抗核抗體ANA檢測與臨床應用精品課件

自身免疫抗體檢測及臨床意義

2021/4/261抗核抗體（ANA）檢測與臨床應用2021/4/262ANA的靶抗原分布：細胞核整個細胞，包括細胞核、細胞漿、細胞骨架、細胞分裂周期蛋白等。ENA：抗可提取核抗原，包括RNP/Sm,

Sm,

SS-A,

SS-B,

Scl-70和Jo-1等

六種靶抗原

抗核抗體的定義傳統(tǒng)定義：針對細胞核成分的自身抗體的總稱。廣義定義：針對細胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對ANA的理

解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗體的總稱2021/4/263

ANA可見于多種疾病，特別是結締組織疾病，常作為結締組織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標高滴度ANA則高度提示自身免疫性疾病在非結締組織病中也可出現(xiàn)陽性；正常人中（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽性，但滴度低目前，ANA檢測已成為臨床上的一個極重要的自身免疫病的篩查實驗。ANA檢測的臨床意義2021/4/264ANA檢測的臨床意義

系統(tǒng)性紅斑狼瘡

活動期

非活動期

藥物誘導的紅斑狼瘡混合性結締組織病（MCTD、Sharp綜合征）

類風濕性關節(jié)炎

進行性系統(tǒng)性硬化癥

多發(fā)性肌炎及皮肌炎

干燥綜合征

慢性活動性肝炎

潰瘍性結腸炎

其它風濕病

正常人95－10080－10010010020－4020－5085－9530－5070－8030－40265-102021/4/265美國風濕學會(ACR)立場聲明?HEp-2細胞包含大約100至150種自身抗原?其它初篩方法僅具有少量自身抗原…大約35%

SLE患者和IFT-ANA陽性患者在其它初篩實驗中為陰性結果…建議：?

IIFT-ANA仍然為ANA檢測的金標準?醫(yī)院或商業(yè)診斷所應用其它ANA檢測方法時，必須要求為臨床大夫提供足夠的數(shù)據(jù)證明其它ANA檢測方法與IFT比較具有同樣或更高的敏感度和特異性?實驗室在ANA報告當中必須注明ANA檢測方法2021/4/266EUROIMMUNANA篩查:間接免疫熒光法(IFT)抗原譜完整(細胞核、細胞漿)檢測ANA的金標準，具有很高的敏感性和特異性基質(zhì)組合:

HEp-2細胞+靈長類肝2021/4/267HEp-2細胞:篩查不同的自身抗體

均質(zhì)型核膜型

核點型核糖體P蛋白著絲點型

AMA

核仁型高爾基體Scl-70溶酶體

Sm/RNP肌動蛋白SS-A/SS-B

波形蛋白2021/4/268系統(tǒng)性紅斑狼瘡

(SLE)ANCA

相關性血管炎慢性炎癥性結締組織病

(CICTD)

干燥綜合征

(SS)

Systemischer

LupusErythematodes

(SLE)

dsDNA系統(tǒng)性硬化癥

(SSc)

Scl

-70

and

CenpB

SS-A

and

SS-B

慢性炎癥性結締組織病

(CICTD)多肌炎/皮肌炎

(PM/DM)

Myositis

Profile

夏普綜合征

(MCTD)

RNP

Rheumatoide

Arthritis

(RA)EUROIMMUN2021/4/269系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)紅斑狼瘡的特點臨床醫(yī)生:容易誤診的一類致死性疾病免疫學家:所有免疫系統(tǒng)的要件均參與致病機理產(chǎn)生過程臨床發(fā)病特點發(fā)病率:

40/100,000(北歐);200/100,000(黑人);250,000

(美國)患者壽命:4年/50%(1950);

15/80%(當前);

20歲診斷/35歲死亡幾率1:62021/4/26109、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:37:51PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/3以上受累;96%)EUROIMMUNSLE

