科研隨想基金申報科研思路及相關軟件

科研隨想

-基金申報

-科研思路及相關軟件陳中山廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院全軍眼科中心全軍眼科中心廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院教育經歷2004.9-2008.6第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院眼科博士2001.9-2004.6第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院眼科碩士1994.9-1999.6第三軍醫(yī)大學臨床醫(yī)學系學士研究工作經歷2010.7-至今廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院全軍眼科中心，主治醫(yī)師2009.3-2010.6第三軍醫(yī)大學新橋醫(yī)院眼科，講師，主治醫(yī)師2005.7-2009.2第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院全軍眼科中心，講師，主治醫(yī)師2001.9-2005.6第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院全軍眼科中心，醫(yī)師個人簡介學術任職國際視覺和眼科研究協(xié)會(ARVO)會員國際臨床視覺電生理協(xié)會(ISCEV)成員中華醫(yī)學會眼科學會成員中華眼科醫(yī)師協(xié)會會員中華醫(yī)學會激光學會成員，全軍激光醫(yī)學委員會學術秘書湖北省激光醫(yī)學委員兼秘書前中華眼科學會視覺生理學組學術秘書期刊編委RetinaIOVSJNeurosciResNeurosciLettOphthalmologicaIJO中華眼底病雜志等參與項目評審國家自然科學基金（包括面上項目、杰出青年基金）重慶市自然科學基金重慶市科技攻關項目湖北省自然科學基金全軍“十二五”項目第1負責人序號課題名稱課題類型經費1胚胎干細胞治療致盲性眼病的基礎與臨床轉化研究2013年國家973計劃分項302視網(wǎng)膜變性中含melanopsin神經節(jié)細胞周圍神經網(wǎng)絡的重構及感光基因導入對視網(wǎng)膜功能重建的研究2012年湖北省衛(wèi)生廳青年科技人才項目43視網(wǎng)膜色素變性疾病中感光神經節(jié)細胞耐受損傷的機制研究2009年國家自然科學基金234RCS大鼠視網(wǎng)膜變性過程中視網(wǎng)膜神經層重構機制的研究2007年國家自然科學基金30參與申請和完成的基金第2負責人序號課題名稱課題類型經費1微脈低能量激光對離體和在體視網(wǎng)膜色素上皮細胞的光生物調制效應2013年國家自然科學基金822微電極陣列與視覺神經系統(tǒng)相互作用機制研究2012年國家973計劃子課題263微脈低能量激光對離體和在體視網(wǎng)膜色素上皮細胞的光生物調制效應2012年湖北省衛(wèi)生廳科研項目自籌4神經致盲性眼病的修復與功能重建研究2011年湖北省研究與開發(fā)計劃項目自籌5弱視遠程診療系統(tǒng)的建設及產業(yè)化2009年重慶市科技攻關重點項目206Müller細胞對視網(wǎng)膜色素變性中內層神經元變性的觸發(fā)機制研究2009年重慶市自然科學基金計劃項目47Fubulin-5對脈絡膜新生血管的阻抑及其對AMD修復機制的研究2008年國家自然科學基金208我國重要神經性致盲眼病的發(fā)病機制及防治研究2007年國家“973”項目2759基于MEMS的視皮層外結創(chuàng)新芯片關鍵技術及應用研究2007年國家“863”課題90第3負責人序號課題名稱課題類型經費1RNAi抑制黃斑部新生血管形成的實驗研究2011年湖北省自然科學基金計劃項目42全固態(tài)多波長激光眼底病治療設備2010年國家863計劃213視網(wǎng)膜組織/干細胞移植治療視網(wǎng)膜變性眼病的實驗研究2006年重慶自然基金重點項目204視神經假體移植治療視網(wǎng)膜變性眼病的基礎與臨床研究2005年國家“973”計劃課題分題505RCS大鼠視網(wǎng)膜移植后神經元突觸傳導功能的研究2002年國家自然科學基金20指導過的國家自然科學基金轉錄因子OCT4/SOX2-TGFβ通路在Barrett食管向食管腺癌轉化中的機制研究，2012年國家自然科學基金；Muller細胞鉀離子通道Kir.4.1在視網(wǎng)膜變性疾病中的作用及其調控機制的研究，2012年國家自然科學基金，編號：81200710，經費23萬元；小膠質細胞CX3CR1受體在慢性低灌注腦白質損害中的作用及機制研究，2010年國家自然科學基金，編號：81070930，經費30萬元；P2X7受體在少突膠質前體細胞缺氧缺血性損傷中作用的研究，2009年國家自然科學基金，編號：30900467，經費19萬元參加的臨床課題研究康柏西普眼用注射液治療糖尿病黃斑水腫的有效性和安全性試驗—三期臨床Sailing實驗，成都康弘生物科技有限公司；一項隨機、雙盲、III期研究，在因繼發(fā)于視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞（CRVO）的黃斑水腫（ME）導致視力損害的患者中，評估雷珠單抗玻璃體內注射相對于假注射的有效性和安全性—三期Camellia試驗；一項隨機、雙盲、III期研究，在因繼發(fā)于視網(wǎng)膜分支靜脈阻塞（BRVO）的黃斑水腫（ME）導致視力損害的患者中，評估雷珠單抗玻璃體內注射相對于假注射的有效性和安全性—三期Blossom試驗；一項為期12個月的隨機、雙盲、多中心、陽性對照III期臨床研究，在因繼發(fā)于病理性近視的脈絡膜新生血管導致視力損害的患者中，評估雷珠單抗0.5mg的兩種個體化給藥方案對比維替泊芬PDT的有效性和安全性—三期Brilliance試驗；一項24個月、隨機、雙盲、對照、多中心研究，在新生血管性年齡相關性黃斑變性的中國患者中，評價雷珠單抗0.5mg兩種給藥方案的療效和安全性—四期臨床Dragon試驗；前瞻性、觀察性濕性（新生血管性）年齡相關性黃斑變性患者登記研究；AMD患者健康知識教育—光明項目；康柏西普眼用注射液（Conbercept）治療繼發(fā)于高度近視的脈絡膜新生血管病變的有效性和安全性試驗—三期臨床Shiny試驗；Q開關脈沖Nd:YAG激光眼科治療機JLER-Y21臨床試驗；全固態(tài)多波長眼底激光治療儀Renolas

