用含促凝劑的BD紅頭采血管）3000rpm,10-15分鐘原始標(biāo)本2-8℃保存48小時(shí)，血清-20℃以下保存一周一、試驗(yàn)前準(zhǔn)備產(chǎn)品全貌濃縮洗液20倍稀釋?zhuān)渲葡礈旃ぷ饕喝〕雒笜?biāo)板，根據(jù)需要拆分板條二、樣本處理100μL處理液取300μL血清+二、樣本處理1.沸水浴3min二、樣本處理2.10,000g離心10min三、樣本混合60μL樣本+60μL抗半乳甘露聚糖抗體水平震蕩混勻后，37℃溫浴30min。四、樣本轉(zhuǎn)移將混合液轉(zhuǎn)移至酶標(biāo)板貼好封板膜，37℃溫浴30min。轉(zhuǎn)移時(shí)各反應(yīng)孔一一對(duì)應(yīng)！五、洗滌3次

先甩盡孔中液體然后在吸水紙上拍干b.靜置40秒，甩盡孔中液體c.在吸水紙上拍干a.每次每孔加入300μL洗滌液bca重復(fù)此操作3次（可使用洗板機(jī)完成）a.每孔加100μL酶標(biāo)抗體b.貼好封板膜c.37℃恒溫30分鐘六、加酶標(biāo)抗體七、洗滌后顯色洗板3次加顯色底物加終止液并用酶標(biāo)儀讀取OD450值洗滌3次后每孔加100μL顯色底物37℃恒溫15分鐘后，加入終止液（50μL/孔）450nm波長(zhǎng)下讀數(shù)注意事項(xiàng)（1）4.洗滌操作時(shí)每孔的加樣量應(yīng)保持一致，拍板時(shí)應(yīng)確保孔內(nèi)無(wú)明顯液滴殘留。1.使用移液器時(shí)排液不宜過(guò)快，防止濺出孔外，也不宜過(guò)慢，以免增大不同樣本反應(yīng)時(shí)間的差異（用戶(hù)一定要使用多道移液器加樣；推薦使用抗原檢測(cè)產(chǎn)品配套耗材——混合板）。2.處理樣品時(shí)應(yīng)沸水浴，否則將影響結(jié)果。3.嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)要求控制孵育過(guò)程的溫度及時(shí)間，不能隨意變動(dòng)。試劑、血液樣本應(yīng)在適當(dāng)?shù)臏囟认卤４?，并避免反?fù)凍融。為了防止污染，請(qǐng)使用潔凈無(wú)菌的吸頭。配制洗液時(shí)要混合充分，并使用無(wú)菌去離子水或超純水。不能使用洗瓶洗滌酶標(biāo)板。試劑盒組分使用前請(qǐng)先取出30min，平衡至室溫。使用校驗(yàn)合格的移液器，移液器與吸頭請(qǐng)契合緊密，確保移液精準(zhǔn)。試劑盒中TMB底物溶液（R9）易氧化，盡量縮短開(kāi)蓋時(shí)間且避免強(qiáng)光照射，若溶液顏色變?yōu)闇\藍(lán)色時(shí)（正常使用時(shí)應(yīng)為無(wú)色），應(yīng)棄用。終止液具腐蝕性，易發(fā)生灼傷，在操作時(shí)請(qǐng)注意人身安全。各產(chǎn)品同時(shí)使用時(shí)，除濃縮洗液及終止液外，請(qǐng)勿將同一名稱(chēng)試劑互相替代使用。

注意事項(xiàng)（2）陰陽(yáng)性判定陽(yáng)性：GM≥0.95μg/L陰性：GM<0.75μg/L灰區(qū)：0.75≤GM<0.95μg/L，建議連續(xù)多次檢測(cè)并應(yīng)結(jié)合臨床資料綜合評(píng)價(jià)質(zhì)量控制R2a：試驗(yàn)OD值控制在1.0±0.3；R2e：試驗(yàn)OD值控制在0.5±0.2；空白對(duì)照：試驗(yàn)OD值控制在0.1以下。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：r2≥0.98如果沒(méi)有達(dá)到上述指標(biāo)，則影響分析的可靠性，檢測(cè)結(jié)果不予報(bào)告，需重新檢測(cè)。Bio-Enoche第一步：整理原始數(shù)據(jù)并復(fù)制1.將所有原始數(shù)據(jù)粘貼到EXCEL單元格內(nèi)。2.選定區(qū)域后復(fù)制單元格