–各器官的表現(xiàn)關節(jié)炎(至少2個關節(jié)血液系統(tǒng)受累(貧血等;

60%)狼瘡腎炎(51%)漿膜炎(胸膜炎,心包炎;

77%)神經(jīng)系統(tǒng)受累(30%)皮膚(蝴蝶狀皮疹,盤狀狼瘡;

74%)2021/4/2612系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)

代表性的抗體抗dsDNA抗體抗核小體抗體抗Sm抗體抗核糖體P蛋白抗體30-90%50-95%

5-10%

5-15%

EUROIMMUN2021/4/2613EUROIMMUN

核均質(zhì)型HEp-2細胞/猴肝HEp-2細胞猴肝2021/4/2614

抗dsDNA抗體-檢測方法:

IIFT,

Farr-法(RIA),

ELISA

or

Blot

IIFT

dsDNAHEp-2細胞綠蠅短膜蟲

2021/4/2615高度特異性抗體;

70%患者陽性，0.5%正常人或RA患者陽性滴度與疾病活動性相關，但不適用于所有患者抗體滴度上升但臨床癥狀不明顯的患者，抗體檢測后5年內(nèi)80%患者進入活動期抗dsDNA抗體與SLE2021/4/2616最新版“Autoantibodies”描述不同實驗方法的結果并無可比性：1、抗原來源不同；2、抗原展現(xiàn)形式不同；3、實驗體系反應條件不同。2021/4/2617核均質(zhì):抗核小體抗體(ANuA)靶抗原:dsDNA-組蛋白-復合物的構象決定簇方法:IIFAELISA,

Blot臨床意義:SLE,陽性率50-95%

(特異性100%)2021/4/2618EUROIMMUN

抗核小體ELISA:敏感性、特異性、疾病活動度

ANuA與疾病的活動性相關性強(SLE

DAI

score)

分組

SLE

干燥綜合癥

皮肌炎/多肌炎

系統(tǒng)性硬化癥類風濕/骨關節(jié)炎

強直性脊柱炎

健康對照組

特異性

n233

41

40

33

60

20

31225抗核小體陽性

144(61.8%)

1(2.4%)

1(2.5%)

1(3.0%)

1(1.7%)

0

0

98.2%Su

et

al.,

Clin

Immunol

122:

115-120,

20072021/4/2619LNTP

(%)

LN(%)CON

(%)

ANuAAnti-dsDNA79431841

933LNTP=lupusnephritisrequiringrenaltransplantation（狼瘡腎炎需要腎移植）LN=biopsyprovenlupusnephritis（腎活檢確診為狼瘡腎炎）CON=SLEpatientswithoutnephritis（無腎炎SLE患者）伴有狼瘡腎炎的嚴重SLE的生物標記物

ANuA與狼瘡性腎炎Stinton

et

al.,

Lupus

15:

394-400,

2007

?狼瘡腎炎是SLE的一種潛在的嚴重并發(fā)癥(高達50%)

?~

1.2%需要進行腎移植的患者有狼瘡腎炎2021/4/2620EUROIMMUN抗U1-nRNP與Sm抗體HEp-2細胞猴肝2021/4/2621HEp-2細胞

抗U1-nRNP與Sm抗體抗U1-nRNP/Sm抗體

抗Sm抗體

SLE

抗U1-nRNP抗體

SLE

Sharp綜合征

(MCTD)EUROIMMUN2021/4/2622抗U1-nRNP與Sm抗體SLE:

15-40%MCTD:

95-100%

SLE:

5-30%

EUROIMMUN

抗U1-RNP抗體

抗Sm抗體Function:Pre-mRNAsplicing2021/4/2623EUROLINEANA譜最多18種抗原，

增加了RNP亞單位自動化操作全自動化結果判讀2021/4/2624EUROIMMUN實驗結果的解釋（ANA譜）：

抗U1-nRNP/Sm和Sm抗體抗nRNP/Sm

抗體抗Sm抗體結果解釋-?+

-++

--+

-+U1-nRNP:Sm:

-U1-nRNP:Sm:

+U1-nRNP:Sm:

-結果不可靠陰性SLESLE或MCTD無2021/4/2625EUROIMMUN抗核糖體P蛋白抗體HEp-2細胞猴肝2021/4/2626

40

S亞單位

60

S亞單位P0P2

P2according

to:

Mahler

et

al.,

J

Mol

Med,

2003抗原:核糖體60S亞單位的3個蛋白：P0,

P1,

P2.在羧基末端有相同的免疫反應表位。核糖體P抗原的五聚體復合物。

P1

P1核糖體

P蛋白2021/4/2627核糖體P蛋白ELISA:

敏感性和特異性(1)群組SLE其他結締組織病*健康獻血員

n360

79206抗核糖體P蛋白陽性數(shù)

34(9.4%)

0%

0%

*系統(tǒng)性硬化癥,干燥綜合癥,皮肌炎/多肌炎對SLE

100%特異

EUROIMMUN2021/4/2628核糖體P蛋白ELISA:

敏感性和特異性(2)

群組

SLE

MCTD

SS

SSc

RA

HD特異性

n185

21

55

66

89100310抗核糖體P蛋白陽性數(shù)

10(5.4%)

0

0

0

0

0

100%

EUROIMMUN2021/4/2629EUROIMMUNHEp-2細胞增殖型細胞核抗原

(PCNA)

Hep-2細胞猴肝2021/4/2630增殖型細胞核抗原(PCNA)靶抗原:表達為細胞周期依賴性(S-期)三聚體(36

kDa)，是DNA多聚酶的輔因子并參與DNA修復調(diào)控檢測:IIFT,

Blot臨床意義:SLE高特異性(陽性率3-7%),與腎臟和CNS及血小板減少相關2021/4/2631系統(tǒng)性紅斑狼瘡

(SLE)ANCA

相關性血管炎慢性炎癥性結締組織病

(CICTD)

干燥綜合癥

(SS)

Systemischer

LupusErythematodes

(SLE)

dsDNA系統(tǒng)性硬化癥

(SSc)

Scl

-70

and

CenpB

SS-A

and

SS-B

慢性炎癥性結締組織病

(CICTD)多肌炎/皮肌炎

(PM/DM)

Myositis

Profile

夏普綜合癥

(MCTD)

RNP

Rheumatoide

Arthritis

(RA)EUROIMMUN2021/4/2632

干燥綜合征（Sj?gren’s

Syndrome）外分泌腺受累的自身免疫疾病癥狀:

-口腔干燥

-唾液及眼淚減少-腮腺腫脹口腔干燥-胰腺外分泌腺分泌不足

腮腺腫脹

EUROIMMUN2021/4/2633干燥綜合征

SS-A(60kDa)SS-B(47kDa)40-95%40-95%

代表性抗體2021/4/2634EUROIMMUN抗SS-A/SS-B抗體HEp-2細胞猴肝2021/4/2635SS-A抗原Boire

et

al.,

1995:

-

Ro-52抗體不與SS-A抗原結合-純化的SS-A抗原不包含Ro-52RNA

+

SS-A

(60

kDa)

+

Ro-52

hY-RNARNA

+

SS-A

(60

kDa)

hY-RNA2021/4/2636SS-A

(Ro-60),

Ro-52

and

SS-B干燥綜合癥:40-95%SLE:20-60%新生兒狼瘡:抗SS-B抗體干燥綜合癥:SLE:新生兒狼瘡:40-95%10-20%

78%抗Ro-52

(52

kDa)抗體

非特異

EUROIMMUN功能:調(diào)控RNA翻譯

抗SS-A

(60

kDa)抗體功能:RNA聚合酶III輔助蛋白

96%X2021/4/2637EUROIMMUN抗Ro-52抗體:不同組別中均可出現(xiàn)2021/4/2638

抗Ro-52抗體:風濕性疾病中的陽性率疾病干燥綜合癥系統(tǒng)性硬化癥肌炎SLEMCTDRA

n

88

81

26210

21165抗Ro-52抗體陽性

81

%

28

%

31

%

38

%

19

%

5%

抗Ro-52抗體在干燥綜合癥中陽性率較高，但沒有疾病特異性Meyer,

Schlumberger

et

al.,

4th

Asian

Congress

on

Autoimmunity,

Singapore,

Sept.