Multiwave；玻璃體腔注射重組人血管內皮生長因子受體-抗體融合蛋白注射液（KH902）治療繼發(fā)于年齡相關性黃斑變性的脈絡膜新生血管病變的有效性和安全性試驗—三期臨床Phoenix實驗（獲得美國威斯康辛州立大學眼科中心眼科影像師認證）；眼底激光治療儀Renolas532，上海奧通激光技術有限公司；光學相干斷層掃描儀RetiView3DOCT臨床實驗發(fā)表的的論文（2012-）ZChen,YSong,JYao,CWeng,ZQYin.AlterationsofSodiumandPotassiumChannelsofRGCsinRCSRatwiththeDevelopmentofRetinalDegeneration.JMolNeurosci,2013:Aug10.劉會娟,陳中山,丁琴,宋艷萍.362例息肉樣脈絡膜血管病變患者的臨床特征分析。中華眼底病雜志.2013;29(4):361-364.葉湘湘,陳中山,丁琴,宋艷萍.玻璃體腔注射雷珠單抗與光動力療法聯(lián)合玻璃體腔注射雷珠單抗治療特發(fā)性脈絡膜新生血管的療效比較.中華眼底病雜志.2013;29(4):313-317.葉湘湘,陳中山,丁琴,宋艷萍.VEGF基因RNA干擾質粒的構建與鑒定.華南國防醫(yī)學雜志.2013;27(5):299-304.葉湘湘,宋艷萍,陳中山.偽狂犬病毒在視覺系統(tǒng)跨突觸神經示蹤中的應用.中華實驗眼科雜志.2013;15(10).SongYP,ChenZS,MoGY,DingQ,YanM.AnopticatrophydifferentiallydiagnosedasspinocerebellarataxiasfromLeber’shereditaryopticneuropathybygenemutationanalysis.JIntMedRes,2012,40(5):2009-2013.（通訊作者）ChenZS,DingQ,SongYP,ZhuL,HuangZJ,YanM.Differentoutcomesofserpiginouschoroiditiswithorwithoutocularandsystemictreatment.IntJOphthalmol.2012,5(4):535-538.LiY,LiC,ChenZ,HeJ,TaoZ,YinZQ.AmicroRNA,mir133b,suppressesmelanopsinexpressionmediatedbyfailuredopaminergicamacrinecellsinRCSrats.CellSignal.2012;24:685-698.閆明，宋艷萍，李付亮，陳中山.視網(wǎng)膜變性大鼠神經節(jié)細胞變化及其觸發(fā)因素探討。中華眼底病雜志.2012;28(3):272-275.（通訊作者）基金申報摘要重要意義和現(xiàn)狀創(chuàng)新技術方法研究基礎ChenZS,etal.ClinExpOphthalmol,2006;

