腫瘤自殺基因治療及中藥方藥的增效作用和機(jī)制

腫瘤自殺基因治療及中藥方藥的增效作用和機(jī)制第一頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日課題資助情況國(guó)家自然科學(xué)基金（編號(hào)：30171201;30572433;30672747

）廣東省科技攻關(guān)計(jì)劃（編號(hào)：2005B3030102）廣州市科委（編號(hào)：2002J1-C7401）廣東省中醫(yī)藥管理局（編號(hào)：A401028；1050079）廣州中醫(yī)藥大學(xué)(K0050031)

第二頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)容

研究背景及研究思路HSV-tk/GCV腫瘤自殺基因治療系統(tǒng)的構(gòu)建中藥方藥對(duì)腫瘤自殺基因治療的增效作用中藥方藥增效作用的機(jī)制腫瘤自殺基因治療系統(tǒng)的改進(jìn)工作第三頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日研究背景及研究思路第四頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日基因治療的概念基因治療就是將外源性基因?qū)氲秸；虿∽兗?xì)胞中，利用其轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物發(fā)揮治療作用的一種方法第五頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日基因治療的策略第六頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日基因治療的臨床試驗(yàn)第七頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日腫瘤的基因治療惡性腫瘤由于患者來(lái)源廣，用于治療的基因多，容易復(fù)制動(dòng)物模型等原因而成為首選對(duì)象

第八頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日目前常用的腫瘤基因治療方案

腫瘤的免疫基因治療腫瘤抑制基因治療

自殺基因治療（最有應(yīng)用前景）

腫瘤多藥耐藥性基因治療

抑制血管生成的基因治療第九頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日自殺基因的概念

所謂自殺基因是指在一定條件下，可以引起細(xì)胞自動(dòng)死亡的基因

目前研究的多數(shù)自殺基因是通過編碼病毒或細(xì)菌的酶介導(dǎo)敏感性，這些酶能把藥物的無(wú)活性形式轉(zhuǎn)化為毒性代謝產(chǎn)物，引起細(xì)胞死亡第十頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日基因名稱底物產(chǎn)物旁殺傷效應(yīng)備注單純皰疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）GCV，ACV，PCV，BCV，BVDU，BVDC，IVDU等核苷類似物磷酸化的核苷類似物有研究最多已上臨床水痘帶狀皰疹病毒胸苷激酶（VZV-tk）araMaraATP－

大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶（EC-CD）5-FC5-FU有已上臨床大腸桿菌硝基還原酶（NTR）CB1954，MTZ，NFT羥胺衍生物有研究正在興起大腸桿菌黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（EC-XGPRT或gpt基因）6TG6TX6-硫代鳥嘌呤酸有

細(xì)胞色素P450CYP2B1CPA，IFA堿性化的底物有

細(xì)胞羧肽酶G2（CPG2）CMDA芥類藥物有

大腸桿菌DeoD基因（PNP）Mep-dr6-甲嘌呤有

白細(xì)胞介素1β轉(zhuǎn)化酶（ICE）RARP，LaminsRb，U1-70kD等被降解失活的底物－

p53－－有

目前應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室和臨床主要的自殺基因治療系統(tǒng)

第十一頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日自殺基因治療的優(yōu)勢(shì)①特異性殺傷基因表達(dá)細(xì)胞②殺傷多藥耐藥性（MDR）腫瘤細(xì)胞③基因的表達(dá)只需將一定量的前藥轉(zhuǎn)換成足以殺傷腫瘤細(xì)胞的劑量即可，而無(wú)需基因的長(zhǎng)期表達(dá)④絕大部分自殺基因存在極明顯的“旁殺傷效應(yīng)”，體外只需有10％以上的腫瘤細(xì)胞表達(dá)自殺基因，就可以殺傷絕大部分甚至全部腫瘤細(xì)胞⑤良好的瘤苗第十二頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日旁殺傷效應(yīng)

第十三頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日旁殺傷效應(yīng)作用機(jī)制

“縫隙連接”機(jī)制免疫介導(dǎo)機(jī)制“細(xì)胞凋亡”機(jī)制介質(zhì)機(jī)制抗腫瘤血管生成

第十四頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日縫隙連接機(jī)制第十五頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日免疫介導(dǎo)機(jī)制tk+死亡大量抗原釋放免疫細(xì)胞浸潤(rùn)細(xì)胞因子釋放免疫炎癥系統(tǒng)介導(dǎo)的非特異性殺傷誘發(fā)特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)12免疫抑制免疫激活免疫增強(qiáng)旁殺傷效應(yīng)增強(qiáng)死亡第十六頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日“細(xì)胞凋亡”機(jī)制自殺基因引起細(xì)胞死亡的形式為細(xì)胞凋亡tk+細(xì)胞凋亡形成凋亡小體為tk-細(xì)胞吞噬引起tk-細(xì)胞死亡細(xì)胞死亡tk-細(xì)胞第十七頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日介質(zhì)擴(kuò)散