2009

EUROIMMUN2021/4/2639

Anti-Ro52:肝臟疾病中的陽性率疾病PBCAIHHBVHCV獻血員

n100

60

50

50

50抗Ro-52抗體陽性

27%

35%

10%

22%

0

抗Ro-52抗體沒有疾病特異性Meyer,

Schlumberger

et

al.,

4th

Asian

Congress

on

Autoimmunity,

Singapore,

Sept.

2009

2021/4/2640系統(tǒng)性紅斑狼瘡

(SLE)ANCA

相關性血管炎慢性炎癥性結締組織病

(CICTD)

干燥綜合癥

(SS)

Systemischer

LupusErythematodes

(SLE)

dsDNA系統(tǒng)性硬化癥

(SSc)

Scl

-70

and

CenpB

SS-A

and

SS-B

慢性炎癥性結締組織病

(CICTD)多肌炎/皮肌炎

(PM/DM)

Myositis

Profile

夏普綜合癥

(MCTD)

RNP

Rheumatoide

Arthritis

(RA)EUROIMMUN2021/4/2641

系統(tǒng)性硬化癥(SSc)血管與結締組織受累的自身免疫疾病癥狀:

-指端硬化(thin,

sclerotic

fingers)

-爪型手

-面具臉(嘴周邊出現(xiàn)皺紋,嘴唇變薄)

-毛細血管擴張(表面血管永久性擴張)

-表皮鈣質(zhì)沉著(血管壁與皮膚鈣化)指端硬化，爪型手毛細血管擴張面具臉EUROIMMUN質(zhì)沉著皮膚鈣2021/4/2642EUROIMMUN系統(tǒng)性硬化癥實驗室結果和臨床數(shù)據(jù)的聯(lián)合分析，有助于降低疾病診斷的模糊性，同時為未來研究硬化癥提供基礎。2021/4/2643系統(tǒng)性硬化癥(SSc)

代表性抗體抗著絲點抗體抗Scl-70抗體抗原纖維蛋白抗體抗RNA多聚酶抗體抗PM-Scl抗體12-43%18-30%

6-8%

2-23%

1-16%

EUROIMMUN2021/4/2644EUROIMMUN

抗著絲點抗體HEp-2細胞/猴肝HEp-2細胞猴肝2021/4/2645EUROIMMUN抗著絲點抗體靶抗原:著絲點-DNA聯(lián)合蛋白:

著絲點蛋白(A,

B,

C,

D)檢測方法:IIFT,

ELISA,

Blot臨床意義:局限性硬皮病(CREST綜合癥):經(jīng)常出現(xiàn)在:硬皮病-PBC-重疊綜合癥2021/4/2646EUROIMMUN

抗Scl-70抗體HEp-2細胞/猴肝HEp-2細胞猴肝2021/4/2647細胞核仁:抗Scl-70抗體靶抗原:DNA-拓撲異構酶I

(100

kDa)DNA雙螺旋復制和轉(zhuǎn)錄檢測方法:IIFA,

ELISA,

Blot臨床意義:彌散性硬皮病的診斷標志(50-75%).預后:較著絲點陽性的患者病情更嚴重。2021/4/2648抗著絲點B蛋白抗體與

抗Scl-70抗體系統(tǒng)性硬化癥

n

=

295

抗

Scl-70

抗體陽性

陰性抗著絲點

B

蛋白抗體陽性陰性

166106122

59%

系統(tǒng)性硬化癥患者分別出現(xiàn)抗著絲點抗體或抗Scl-70抗體陽性

EUROIMMUN2021/4/2649EUROIMMUN抗RNA聚合酶I抗體

HEp-2細胞/猴肝HEp-2細胞猴肝2021/4/2650抗原纖維蛋白抗體

HEp-2細胞/猴肝HEp-2細胞

猴肝EUROIMMUN2021/4/2651EUROIMMUN

抗PM-Scl抗體HEp-2細胞/猴肝HEp-2細胞猴肝2021/4/2652抗PM-Scl抗體靶抗原:PM-Scl:

11到16個多肽復合物在rRNA和一些U-snRNAs剪接中起作用(PM-Scl-100,

PM-Scl-75)檢測方法:IIFT,

ELISA,

Blot臨床意義:重疊綜合癥的診斷標志，表現(xiàn)為肌炎和硬皮病癥狀(陽性率50-70%).2021/4/2653EUROLINE系統(tǒng)性硬化癥譜一個實驗膜條包括13種高特異性純化抗原系統(tǒng)性硬化癥(SSc)血清學診斷

EUROBlotMaster自動化操作

EUROLineScan軟件全自動結果判讀2021/4/2654患者血清:129份SSc血清和202份對照血清[50PM/DM,50SLE,42RA,60HD]所有抗原的血清命中率為:

85.3%.系統(tǒng)性硬化癥相關抗體Meyer

et

al.,

7th

Congress

on

Autoimmunity

in

Ljubljana,

May

20102021/4/2655Arthritis

Research

&

Therapy

(in

press).

相關參考資料

Antibodies

against

PM/Scl-75

and

PM/Scl-100

are

independent

markers

for

different

subsets

of

systemic

sclerosis

patients.

K.Hanke,C.Brückner,C.D?hnrich,D.Huscher,L.

Komorowski,W.Meyer,A.Janssen,M.Backhaus,M.Becker,

A.Kill,K.Egerer,G.R.Burmester,F.Hiepe,W.Schlumberger

andG.Riemekasten

Arthritis

Research

&

Therapy

,

2009:

11Diagnostic

value

of

anti-topoisomerase

I

antibodies

in

a

large

monocentric

cohort.HankeK,D?hnrichC,BrücknerCS,HuscherD,BeckerM,JansenA,MeyerW,EgererK,HiepeF,BurmesterG,SchlumbergerW,RiemekastenG.2021/4/2656系統(tǒng)性紅斑狼瘡

(SLE)ANCA

相關性血管炎慢性炎癥性結締組織病

(CICTD)

干燥綜合癥

(SS)

Systemischer

LupusErythematodes

(SLE)

dsDNA系統(tǒng)性硬化癥

(SSc)

Scl

-70

and

CenpB

SS-A

and

SS-B

慢性炎癥性結締組織病

(CICTD)多肌炎/皮肌炎

(PM/DM)

Myositis

Profile

夏普綜合癥

(MCTD)

RNP

Rheumatoide

Arthritis

(RA)EUROIMMUN2021/4/2657-皮膚癥狀:-紅斑-膝蓋/手指關節(jié)處皮膚異變-皮膚褪色

多肌炎/皮肌炎(PM/DM)皮膚與肌肉受累的自身免疫疾病癥狀:

-肌肉疼痛/肌無力(如：肩膀/骨盆)2021/4/2658多肌炎/皮肌炎(PM/DM)