ChenZS,etal.Neuroreport,2005;YinZQ,ChenZS,etal.OphthalmicRes,2005;ChenZhongS,YinZhengQ,etal.ProgBiochemBiophys.2004C.RCS60dH.Control60dD.RCS90dI.Control90dE.RCS120dJ.Control120d(Scalebar=20μm)

RCS鼠于P60d起發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜神經纖維層的Müller細胞突起排列紊亂，于P90d開始細胞明顯變得肥大，P120d時發(fā)現(xiàn)部分Müller細胞突起延伸至視網(wǎng)膜下腔在局部形成纖維層樣結構。

綠色為mGluR6，紅色為Synaptophysin，藍色為DAPi復染細胞核；ONL為外核層，INL為內核層。紅色箭頭所指為來源于多個ON-RBCs的異常突起的纏結CD為RCS大鼠，GH為局部放大bar=10μm申報基金RCS大鼠視網(wǎng)膜變性過程中視網(wǎng)膜神經層重構機制的研究，2007年國家自然科學基金，編號：30772371，經費30萬元我國重要神經性致盲眼病的發(fā)病機制及防治研究，2007年國家“973”項目，編號：2007CB512203，經費275萬元2007年NSFC

RCS大鼠視網(wǎng)膜色素變性過程中神經視網(wǎng)膜重構機制研究視網(wǎng)膜色素變性是嚴重的致盲性眼病，至今尚無有效治療方法，原因在于感光細胞變性死亡之后神經視網(wǎng)膜病理變化機制尚不明確。視網(wǎng)膜色素變性發(fā)生發(fā)展過程中各級神經元功能狀態(tài)如何、各層神經元之間的突觸聯(lián)系從結構和功能上發(fā)生了怎樣的改變尚不清楚。本項目以RCS大鼠為對象，采用視網(wǎng)膜膜片鉗全細胞記錄結合神經藥理學、細胞內熒光標記、免疫組織化學染色、激光共聚焦、電鏡和基因槍標記等方法，研究RCS大鼠視網(wǎng)膜變性過程中神經節(jié)細胞、雙極細胞、Muller細胞的電學特性和軸樹突形態(tài)的改變，以及視網(wǎng)膜三級神經元之間突觸結構、傳導功能、興奮性和抑制性神經遞質及受體介導的突觸后電流的變化。闡明視網(wǎng)膜色素變性過程中感光細胞輸入障礙導致的各級神經元突觸結構和功能的改變與視網(wǎng)膜神經層發(fā)生“重構”反應的相互作用機制。從分子水平和神經元信號傳導通路研究視網(wǎng)膜色素變性的病理機制，為探索治療視網(wǎng)膜色素變性疾病的臨床途徑奠定實驗室基礎。（400字符數(shù)）2007年國家973計劃

我國重要神經性致盲眼病的發(fā)病機制及防治研究VPSSCNOPNRHTVLPOSPZNVPS非圖像視覺感光系統(tǒng)NVPS(引自MenakerM,Science,2003)

RCSNormalRCSNormal申報基金視網(wǎng)膜色素變性疾病中感光神經節(jié)細胞耐受損傷的機制研究，2009年國家自然科學基金，編號：30900446，經費23萬元神經致盲性眼病的修復與功能重建研究，2011年湖北省研究與開發(fā)計劃項目，經費：150萬元（自籌），項目編號：2011BHC006視網(wǎng)膜變性中含melanopsin神經節(jié)細胞周圍神經網(wǎng)絡的重構及感光基因導入對視網(wǎng)膜功能重建的研究，2012年湖北省衛(wèi)生廳青年科技人才項目，編號：QJX2012-23，經費：4萬元2013.01-2014.122009年NSFC

視網(wǎng)膜色素變性疾病中感光神經節(jié)細胞耐受損傷的機制研究視網(wǎng)膜內含黑視素(melanopsin)的神經節(jié)細胞能直接感光，謂感光神經節(jié)細胞（mRGCs），在生物節(jié)律、瞳孔反射等方面具有重要的生理作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜變性疾病中繼感光細胞喪失之后內層神經元也發(fā)生變性死亡，而mRGCs數(shù)量上卻得以保存，變性晚期其離子通道、神經遞質及受體究竟發(fā)生了怎樣的改變，在mRGCs對變性損傷耐受機制中發(fā)揮了什么樣的作用，至今未見報道。本研究采用視交叉上核（SCN）熒光金逆行標記mRGCs、視網(wǎng)膜切片膜片鉗全細胞記錄結合神經藥理學方法、細胞內染色和免疫組織化學染色、激光共聚焦等方法，研究RCS大鼠視網(wǎng)膜變性過程中mRGCs鈉鉀離子通道、神經遞質及受體分布、突觸后電流的變化，以及與RGCs變性的關系。探討視網(wǎng)膜變性疾病中RGCs繼發(fā)感光細胞變性死亡的機制，探索維持視網(wǎng)膜變性疾病中RGCs結構和功能的方法，為視網(wǎng)膜變性疾病的治療和視功能重建奠定實驗室基礎。2013年NSFC

