cn.1bb3-苯基34硝基苯胺基14氯苯1丙酮作為非甾體雄激素受體調(diào)節(jié)劑用途

(19)中民國家知識

(10)公告號 (21)(22)200510026252.22005.05.27200680018500.1(73)專利權(quán)人中國藥物地址200031市太原路294號專利權(quán)人大學(72)王明偉鄧勇周彩紅楊大成惠昕蘇昊然高捷(74)專利機構(gòu)金信立方知識11225

A61P35/00(2006.01)A61P17/14(2006.01)A61P17/10 JP115771A,1999.01.12,全文.欄反應(yīng)式2.員黃麗娟朱梅A61K31/137A61P5/24A61P13/083-3-(4)-1-(4-氯苯基)-1-治療和/或預(yù)防雄激素受體相關(guān)(57)的3-苯基-3-(4-胺基)-1-(4-氯苯BB

權(quán)利要求書1說明書17頁附圖2 權(quán)利要求 1/1度雄激素依賴型或痤瘡癥狀或疾病的非甾體類藥物中的用途：3-苯基-3-(4-胺基)-1-(4-氯苯基)-1- [0003]本發(fā)明屬于藥物化學領(lǐng)域，涉及3-苯基-3-(4-胺基)-1-(4-氯苯 且不會擴散到身體其他部分。良性增生是泌尿外科最常見的疾病之一，已經(jīng)成為威“、脅健康的”。臨床統(tǒng)計表明在40-79歲期間良性增生癥的約為50％80歲后則高達80％。隨著生活節(jié)奏不斷加快良性增生患者日漸增多，且“、 SHMurrayT1998CA8 三個結(jié)構(gòu)域：N端結(jié)構(gòu)域(NTerminal，NTD))DNA結(jié)合域(DNABinding，JA1999J.Biol.Chem.274(52)37219-RM2000J.Mol.Endocrinol.24(3)339-原，Prostate-specificAntigen，PSA)[0008] 雄激素與其受體的作用機制包括一系列復雜而又精密的信號轉(zhuǎn)導過程，然而二者的特異性結(jié)合在其中扮演了不可替代的角色。很多AR系通過ARAR生/要5325-M1999，9611173-(Cyproterone 物后會出現(xiàn)“抗雄激素減退綜合癥”(AntiandrogenWithdrawalSyndrome，AWS)，表現(xiàn)AP2003LancetOncol.4(1)30-36LauferVJ1999Urology54(4)745]J2000Adv.Pharmacol.47317-[0010]本發(fā)明通過高通量隨機篩選和后繼構(gòu)效關(guān)系研究，合成并優(yōu)化了一類三個系列的非劑化合物或其藥學上可接受的鹽；[0012]本發(fā)明的另一目的在于提供上述通式I化合物的方法[0013]本發(fā)明的又一目的在于提供包含通式I化合物或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物；[0014]本發(fā)明的再一目的在于提供通式I化合物或其藥學上可接受的鹽在預(yù)防或/[0015]本發(fā)明提供的非甾體雄激素受體功能調(diào)節(jié)劑化合物或其藥學上可接受的鹽具有如下通式I的結(jié)構(gòu)：X CF3COORCONR2C1(CHR)n其中R的定義如上所述；C3～7R7R8和R9取代或任R7R8和R9取代的芳RR5R3 CF3COOR R10為C＝OCHOHCH＝ RR4X2物的具體結(jié)構(gòu)式如下： NaB下： 本發(fā)明的通式I化合物可與任何合適的酸通過藥學上常規(guī)成鹽的方法得到其藥物 本發(fā)明提供的藥物組合物包括治療有效量的一種或多種通式I化合物或其藥學 本發(fā)明所提供的藥物組合物其理想的比例是通式I化合物或其藥學上可接受的鹽作為活性成分占總重量比50％～99.5％其余部分為占總重量比50％以下。[0041]本發(fā)明I化合物或其藥學上可接受的鹽具AR拮抗活性，因而可用于[0042]1為說AR蛋白三個結(jié)構(gòu)域的示意圖[0043]圖2是MWW6032化合物和比卡魯胺在轉(zhuǎn)染了報告的MDA-MB-453細胞中的作用對比。二氫睪(DHT)誘導細胞中螢光素酶的表達從而使化學發(fā)光讀數(shù)增加，化合物對雄激素受體的拮抗作用表現(xiàn)為抑制DHT誘導的化學發(fā)光。[0044]圖3檢測MWW6032化合物和比卡魯胺對DHT誘導的LNCaP細胞增殖的影響結(jié)果顯化合物MWW6032對DHT刺激的LNCaP細胞增殖有一定的抑制作IC50值為2.28μM。[0045]4和圖5分別檢測化合物MWW6032和比卡魯胺對去勢大鼠在雄激素作用下前列 型。型。 物的前體藥物。