123A0.90.6930.818B0.8280.830.821C0.7310.818

D0.6090.821

E0.4890.799

F0.9360.885

G0.8990.818

H0.810.693

復(fù)制區(qū)域數(shù)據(jù)處理第二步：粘貼到軟件的計(jì)算窗格內(nèi)在軟件初始界面直接點(diǎn)擊“粘貼”即可。第三步：選擇計(jì)算條件請(qǐng)從“請(qǐng)選擇檢測(cè)試劑盒的類(lèi)別”處選擇“曲霉菌半乳甘露聚糖檢測(cè)試劑盒

”，出現(xiàn)如下所示畫(huà)面：第四步：擬合曲線(xiàn)

點(diǎn)擊“回歸/擬合”，得到擬合好的曲線(xiàn)。“直線(xiàn)擬合”得到的曲線(xiàn)如下：第五步：計(jì)算樣本中的抗原濃度并判斷陰陽(yáng)性點(diǎn)擊“返回?cái)?shù)據(jù)按鈕”，出現(xiàn)如下畫(huà)面：第六步：數(shù)據(jù)保存、打印點(diǎn)擊保存數(shù)據(jù)按鍵，出現(xiàn)保存成功提示，之后點(diǎn)擊查詢(xún)鍵，出現(xiàn)打印頁(yè)面第八步：數(shù)據(jù)清場(chǎng)、退出軟件點(diǎn)擊清空鍵清除數(shù)據(jù)，之后點(diǎn)擊退出鍵退出軟件造成GM實(shí)驗(yàn)假陽(yáng)性的因素主要有：

（1）半合成青霉素，如哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉維酸（2）與其他細(xì)菌或真菌成分交叉反應(yīng)（3）腸道中定植的曲霉釋放GM進(jìn)入血液（4）谷物食物中存在GM（如大豆），通過(guò)受損腸粘膜進(jìn)入血液（5）接受白蛋白、免疫球蛋白和其他營(yíng)養(yǎng)液治療（6）血液透析（7）接受心肺旁路手術(shù)（8）自身免疫性肝炎等免疫性疾病（9）新生兒和兒童（FP83%，與雙歧桿菌交叉反應(yīng)）52GM試驗(yàn)干擾因素造成GM實(shí)驗(yàn)假陰性的因素主要有：（1）抗體多，抗原被抗體中和（2）釋放入血的半乳甘露聚糖不持續(xù)，而很快被清除（3）抗真菌藥物使用（如兩性霉素B、三唑類(lèi)藥物），抑制菌絲生長(zhǎng)從而減少GM分泌（4）局部感染，包括慢性肉芽腫（5）菌絲少，侵血管性弱（6）非粒細(xì)胞缺乏患者曲霉不同種，GM釋放量不同，因此在檢測(cè)結(jié)果上也有差異：煙曲霉和黃曲霉GM釋放量偏低；土曲霉、黑曲霉和構(gòu)巢曲霉GM釋放量較高。GM試驗(yàn)的臨床應(yīng)用表1GM試驗(yàn)結(jié)果判斷及臨床意義----------------------------------------------------------------------------------------------------------------診斷值

血清（cutoff）

臨床解釋----------------------------------------------------------------------------------------------------------------陰性值GM0.75μg/L如果無(wú)宿主因素和臨床表現(xiàn)可排除侵襲性曲霉菌感染陽(yáng)性值GM≥0.95μg/L如果有宿主因素和/或臨床表現(xiàn)可診斷侵襲性曲霉菌感染，

如無(wú)宿主因素和侵襲性曲霉菌感染臨床癥狀，則不能診斷灰色區(qū)間0.75≤GM0.95μg/L結(jié)合臨床和其他曲霉菌檢查綜合評(píng)判，并需動(dòng)態(tài)觀(guān)察

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------檢測(cè)結(jié)果的解釋2.多數(shù)臨床指南和專(zhuān)家認(rèn)為：GM試驗(yàn)連續(xù)兩次檢驗(yàn)陽(yáng)性才被認(rèn)定為具有診斷價(jià)值。3.GM試驗(yàn)僅是綜合評(píng)價(jià)中的指標(biāo)之一表2