視網(wǎng)膜變性中mRGCs周圍神經網(wǎng)絡的重構及構建感光神經元修復視覺功能的研究前一課題研究提示視網(wǎng)膜變性中含感光蛋白melanopsin的神經節(jié)細胞(mRGCs)能耐受變性損傷，這些存留的mRGCs與周圍神經細胞之間會建立怎樣的網(wǎng)絡連接，是否有功能突觸形成，對視覺功能重建有何意義尚不清楚。本項目擬以RCS大鼠為對象，采用激光共聚焦、計算機三維重建、視網(wǎng)膜膜片鉗等方法，研究RCS大鼠視網(wǎng)膜變性過程中mRGCs與周圍視網(wǎng)膜細胞之間的神經網(wǎng)絡重構，探討該自主重構對視覺功能重建的意義。鑒于自主重構對視功能修復的不足，以及不同感光蛋白的功能差異，擬構建雙表達感光基因melanopsin和Channelrhodopsin-2的納米顆粒，靶向導至RCS大鼠雙極細胞，采用膜片鉗、視覺電生理、瞳孔光反射、動物行為測試等分別從視網(wǎng)膜和中樞水平檢測視覺功能的重建。由此闡明視網(wǎng)膜變性過程中感光細胞輸入障礙致視網(wǎng)膜神經網(wǎng)絡發(fā)生“重構”反應的相互作用機制，并探索光基因導入治療視網(wǎng)膜變性的可能。不予資助工作條件不足內容繁多2008年NSFC

Fibulin-5對脈絡膜新生血管的阻抑及其對AMD修復機制的研究老年黃斑病變（AMD）是50歲以上人群致盲的重要原因，脈絡膜新生血管（CNV）是其主要病理基礎。最新研究表明fibulin-5與AMD具有密切關聯(lián)性:fibulin-5表達減低或突變阻礙彈性纖維的組裝，并降低對VEGF的拮抗。據(jù)此推測以fibulin-5作為靶標，進行AMD的CNV抑制和修復機制研究具有較強的特異性。本項目在成功構建fibulin-5表達載體基礎上，擬構建Rpe65啟動子驅動的fibulin-5腺病毒表達載體，體外檢測對視網(wǎng)膜色素上皮細胞生物學性狀影響；體內大鼠模型視網(wǎng)膜下腔注射轉染的視網(wǎng)膜色素上皮細胞，檢測抑制CNV生成效率和Bruch膜的修復能力，評估其在AMD修復中的作用。并研究其阻抑新生血管形成和修復Bruch膜的機制，探討轉染視網(wǎng)膜色素上皮細胞移植的修復機制。本研究有助于揭示fibulin-5作用的靶位點，進而為深入闡明其作用機制。2010年NSFC

小膠質細胞CX3CR1受體在慢性低灌注腦白質損害中的作用及機制研究我們既往表明，小膠質細胞的激活和少突膠質細胞的減少在慢性低灌注腦白質損害(WMLs)中起重要作用，但目前尚不清楚小膠質細胞介導WMLs發(fā)生的確切分子機制。CX3CL1/CX3CR1受體系統(tǒng)-p38MAP/PKC在小膠質細胞的增殖、激活、炎性因子的釋放、細胞遷移和吞噬中起重要作用。為此我們假設：如能調控小膠質細胞CX3CL1/CX3CR1-p38MAPK/PKC信號傳導通路、影響少突膠質細胞的活性，則能干預WMLs的發(fā)生。為此本項目擬研究缺血缺氧條件下小膠質細胞CX3CL1/C3XCR1受體表達及其功能改變；探討p38MAPK/PKC介導CX3CL1/CX3CR1調控小膠質細胞激活的作用及機制；靶向沉默和激活CX3CL1/CX3CR1受體基因對WMLs模型鼠小膠質細胞活性、少突膠質細胞凋亡及髓鞘形成、整體認知功能的影響。旨在揭示小膠質細胞介導WMLs的分子機制及其可能的干預方法。2011年NSFC

