動物墊料中志賀氏菌檢測方法-內蒙古

B41DB15內 蒙 古 自 治 區(qū) 地 方 標 準DB15/XXXXX—XXXX動物墊料中志賀氏菌檢測方法MethodfordetectingShigellainanimalbedding點擊此處添加與國際標準一致性程度的標識（征求意見稿）XXXX-XX-XX發(fā)布 XXXX-XX-XX實施內蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局 發(fā)布DB15/TXXXXX—XXXX前 言本標準按照 GB/T1.1-2009 給出的規(guī)則起草。本標準由中華人民共和國呼和浩特海關提出并歸口。本標準起草單位：中華人民共和國呼和浩特海關、內蒙古自治區(qū)農牧業(yè)科學院。本標準主要起草人：趙治國、延涵、盛萬里、王海艷、陳林軍、崔強、敖威華、李軍燕、羅曉平、韓祎陟。IDBXX/XXXXX—XXXX動物墊料中志賀氏菌檢測范圍本標準規(guī)定了動物墊料中志賀氏菌的分離鑒定定性檢測方法。本標準適用于動物墊料中志賀氏菌定性檢測。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB19489 實驗室 生物安全通用要求GB/T33682 基質輔助激光解析電離飛行時間質譜鑒別微生物方法通則SN/T1538.1 培養(yǎng)基制備指南 第1部分：實驗室培養(yǎng)基制備質量保證通則SN/T1538.2 培養(yǎng)基制備指南 第2部分：培養(yǎng)基性能測試實用指南3 術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1動物墊料 animalbedding用于吸收動物排泄物，使動物保持舒適生活環(huán)境的鋪墊物。包括動物籠內非直接與動物機體接觸的鋪墊物。設備和材料4.1 冰箱：2℃～5℃。4.2 恒溫培養(yǎng)箱： 36℃±1℃。4.3 厭氧培養(yǎng)裝置 41.5 ℃±1℃。4.4 均質器。4.5 漩渦振蕩器。4.6 電子天平：感量 0.1g，0.0001g。4.7 顯微鏡：10×～100×4.8 全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。4.9 飛行時間質譜儀。4.10 二級生物安全柜。4.11 無菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭。4.12 無菌濾膜均質袋。4.13 PH計。4.14 無菌培養(yǎng)皿： 15mm×90mm。4.15 無菌試管：18mm×180mm。1DBXX/XXXXX—XXXX4.16 無菌鑷子。4.17 無菌剪刀。4.18 無菌勺。4.19 無菌玻片。4.20 無菌棉簽。培養(yǎng)基和試劑5.1 志賀氏菌增菌肉湯 -新生霉素：見附錄 A.2。5.2 麥康凱（MAC）瓊脂：見附錄 A.3。5.3 木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽（ XLD）瓊脂：見附錄 A.4。5.4 志賀氏菌顯色培養(yǎng)基。5.5 三鐵塘（TSI）瓊脂：見附錄 A.5。5.6 營養(yǎng)瓊脂：見附錄 A.6。5.7 半固體瓊脂：見附錄 A.7。5.8 葡萄糖胺培養(yǎng)基：見附錄 A.8。5.9 尿素瓊脂：見附錄 A.9。5.10 β-半乳糖苷酶培養(yǎng)基：見附錄 A.10。5.11 氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基：見附錄 A.11。5.12 糖發(fā)酵管：見附錄 A.12。5.13 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基：見附錄 A.13。5.14 粘液酸鹽培養(yǎng)基：見附錄 A.14。5.15 蛋白胨水、靛基質試劑：見附錄 A.15。5.16 志賀氏菌生化鑒定試劑盒。檢驗程序志賀氏菌檢驗程序見圖1。圖1志賀氏菌檢驗程序2DBXX/XXXXX—XXXX操作步驟7.1 采樣 采樣原則樣品采集應遵循隨機性、代表性的原則。采樣過程遵循無菌操作程序，防止一切可能的外來污染。 顆粒狀或粉末墊料樣品對送檢樣品包裝內不同部位樣品進行隨機多點取樣至少 250g，充分混勻后稱取 25g顆粒狀或粉末狀墊料樣品，加入 225mL志賀氏菌增菌肉湯，充分振搖或均質 1min～2min，于41.5 ℃±1℃，厭氧培養(yǎng) 16h～20h。 平面墊料樣品無菌操作將滅菌規(guī)格板（ 5cm 5cm）放在平面墊料表面，用浸有無菌稀釋液（磷酸緩沖液或生理鹽水）的棉拭子，在規(guī)格板內來回均勻涂抹整個方格3次，并隨之轉動棉拭子，然后用滅菌剪刀剪去棉拭子與手接觸的部分，將棉拭子頭置入裝有25mL無菌稀釋液的無菌錐形瓶中，根據樣品面積大小重復取樣1～4個規(guī)格板面積，相應地將棉拭子頭置入25mL～100mL的無菌稀釋液中，充分振搖制成樣品原液（1mL原液對應的樣品面積為1cm2）。取25mL樣品原液加入225mL志賀氏菌增菌肉湯，充分振搖或均質1min～2min。于41.5℃±1℃，厭氧培養(yǎng)16h～20h。表1不同面積平面類墊料樣品采樣量樣品面積采樣量m2cm2規(guī)格板數小于0.25（含）2510.25～0.5（含）5020.5～0.75（含）753大于0.7510047.2 分離取增菌后的志賀氏菌增菌肉湯分別劃線接種于 XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上，于 36℃±1℃培養(yǎng)20h～24h，觀察各個平板上生長的菌落形態(tài)。宋內氏志賀氏菌的單個菌落直徑大于其他志賀氏菌。若出現的菌落不典型或菌落較小不易觀察，則繼續(xù)培養(yǎng)至 48h在進行觀察。志賀氏菌在不同選擇性瓊