[參見MedicinalChemistryABiochemicalApproach，OxfordYork1985pages388- 文中有所改并且一般為至少70優(yōu)選為至少80更優(yōu)為至少90最優(yōu)為至少95％ 實施者應(yīng)可理解對象為適于并愿意對由雄激素和/或雄激素受體功能失調(diào)引起或伴隨的前 寫或IUPAC-IUB頒布生化命名一致，除非特別說明。[0066] 緩沖劑防腐劑脂等。這種非腸道組合物的例子包括但不限制于5％W/V的右旋糖，射液體積大約從1毫升到2000毫升。根據(jù)給藥稀釋液量也會不同。包裝的針或針筒和/或包裝的墊?？扇芜x地包括供醫(yī)生或患者使用的說明書。[0079]將苯10.60克(0.1mol)4-氯苯胺12.76克(0.1mol)、無水乙醇150ml加入1)25.6173.2％31HNMR(CDCl7.79(2HdJH)7.123H)7.02(2HdJH)6.50(2HdJH)4.92(1HddJ7.4HzCH3.45(2HtJMS(FAB)350(M+H) [0084]將苯10.60克(0.1mol)4-溴苯胺17.20克(0.1mol)、無水乙醇150ml加入狀結(jié)晶28.0471.1％；31HNMR(CDCl7.79(2HdJH)7.123H)6.79(2HdJH6.42(2HdJH)4.91(1HddJ7.4HzCH)3.49(1HdJMS(FAB)395(M+H)。 [0089]將苯10.60克(0.1mol)4-胺13.82克(0.1mol)無水乙醇150ml加入反應(yīng)瓶中，室溫攪拌10分鐘后，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.1mol)和催化量的濃鹽然后于32℃攪拌反應(yīng)24小時。反應(yīng)結(jié)將反應(yīng)液冷卻析出的固體，并用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮于160ml95％乙醇中室溫攪拌1.5小時用飽和NaHCO3中和溶液至堿用少量無水乙醇洗滌濾品經(jīng)乙水混合溶劑(體積比11)重32.0488.9％3 1HNMR(CDCl7.79(2HdJH)7.78(2HdJ3H)7.2H)6.50(2HdbrsNH)5.07(1HtJ5.8HzCH)3.48(2HdJ5.8HzCH2)2.40(3HsCH3)361(M+H [0094]將苯10.60克(0.1mol)4-氨基苯甲酸13.72克(0.1mol)、無水乙醇140ml加入反應(yīng)瓶54-甲基苯乙酮13.42克(0.1mol)和催化量的濃鹽然后于32℃攪拌反應(yīng)20小時。反應(yīng)將反應(yīng)液冷卻析出的固體，并用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮于170ml95％乙室溫攪拌1.5小時用飽和NaHCO3中和85.1％6 ℃1HNMR(DMSO-7.86(2HdJ8.2HzAr-H)7.58(2HdJ6H)69H)6.51(2Hd)501HHMS(FAB6(+ 入反應(yīng)瓶中，室溫攪10后，加4基苯乙13.42(0.1mol和催化量的濃鹽然后于32℃攪拌反應(yīng)21小時。反應(yīng)結(jié)將反應(yīng)液冷卻析出的固體，并用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮于160ml95％乙室溫攪拌2小時用飽和NaHCO3中和溶量無水乙醇洗滌濾餅粗品經(jīng)混合溶劑(體積比11)24.0573.0％31HNMR(CDCl7.81(2HdJH)7.043mAr-H)6.55(2HdJH)4.95(1HddJ6.4Hz8.0HzCH)3.43(1HdJ6.4HzCH2)3.41(1HdJ8.0HzCH2)240(3HsH3).30(HsCH)M(A)330(M+H) 晶31.2382.0％；3 8.26(2HdJH)7.99(2HdJ3H)7.04(2HdJH)6.52(2HdJ6.2HzCH3.54(2HdJ [0109]將3-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-6.98克(0.02mol)和甲120ml加入反應(yīng)室溫攪拌至固體全溶解加入RaneyNi催化密閉反應(yīng)釜后用氫氣置換三然后于60～70℃通氫還原12小時。反應(yīng)結(jié)束冷卻至室溫濾，少量甲醇洗滌濾壓蒸得一粉末固合溶劑(體積比137.81(2HdJ8.4HzAr-H)7.117.40(7HmAr-，38.2HzAr-H)6.49(2HdJ8.2HzAr-H5.05(1HtJ7.1HzCHOH)4.941H，7.4HzCH3.51(2HmCHMS(FAB351M+[0114]33-(4苯胺1-(4甲基苯13.510.01mol催化量對甲苯磺酸和甲苯80ml加入反應(yīng)瓶回流攪拌反應(yīng)3小時。