Müller細胞鉀離子通道(Kir4.1)在視網(wǎng)膜變性疾病中的作用機制研究視網(wǎng)膜色素變性是神經元變性的致盲性眼病，胞外谷氨酸聚積是病變進展的重要因素。Kir4.1通道特異分布在視網(wǎng)膜Müller細胞和CNS星形膠質細胞，對CNS胞外谷氨酸轉運很重要，但對視網(wǎng)膜胞外谷氨酸的作用不清楚。我們前期工作發(fā)現(xiàn)：視網(wǎng)膜色素變性大鼠(RCS)中，Müller細胞活化，Kir4.1先增加后降低。由此本項目假設：視網(wǎng)膜色素變性中Müller細胞Kir4.1通道變化，改變細胞膜電位，使胞外谷氨酸不能及時轉運，加重視網(wǎng)膜變性。本課題擬研究RCS大鼠及視網(wǎng)膜下腔注射Kir4.1-shRNA大鼠的Müller細胞活化、Kir4.1和谷氨酸轉運體的表達、膜電位和胞外谷氨酸濃度，及視網(wǎng)膜神經元形態(tài)和功能；并采用Müller和光感受器細胞共培養(yǎng)，阻斷Müller細胞Kir4.1后，觀察光感受器細胞活性。從而探討Müller細胞Kir4.1通道在視網(wǎng)膜變性中作用機制，為尋找治療靶點提供理論依據(jù)2012年NSFC

轉錄因子OCT4/SOX2-TGFβ通路在Barrett食管向食管腺癌轉化中的機制研究Barrett食管（BE）是食管腺癌的癌前病變，最新研究顯示BE中干細胞轉錄調控因子OCT4和SOX2表達明顯增強，而TGF-β通路中關鍵調控因子表達下降，由此推測：BE異常微環(huán)境致食管干細胞niche破壞，OCT4和SOX2激活并形成復合體，抑制TGF-β通路，使下游效應分子表達顯著改變，從而細胞增殖失去控制，導致BE食管細胞惡變。本研究擬采用基因工程技術、干細胞分離鑒定和培養(yǎng)、免疫細胞化學、RT-PCR、western-blot、激光共聚焦等方法檢測OCT4、Sox2，以及TGF-β通路調控關鍵因子β2SP、Smads和下游靶基因p21以及RUNX3、c-myc的表達，通過基因工程上調和下調Oct4、Sox2的表達，探討其對BE細胞化生和增殖的調控效應，從而為最終了解Barrett食管向食管腺癌轉化的機制以及未來可能的基因調控干擾或藥物治療提供理論線索。2013年NSFC

微脈沖閾值下光凝對離體和在體視網(wǎng)膜色素上皮細胞的光生物調制效應研究病理狀態(tài)下視網(wǎng)膜色素上皮細胞(RPE)結構和功能的改變引發(fā)的黃斑病變是眾多眼底病的病理學基礎，可嚴重損害視功能，而常規(guī)激光光凝、藥物、手術等眾多治療方法可促使眼底瘢痕形成、視力下降、藥物副作用以及損害RPE和視網(wǎng)膜屏障功能，因此主動誘導RPE細胞增殖活化并分泌相應細胞因子對于視覺功能修復具有重要意義。鑒于微脈沖低能量激光對生物組織的光調制效應，本項目擬從離體培養(yǎng)RPE、正常大鼠在體RPE層和大鼠誘導CNV模型三個層次，利用免疫組化、RT-PCR、westernblot、高效液相色譜分析、視網(wǎng)膜電圖等技術方法，探索微脈沖閾值下光凝如何刺激RPE產生活性氧和轉錄因子，觸發(fā)下游生物學效應，抑制VEGF的表達，釋放PEDF等血管生長抑制因子，同時分泌神經營養(yǎng)和生長因子，從而改善RPE結構和生物學功能，最終從分子水平揭示微脈沖低能量激光對RPE的生物調制效應，為黃斑部病變的治療提供新思路、新方法。二、科研思路及相關軟件確定大的方向自己最感興趣的廣泛閱讀文獻摘要深入閱讀文獻全文如何閱讀科研論文閱讀過程中始終思考如下問題(Keeptheseinmind)

文章所要闡述的主要問題(majorquestion)是什么?這一問題是否重要(important)，為什么?本文所采用的方法(approaches)，以及這些方法對于回答這一問題是否適當和足夠(adequate)?新穎的想法(novelidea)，或者創(chuàng)新性的方法(innovativeapproaches)是什么?本文所提出來的新概念(concept)是什么?提供的結果是否支持這一新的概念(newconcept)?

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Critical,appreciative論文分級WhatIsaFirst-ClassPaper?Majoradvanceinaclassicfield干細胞是如何分化成特定組織細胞的，膽固醇在人體的正常功用Newtechniquesandmethodsthatcanbewidelyused人類基因組研究中的自動測序技術,PCR,PatchclampDiscoverieswithobviouspracticalimp