分析方法驗(yàn)證

2023/2/4李宏業(yè)136011192401分析方法驗(yàn)證

主講人：李宏業(yè)歐美GMP認(rèn)證高級(jí)咨詢(xún)師北京宏匯萊科技有限公司總經(jīng)理天津大學(xué)制藥工程碩士班GMP課程專(zhuān)職講師國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局高級(jí)研修學(xué)院培訓(xùn)講師

重點(diǎn)議題法規(guī)要求驗(yàn)證目的檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容分析方法確認(rèn)分析方法再驗(yàn)證2023/2/4李宏業(yè)136011192402分析方法的法規(guī)要求第十二條質(zhì)量控制的基本要求：（四）檢驗(yàn)方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證或確認(rèn)；2023/2/4李宏業(yè)136011192403分析方法的法規(guī)要求第二百二十三條物料和不同生產(chǎn)階段產(chǎn)品的檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)至少符合以下要求：（二）符合下列情形之一的，應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證：1.采用新的檢驗(yàn)方法；2.檢驗(yàn)方法需變更的；3.采用《中華人民共和國(guó)藥典》及其他法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法；4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法。2023/2/4李宏業(yè)136011192404分析方法的法規(guī)要求（三）對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法，企業(yè)應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠；2023/2/4李宏業(yè)1360111924052023/2/46分析方法的法規(guī)要求藥典或官方標(biāo)準(zhǔn)收載的方法－不需完整驗(yàn)證－需驗(yàn)證方法的適用性（確認(rèn)）自研方法或?qū)俜綐?biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了大幅調(diào)整－需完整驗(yàn)證驗(yàn)證的目的證明采用的方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求。2023/2/4李宏業(yè)1360111924072023/2/4lihongye8檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容

注：—表示通常不需論證的項(xiàng)目；+表示通常需論證的項(xiàng)目；

①

假如已論證重現(xiàn)性，可不需再論證中間精密度；

②缺乏專(zhuān)屬性的分析方法，應(yīng)由其他分析方法來(lái)作補(bǔ)充；

③有些情況不需要。

2023/2/4lihongye9術(shù)語(yǔ)（1）準(zhǔn)確度－－是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（％）表示。精密度－－是指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度，一般用偏差，標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。2023/2/4lihongye10術(shù)語(yǔ)（2）專(zhuān)屬性－－是指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物，輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測(cè)定出被測(cè)物的特性。如方法不夠?qū)?，?yīng)采用多個(gè)方法補(bǔ)充。檢測(cè)限－－是指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。定量限－－是指試樣中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)量結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。2023/2/4lihongye11術(shù)語(yǔ)（3）線性－－是指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。范圍－－是指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。耐用性－－是指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法可用于提供常規(guī)檢驗(yàn)依據(jù)。2023/2/412分析方法的驗(yàn)證項(xiàng)目典型分析方法驗(yàn)證的項(xiàng)目：－專(zhuān)屬性specificity

－精密度precision－準(zhǔn)確度accuracy－檢測(cè)限detectionlimit

－定量限quantitationlimit－線性linearity－范圍range－耐用性robustness

2023/2/413分析方法的驗(yàn)證-專(zhuān)屬性專(zhuān)屬性－定義：指一種方法在有可能的干擾物質(zhì)（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物和基質(zhì)）存在時(shí)，能夠準(zhǔn)確無(wú)誤地評(píng)估被分析物的能力鑒別:確?？梢澡b別被分析物純度檢查：確保所有的分析過(guò)程能夠?yàn)殡s質(zhì)的含量提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，如相關(guān)物質(zhì)檢查、重金屬限度檢查、有機(jī)揮發(fā)性雜質(zhì)檢查等含量測(cè)定：提供準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果以保證含量樣品中被分析物的含量或效價(jià)值準(zhǔn)確無(wú)誤2023/2/414分析方法的驗(yàn)證-專(zhuān)屬性專(zhuān)屬性－方法定性分析（鑒別）：樣品陽(yáng)性結(jié)果＋空白陰性結(jié)果＋結(jié)構(gòu)相似物質(zhì)的陰性結(jié)果；雜質(zhì)檢查（對(duì)照品可得）：將可能的雜質(zhì)對(duì)照品加入樣品中；雜質(zhì)檢查（對(duì)照品不可得）：－用另外一種官方的標(biāo)準(zhǔn)或經(jīng)驗(yàn)證的方法對(duì)樣品和經(jīng)降解的樣品分析，比較兩種方法得到的雜質(zhì)概況2023/2/415分析方法的驗(yàn)證-專(zhuān)屬性雜質(zhì)檢查（對(duì)照品不可得）－使用其他技術(shù)對(duì)峰純度進(jìn)行檢查，如二極管陣列檢測(cè)器、MS等含量測(cè)定：

