標(biāo)準(zhǔn)解讀

GB/T 17999.1-1999是一項(xiàng)關(guān)于SPF雞（無(wú)特定病原體雞）的紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了如何利用紅細(xì)胞凝集抑制現(xiàn)象來(lái)檢測(cè)SPF雞體內(nèi)是否存在針對(duì)特定抗原的抗體，常用于傳染病的診斷和疫苗效果評(píng)估。以下是該標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容概述：

標(biāo)準(zhǔn)適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于評(píng)估SPF雞血清中對(duì)特定抗原（如禽流感病毒、新城疫病毒等）的免疫反應(yīng)，通過(guò)紅細(xì)胞凝集抑制（HI）試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定。

試驗(yàn)材料

  • SPF雞紅細(xì)胞：需來(lái)源于無(wú)特定病原體的健康雞，經(jīng)過(guò)適宜處理以保證試驗(yàn)的敏感性和特異性。
  • 抗原：應(yīng)為純化或標(biāo)準(zhǔn)化的抗原，如病毒抗原，確保試驗(yàn)的一致性和可比性。
  • 血清樣本：從待測(cè)SPF雞中采集，處理后用于檢測(cè)抗體水平。
  • 生理鹽水、磷酸鹽緩沖液等試劑，用于配制溶液和洗滌。

試驗(yàn)步驟

  1. 紅細(xì)胞懸液準(zhǔn)備：按照規(guī)定濃度制備紅細(xì)胞懸液。
  2. 血清稀釋：將待測(cè)血清按一定梯度稀釋。
  3. 抗原添加：向血清稀釋液中加入已知量的抗原，并孵育使抗體與抗原結(jié)合。
  4. 紅細(xì)胞加入與孵育：將上述混合物與紅細(xì)胞懸液混合，孵育以觀察凝集現(xiàn)象。
  5. 觀察與記錄：根據(jù)紅細(xì)胞是否凝集來(lái)判斷抗體的存在及其效價(jià)。

結(jié)果判定

  • 凝集現(xiàn)象：如果血清中含有相應(yīng)抗體，會(huì)抑制紅細(xì)胞與抗原的凝集，表現(xiàn)為不凝集或部分凝集。
  • 抗體滴度：通過(guò)血清的最高稀釋度仍能抑制凝集來(lái)確定抗體的滴度，即HI滴度。

試驗(yàn)條件與質(zhì)量控制

標(biāo)準(zhǔn)還強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化，包括環(huán)境溫度、孵育時(shí)間、操作手法的一致性，以及設(shè)立陽(yáng)性和陰性對(duì)照的重要性，以確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

記錄與報(bào)告

要求詳細(xì)記錄試驗(yàn)過(guò)程、所用材料批號(hào)、試驗(yàn)結(jié)果等，以便追溯和審核。報(bào)告中應(yīng)包含所有必要的試驗(yàn)細(xì)節(jié)及最終的HI滴度結(jié)果。


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  • 已被新標(biāo)準(zhǔn)代替，建議下載現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)GB/T 17999.2-2008
  • 1999-11-10 頒布
  • 2000-04-01 實(shí)施
?正版授權(quán)
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TCS.65.020.30B41中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17999.1—1999SPF雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)SPFchicken-Hemagglutinationinhibitiontest1999-11-10發(fā)布2000-04-01實(shí)施國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

GB/T17999.1-1999本標(biāo)準(zhǔn)以我國(guó)建立的HI方法為基礎(chǔ),參照美國(guó)SPAFAS公司的有關(guān)操作規(guī)程.規(guī)定了SPF雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)SPF雞微生物學(xué)質(zhì)量控制國(guó)家系列標(biāo)準(zhǔn)包括SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測(cè)總則和9種SPF雞微生物學(xué)檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)為《SPF雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)》。SPF雞微生物學(xué)檢測(cè)方法還包括以下部分：GB/T17999.2—1999SPF雞血清中和試驗(yàn);GB/T17999.3—1999SPF雞血清平板凝集試驗(yàn);GB/T17999.4—1999SPF雞瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)；GB/T17999.5—1999SPF雞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);GB/T17999.6-1999SPF雞胚敏感試驗(yàn)：GB/T17999.7—1999SPF雞雞白癇沙門氏菌檢驗(yàn);GB/T17999.8-1999SPF雞，試管凝集試驗(yàn)；GB/T17999.9—1999SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部、國(guó)家科學(xué)技術(shù)部提出本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)司歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心、山東省農(nóng)科院家禽研究所本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳德威、趙立紅、靳彥華、張秀美、李軍。

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17999.1-1999SPF雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)SPFchicken--Hemagglutinationinhibitiontes11范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)所用試劑、材料,操作程序及結(jié)果判定等本標(biāo)準(zhǔn)適用于SPF雞感染以下病原微生物后的血凝抑制抗體監(jiān)測(cè)：禽流感病毒（A型）AvianInfluenzaVirus(TypeA），傳染性支氣管炎病毒（InfectiousBronchitisVirus）新城疫病毒（NewcastleDiseaseVirus），禽腺病毒I群(減蛋綜合癥）（AvianAdenovirusGroupI），雞毒支原體（MycoplasmaGallisepticum）,滑液囊支原體(MycoplasmaSynoviae)。2原理許多病毒具有凝集動(dòng)物紅細(xì)胞的能力，這種凝集紅細(xì)胞的能力能被特異性抗體所抑制.因此可用已知病毒檢測(cè)相應(yīng)的血凝抑制性抗體3試劑和器材3.1試劑3.1.1血凝抗原3.1.2陰性、陽(yáng)性血清。3.1.3被檢血清。3.1.4紅細(xì)胞、3.1.50.85%生理鹽水。3.1.6阿氏液3.2器材3.2.196孔微量血凝板(U型）3.2.2微量移液器(TD10L.～200L.)及吸頭3.2.3水浴鍋。3.2.4離心機(jī)與錐形刻度離心管。4操作程序4.1抗原血凝效價(jià)測(cè)定4.1.110%和0.5%雞紅細(xì)胞液的制備4.1.1.1采雞血:用注射器吸取阿氏液約1mL.取3日齡～10日齡SPF雞(最少兩只),從胸骨尖下方約1.3cm處將注射器針頭刺入心臟,吸取心血約2mL～4mL,與阿氏液輕輕混合，放入裝有10mL阿氏液的離心管中。4.1.1.2洗滌雞紅細(xì)胞：將離心管中的血液經(jīng)1500r/min～1800r/min離心8min.棄上清液，沉淀物加入阿氏液，輕輕混合后,再經(jīng)

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