反應(yīng)依次用飽和NaHCO3水溶液和飽和經(jīng)無水Na2SO437.82(2HdJ8.4HzAr-H)7.167.42(7HmAr-，3H)6.63(1HddJ16.2Hz7.4HzCH)6.46(2HdJ16.2HzCH)4.94(1HdJ7.4HzCH)2.45(3HsCH3)MS(FAB)334(M+H) 37.76(2HdJ7.6HzAr-H)7.127.42(7HmAr-，37.4HzCH)3.45(2HtJ7.4HzCH2)2.78(4HmCH2)1.55(6HmCH2)307(M [0124]將苯10.60克(0.1mol)哌啶8.52克(0.1mol)無水乙醇180ml加入反應(yīng)瓶3 H)7.96(2HdJ7.49(5HmAr-H4.89(tJ6.2HzCH3.54(2HdJ6.2HzC22.75(4H，338(M+3 [0129]將乙4.840.11mol412.760.1mol無水150ml加入反37.81(2HdJH)7.30(2HdJ37.05(2HdJ8.6HzArH6.47(2HdJ8.6zAr-H4.75(1HmCH3.43(2Ht，288(MH [0134]將異丁7.300.1mol4氯苯12.760.1mol無水150ml加入反37.82(2HdJH)7.28(2HdJ3H)6.51(2HdJH4.75(1HmCH)3.43(2HmCH)0.98(6HdJ6.4Hz2CH3)MS(FAB)[0136][0137]1.[0138]1.1質(zhì)粒和細胞株：雄激素受體表達質(zhì)粒和熒光素酶報告質(zhì)粒由國家新藥篩選中心構(gòu)建人細胞株MDA-MB-453和人癌細胞株LNCaP均購自ATCC[0139]1.2試劑胎牛(Fetalbovineserum，F(xiàn)BS，GIBCO/BRL，USA)活性炭和葡糖處理胎牛(CD-FBS，Hyclone，USA)DMEM及RPMI1640培養(yǎng)基(GIBCO/BRL，USA)；IMEM培養(yǎng)基(Bioresource，USA)，熒光素酶檢測試劑盒(PromegaCorporation，USA)；[閃爍液(SuperMixTM，PerkinElmer，USA)雄激素受體蛋白為該受體在昆蟲細胞中的[0140]1.3Envision2101MultilabelReader(PerkinElmer，USA)WallacVERSAmaxMicroplateReader(MolecularDevices，USA)。[0141]2.[0142]2.1受體結(jié)合測[0143]以DMSO配制表1中示出的DHT和本發(fā)明的各化合物的梯度溶液，DHT濃度依次為00. nM化合物濃度依次為00.1280.643.216804002000nM，分別加5μl各梯度DHT或待測化合物溶液至排管各孔中。將雄激素受體蛋白加入預(yù)先配有1μg/μl抑肽酶(Aprotinin)及亮抑酶肽(Leupeptin)等蛋白酶抑制劑的緩沖液(25mM10％NaoO410mDHT充分混勻后，迅速按每孔195μl的量加入排管中，4℃孵育過夜。孵育完畢后，在排管每孔中加入50μl羥基磷灰石(HA)溶液(25％HA25mMNa3PO4pH7.4)震蕩混勻，孵育10分鐘其間每三分鐘震蕩一次。2500rpm離心3分鐘吸走上清液保留沉淀。每孔加1吸走上清液保留沉淀每孔300μl閃爍液蕩混勻，用WallacTriLux1450讀數(shù)。其中9個化合物對雄激素受體的親和力與陽性藥物DHTIC50值小于10nM(見表1)。[0144]表1化合物對雄激素受體的結(jié)合測 6.4322MWW6032[0149]2.3癌細胞株增殖檢[0150]LNCaP10％FBS2mML(L-glutamine)RPMI1640培養(yǎng)基中。實驗前一天換成含5％CD-FBS的RPMI1640培養(yǎng)待長至90％融用胰酶消化后4000/90μL/孔加入96孔板，37℃培養(yǎng)過夜。將待測化合物以一定濃度稀釋后以的濃度依次05.1225.6128640320016000nM30分鐘后加入激動劑DHT(終濃5nM)。37℃培6第三天時換藥一次。培養(yǎng)結(jié)束前加入MTT溶液(5mg/mL20μL/孔，測560nm690nm實驗數(shù)據(jù)如圖3DHT刺激的LNCaP細[0151]2.4大鼠動物模型檢測化合物的雄激素受體拮抗[0152]3周齡SD大鼠24只6組別為對1)，睪(Testosterone2睪酮(T比卡魯胺(Casodex)253睪酮(T比卡魯(Casodex)504)(T)+