被分析物與其他干擾峰完成分離。向樣品中加入一定量的干擾物，含量測(cè)定的結(jié)果不受干擾；檢查主峰的純度分析方法的驗(yàn)證-專(zhuān)屬性鑒別試驗(yàn)：本品的紅外吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照品的圖譜一致。采用與被測(cè)物結(jié)構(gòu)類(lèi)似的化合物以及被測(cè)物分別進(jìn)行紅外測(cè)試。被測(cè)物為正反應(yīng)。被測(cè)物結(jié)構(gòu)類(lèi)似的化合物為負(fù)反應(yīng)。被測(cè)物結(jié)構(gòu)類(lèi)似的化合物可選用中間體、副產(chǎn)物或降解產(chǎn)物等。2023/2/4李宏業(yè)1360111924016分析方法的驗(yàn)證-專(zhuān)屬性鑒別：化學(xué)滴定的顏色反應(yīng)；采用與被測(cè)物結(jié)構(gòu)類(lèi)似的化合物以及被測(cè)物分別進(jìn)行鑒別試驗(yàn)。被測(cè)物為正反應(yīng)。被測(cè)物結(jié)構(gòu)類(lèi)似的化合物為負(fù)反應(yīng)。被測(cè)物結(jié)構(gòu)類(lèi)似的化合物可選用中間體、副產(chǎn)物或降解產(chǎn)物等。2023/2/4李宏業(yè)13601119240172023/2/418分析方法的驗(yàn)證-精密度精密度precision－定義：對(duì)均一樣品重復(fù)取樣檢測(cè)每個(gè)檢測(cè)結(jié)果間的接近程度，RSD%,CV%

－重復(fù)性repeatability：短時(shí)間內(nèi)同一分析人員使用同一儀器－中間精密度intermediateprecision:在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的變化，如不同分析時(shí)間、不同分析人員、不同分析儀器－重現(xiàn)性reproducibility:在不同實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)

2023/2/419分析方法的驗(yàn)證-精密度精密度－方法

－100％濃度≥6次－3濃度×3次2023/2/420分析方法的驗(yàn)證-準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度－定義：方法的檢測(cè)結(jié)果與真實(shí)值的接近程度。－方法：

－原料藥：分析已知含量的對(duì)照品；第二種確定的方法分析，結(jié)果比較－制劑：加樣回收；第二種確定的方法分析，結(jié)果比較－應(yīng)在方法的范圍內(nèi)－計(jì)算回收率：3濃度×3次

2023/2/421分析方法的驗(yàn)證-檢測(cè)限檢測(cè)限detectionlimit－定義：在聲明的實(shí)驗(yàn)條件下所能檢測(cè)到的被分析物的最小量。限度檢查的指標(biāo)；表示為在樣品中的濃度％,ppm－方法：－檢測(cè)已知濃度的樣品(對(duì)照品)－雜質(zhì)的DL<0.05%－信噪比2:1/3:12023/2/422分析方法的驗(yàn)證-定量限定量限quantitationlimit－定義：在聲明的實(shí)驗(yàn)條件下被分析物可被定量分析并能滿足合格的精密度和準(zhǔn)確度的最小值。微量物質(zhì)的定量分析：有關(guān)物質(zhì)定量分析，有機(jī)揮發(fā)性物質(zhì)的定量分析。％，ppm－方法：－已知濃度樣品（對(duì)照品）－相關(guān)物質(zhì)<0.05％－證明精密度和準(zhǔn)確度－信噪比10:12023/2/423分析方法的驗(yàn)證-線性與范圍線性和范圍linearityandrange－定義：－線性：在給定的范圍內(nèi)使檢測(cè)結(jié)果直接或通過(guò)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換后與被分析物在樣品中的濃度成比例的能力－范圍：在適當(dāng)?shù)木芏?、?zhǔn)確度和線性基礎(chǔ)上檢測(cè)到的被分析物的最低水平到最高水平區(qū)間2023/2/424分析方法的驗(yàn)證-線性與范圍－方法：一定范圍內(nèi)的不同濃度點(diǎn)進(jìn)樣，繪制響應(yīng)值（y）與濃度(x)之間的回歸線，計(jì)算回歸方程，相關(guān)系數(shù)（r,r2）