代表性抗體Jo-1Mi-2(esp.inDM)PM-Scl(PSS-重疊綜合征)PL-7PL-1225-35%15-30%

8%

3-6%

3%2021/4/2659EUROIMMUN

抗Jo-1抗體HEp-2細胞/猴肝HEp-2細胞猴肝2021/4/2660胞漿顆粒:抗Jo-1抗體靶抗原:Jo-1

(組胺酰-tRNA合成酶)檢測方法:IIFA,

ELISA,

Blot臨床意義:對多肌炎具有高度特異性(陽性率25-35%)Jo-1:病情嚴重的標志。常與肺纖維化有關(70%)2021/4/2661EUROIMMUN氨?；?tRNA-合成酶氨?；?tRNA合成酶Jo-1:組氨酰l-tRNA合成酶PL-7:蘇氨酰基-tRNA合成酶PL-12:丙氨酰-tRNA合成酶OJ:異亮氨酸-tRNA合成酶EJ:甘氨酰-tRNA合成酶2021/4/2662EUROIMMUN

抗Mi-2抗體HEp-2細胞/猴肝HEp-2細胞猴肝2021/4/2663細胞核顆粒:Anti-Mi-2靶抗原:多組分系統(tǒng);與組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶和核小體重塑活性有關的主要抗原(218kDa)臨床意義:肌炎5-15%

(主要是皮肌炎)2021/4/2664EUROIMMUN

抗Ku抗體HEp-2細胞/猴肝HEp-2細胞猴肝2021/4/2665細胞核顆粒:抗Ku抗體(p70/p80)靶抗原:DNA結合的非組蛋白和DNA依賴的蛋白酶異源二聚體分析方法:IIFA,

Blot臨床意義:PM/Scl-重疊綜合癥30-55%SLE

5-10%2021/4/2666EUROIMMUN其他與肌炎相關的抗體Anti-SRPAnti-PL-12HEp-2細胞HEp-2細胞2021/4/2667EUROLINE肌炎相關抗原一個膜條上包括7或11種高度純化抗原(新:

PM-Scl,

SRP,

EJ,

OJ)

DM和PM及原發(fā)性肌炎的血清學診斷

EUROBlotMaster自動化操作

EUROLineScan全自動化判讀結果2021/4/2668153份肌炎患者血清[50DM,89PM,4juvenileDM,10IBM]77份對照血清[26SjS,26SLE,25SSc]

Anti-Mi-2KuPM-Scl100Jo-1PL-7PL-12SRPPrevalence

3%

3%

7%

12%

2%

0%

5%Specificity

100%

97%

100%

99%

100%

100%

97%

EUROLINE肌炎相關抗原患者血清:

所有抗原的血清學命中率:

26%.R?nnelid

et

al.,

Autoimmun

Rev,

2009

EUROIMMUN2021/4/2669患者血清:208份肌炎患者血清214份對照血清[50HD,65SLE,34SSc,21SjS,13非自身免疫性肌病,23CTD-相關性肌炎,8關節(jié)病]Anti-Prevalence

SpecificityMi-2KuPM-Scl100Jo-1PL-7

or

PL-12

4%

5%

4%21%

4%

98%

95%100%100%100%EUROLINE肌炎相關抗原

所有抗原的血清學命中率:

37%.Ghirardello

et

al.,

Autoimmun

Rev,

2009

EUROIMMUN2021/4/2670Use

of

a

commercial

line

blot

assay

as

a

screeningtest

for

autoantibodies

in

inflammatory

myopathiesJ.R?nnelid,S.BarbassoHelmers,H.Storfors,K.Grip,L.R?nnblom,K.Franck-Larsson,G.Nordmark,I.E.LundbergAutoimmunity

Reviews

2009

Mar

11相關參考資料2021/4/2671其他疾病中的抗核抗體2021/4/2672EUROIMMUN抗線粒體抗體

(AMA)

HEp-2細胞/猴肝HEp-2細胞猴肝2021/4/2673胞漿粗顆粒:抗線粒體抗體(AMA)靶抗原:M1

—

M9:

M2

(丙酮酸脫氫酶),

M4

(亞硫酸氧化酶),M9

(糖原磷酸化酶a).分析方法:IIFA,

ELISA,

Blot臨床