27項(xiàng)GM試驗(yàn)診斷侵襲性曲霉?。↖A）薈萃研究結(jié)果[1]----------------------------------------------------------研究對(duì)象敏感度特異度-----------------------------------------------------------確診的IA

77%

81%確診或擬診IA

69%

93%骨髓移植患者82%

86%惡性血液腫瘤患者70%

92%實(shí)體器官移植患者22%

84%-----------------------------------------------------------結(jié)論：推薦GM試驗(yàn)用于惡性血液腫瘤和骨髓移植（HSCT）患者IA的篩查，而不推薦用于實(shí)體器官移植（SOT）患者IA的篩查。[1]PfoifferCD,etal.ClinInfectDis,2006,42:1417-1727

如果將G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)，有助于真菌屬的鑒別：

表3G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)的意義---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

種屬

G試驗(yàn)GM試驗(yàn)----------------------------------------------------------------------------------------------念珠菌屬

+

-鐮刀菌屬

+-隱球菌屬

--/可有假陽(yáng)性曲霉菌屬

++青霉素/擬青霉

+-/可有假陽(yáng)性接合菌綱

------------------------------------------------------------------------------------------------文獻(xiàn)報(bào)道[1]G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)可提高診斷的陽(yáng)性預(yù)期值和陰性預(yù)期值，保證診斷的可靠性（資料來(lái)源于對(duì)78例病人的分析）：

表4抗原檢測(cè)組合對(duì)診斷IPA的敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值----------------------------------------------------------------------------------------------------------抗原檢測(cè)組合

敏感度（%）

特異度（%）

陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（%）

陰性預(yù)測(cè)值（%）---------------------------------------------------------------------------------------------------------G2次88（28/32）64（21/33）58（23/40）92（35/38）GM2次72（23/32）91（30/33）89（32/36）78（33/42）G1次+GM1次84（27/32）88（29/33）87（45/52）88（23/26）----------------------------------------------------------------------------------------------------------[1]徐金富,李惠萍,瞿介明.兩種抗原聯(lián)合檢測(cè)對(duì)診斷侵襲性肺曲霉病的診斷價(jià)值.中華結(jié)核和呼吸雜志,2009,32(9):709-710

典型病例男性59歲因急性粒細(xì)胞白血病和肺炎住院。由于誘導(dǎo)化療后中性粒細(xì)胞減少到0.45109/L，出現(xiàn)持續(xù)性高熱，肺炎加重（見(jiàn)圖6）。G試驗(yàn)結(jié)果：271pg/ml，GM試驗(yàn)結(jié)果：1.67（定性法，參考范圍0.5）。肺組織活檢見(jiàn)圖所示。確診肺煙曲霉病。圖5患者x胸片顯示右肺致密陰影圖6肺組織鏡檢可見(jiàn)煙曲霉

近年來(lái)COPD并發(fā)侵襲性肺曲霉病（IPA）病例報(bào)道逐漸增多。COPD并發(fā)IPA原因和發(fā)病機(jī)制尚不明確。Guinea等[1]研究發(fā)現(xiàn)入院前3個(gè)月或入院至分離出曲霉時(shí)累計(jì)使用激素700mg強(qiáng)的松、入住ICU、慢性心衰、在入院前3個(gè)月曾接受抗生素治療是COPD并發(fā)IPA的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。機(jī)械通氣、侵入性操作和低白蛋白血癥也可能與之有關(guān)[2]。[1]GuineaJ,Torres-NarbonaM,GijonP,etal.Pulmonaryaspergillosisinpatientswithchronicobstructivepulmonarydisease:incidence,riskfactors,andoutcome.ClinMicrobiolInfect,2010,16:870-7[2]許虹，袁偉峰，王露霞，等。慢性阻塞性肺疾病患者曲霉感染25例。中國(guó)感染與化療雜志2010，10:143-146

研究都表明GM試驗(yàn)特異性較高，而敏感度波動(dòng)較大（29%-100%）。Mennink-Kersten等認(rèn)為[1]有以下幾個(gè)原因。（1）曲霉菌生長(zhǎng)和抗原釋放與周?chē)h(huán)境的營(yíng)養(yǎng)條件和pH有