－主成分含量測(cè)定：80％－120％檢測(cè)濃度－雜質(zhì)含量測(cè)定：定量限（50％）－120％標(biāo)準(zhǔn)－裝量差異：70％－130％檢測(cè)值－溶出實(shí)驗(yàn)：±20％規(guī)定范圍分析方法的驗(yàn)證-線性與范圍2023/2/4李宏業(yè)1360111924025要提供如下數(shù)據(jù)：回歸方程y＝a+bx回歸曲線相關(guān)系數(shù)2023/2/426分析方法的驗(yàn)證-耐用性耐用性robustness－定義：分析方法的某些參數(shù)發(fā)生微小變化時(shí)方法抗干擾的能力，表示在正常使用時(shí)的可靠性－方法：刻意改變參數(shù)，考察結(jié)果的變化流動(dòng)相的pH值、流動(dòng)相的組成（極性的變化）、不同供應(yīng)商柱子、柱溫、流速等分析方法的驗(yàn)證-耐用性液相：評(píng)估柱溫、流速、色譜柱、緩沖鹽pH、有機(jī)相比例、流動(dòng)相比例、溶液放置時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響氣相：評(píng)估柱溫、流速、色譜柱、溶液放置時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響2023/2/4李宏業(yè)13601119240272023/2/428分析方法的驗(yàn)證-系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性systemsuitability－耐用性驗(yàn)證的結(jié)果－影響參數(shù)在方法中列出－在日常樣品分析前、過(guò)程中進(jìn)行考察－色譜方法中尤為重要分析方法的驗(yàn)證-系統(tǒng)適用性液相和氣相可以不同；液相：任何兩個(gè)組分之間的分離度R不小于1.5；重復(fù)進(jìn)樣(6次)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD不大于2.0%氣相：任何兩個(gè)組分之間的分離度R不小于3；重復(fù)進(jìn)樣(6次)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD不大于15%。2023/2/4李宏業(yè)13601119240292023/2/430分析方法的驗(yàn)證USP對(duì)不同方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求*根據(jù)不同的方法特點(diǎn)也可能需要

“＋”需要“－”不需要驗(yàn)證項(xiàng)目I類(lèi)II類(lèi)III類(lèi)IV類(lèi)定量限度檢查準(zhǔn)確度++**-精密度++-+-專(zhuān)屬性+++*+檢測(cè)限--+*-定量限-+-*-線性++-*-范圍++**-2023/2/431分析方法的驗(yàn)證I類(lèi)方法：制劑中原料藥或活性成分（包括防腐劑）的定量分析方法；II類(lèi)方法：原料藥中雜質(zhì)或制劑中降解化合物的分析方法；包括定量方法和限度檢查；III類(lèi)方法：藥物性能特征分析方法：溶出，藥物釋放IV類(lèi)方法：鑒別實(shí)驗(yàn)分析方法確認(rèn)適用于藥典方法和其他已驗(yàn)證的法定標(biāo)準(zhǔn)。因?yàn)樗幍浞椒ê推渌ǘ?biāo)準(zhǔn)被認(rèn)為是驗(yàn)證過(guò)的分析方法，不需要驗(yàn)證，但需要通過(guò)方法確認(rèn)來(lái)證明方法在該實(shí)驗(yàn)室條件下的適應(yīng)性。2023/2/4李宏業(yè)1360111924032分析方法確認(rèn)對(duì)于方法確認(rèn)，通常采用兩種方式：一、由兩名檢驗(yàn)人員分別獨(dú)立對(duì)同一批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)（如可能使用不同的儀器）比較兩人的檢測(cè)結(jié)果來(lái)證明方法在本實(shí)驗(yàn)室（人員，分析儀器，試劑）的適用性；二、根據(jù)驗(yàn)證目的和評(píng)估結(jié)果選擇相關(guān)項(xiàng)目進(jìn)行確認(rèn)：（具體見(jiàn)下表）2023/2/4李宏業(yè)1360111924033分析方法確認(rèn)2023/2/4李宏業(yè)1360111924034分析方法再驗(yàn)證在某些情況下，如原料藥合成工藝改變、制劑處方改變、分析方法發(fā)生部分改變等，均有必要對(duì)分析方法再次進(jìn)行部分或完整的再驗(yàn)證，以保證分析方法可靠。2023/2/4李宏業(yè)1360111924035分析方法再驗(yàn)證當(dāng)原料藥合成工藝發(fā)生改變時(shí)，可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含量測(cè)定方法的專(zhuān)屬性就需要再進(jìn)行驗(yàn)證，以證明有關(guān)物質(zhì)檢查方法能夠檢測(cè)新引入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對(duì)主成份的含量測(cè)定應(yīng)無(wú)干擾。2023/2/4李宏業(yè)1360111924036分析方法再驗(yàn)證當(dāng)制劑的處方組成改變、輔料變更時(shí)，可能會(huì)影響鑒別的專(zhuān)屬性、溶出度和含量測(cè)定的準(zhǔn)確度，因此需要對(duì)鑒別、含量測(cè)定方法再驗(yàn)證。當(dāng)原料藥產(chǎn)地來(lái)源發(fā)生變更時(shí)，可能會(huì)影響雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定的專(zhuān)屬性和準(zhǔn)確度，因此需要對(duì)雜質(zhì)檢查方法和含量測(cè)定方法進(jìn)行再驗(yàn)證。2023/2/4李宏業(yè)1360111924037分析方法再驗(yàn)證再驗(yàn)證原則：根據(jù)改變的程度進(jìn)行相應(yīng)的再驗(yàn)證。當(dāng)這種改變到達(dá)一定程度時(shí)，則需要完整的驗(yàn)證。如分析方法完全改變時(shí)，則應(yīng)視為新方法并需要完整的驗(yàn)