CD5-Fc5-Fu5-Fu5-Fu5-FuCD-細(xì)胞死亡第十八頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日抗腫瘤血管生成注：自殺基因第十九頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日單純自殺基因治療存在主要問題目的基因轉(zhuǎn)染率低而殺傷力不足；缺乏靶向性，自殺基因的表達(dá)缺乏組織特異性和時(shí)序性等，單純自殺基因治療難以完全消除腫瘤細(xì)胞第二十頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日腫瘤自殺基因療法的增效方法

雙自殺基因治療聯(lián)合治療聯(lián)合免疫基因治療聯(lián)合放射治療聯(lián)合化學(xué)治療聯(lián)合其他基因

靶向基因治療增強(qiáng)旁殺傷效應(yīng)第二十一頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日單純自殺基因治療易復(fù)發(fā)聯(lián)合治療增效聯(lián)合免疫基因聯(lián)合放化療多基因間互相干擾，難以保證導(dǎo)入基因表達(dá)或長(zhǎng)期表達(dá)；使用病毒載體量增多，潛在毒副作用增大；操作過程復(fù)雜，成本較高聯(lián)合中藥方藥載體轉(zhuǎn)染效率低靶向性不夠自殺基因療法聯(lián)合中藥方藥可能是一種更為有效和可行的方案研究思路增強(qiáng)免疫功能增強(qiáng)“縫隙連接”功能增強(qiáng)殺傷敏感性提高旁殺傷效應(yīng)

肯定的免疫藥理作用多靶點(diǎn)作用給藥方便，價(jià)格低廉，毒副作用小或無(wú)明顯毒副作用第二十二頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日HSV-tk/GCV腫瘤自殺基因治療系統(tǒng)的構(gòu)建

第二十三頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日技術(shù)路線獲得目的基因酶切酶切鑒定質(zhì)粒重組病毒包裝和陽(yáng)性克隆篩選病毒感染胃癌細(xì)胞重組質(zhì)粒鑒定病毒滴度測(cè)定GCV殺傷試驗(yàn)斑點(diǎn)雜交鑒定第二十四頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日目的基因（tk基因）的獲得

由美國(guó)匹茲堡大學(xué)藥理教研室HuangL.教授惠贈(zèng)，廣州軍區(qū)總醫(yī)院趙亞剛博士提供（pICl9R/MCl-tk質(zhì)粒）第二十五頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日pICl9R/MCl-tk質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果12345a：pICl9R/MCl-tk質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖

b：pICl9R/MCl-tk質(zhì)粒的酶切鑒定電泳圖譜

注（b）：1：Marker(λDNAHindⅢ)；2：pICl9R/MCl-tk質(zhì)粒

3：pICl9R/MCl-tk質(zhì)粒/BamHⅠ；4：pICl9R/MCl-tk質(zhì)粒/BamHⅠ+EcoRⅠ5：Marker(λDNA/EcoRⅠ+HindⅢ)

第二十六頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日重組質(zhì)粒的限制性內(nèi)切酶鑒定結(jié)果

a：pLXSN-tk質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖b：pLXSN-tk質(zhì)粒的酶切鑒定電泳圖譜1234561．DNAmarkerⅨ(分子量分別為2.5kb,2.0kb,1.5kb,1.0kb,500bp,300bp)2．pLXSN-tk經(jīng)EcoRI單酶切3．4．pLXSN-tk經(jīng)EcoRI/BamHI雙酶切5．pLXSN-tk質(zhì)粒6．

DNA/EcoRI/HindⅢmarker第二十七頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日重組質(zhì)粒的測(cè)序圖鑒定結(jié)果

第二十八頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日PT67包裝細(xì)胞篩選結(jié)果

a：G418篩選5d后的PT67b：篩選2w后形成的陽(yáng)性克隆細(xì)胞圖3pLXSN-tk質(zhì)粒轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞PT67結(jié)果第二十九頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日病毒滴度測(cè)定及結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)測(cè)定滴度最高為1×104cfu/mL第三十頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日胃癌細(xì)胞tk基因的斑點(diǎn)雜交鑒定

123胃癌細(xì)胞SGC-7901、SGC-7901/tk的DNA與tk探針的斑點(diǎn)雜交圖注：1.pLXSN/tk質(zhì)粒DNA（陽(yáng)性對(duì)照）；

2.SGC-7901細(xì)胞DNA；

3.SGC-7901/tk細(xì)胞DNA

第三十一頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日GCV對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901的體外殺傷試驗(yàn)

第三十二頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日結(jié)論及意義已成功已成功構(gòu)建了逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)的HSV-tk/GCV腫瘤自殺基因治療系統(tǒng)HSV-tk/GCV自殺基因治療系統(tǒng)成功的構(gòu)建，為后續(xù)的研究工作奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)

第三十三頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日中藥方藥對(duì)腫瘤自殺基因治療的增效作用第三十四頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日動(dòng)物水平實(shí)驗(yàn)第三十五頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日技術(shù)路線H22/tk＋和H22/tk－按1∶4混合接種小鼠皮下組織（2×106細(xì)胞）病毒感染肝癌細(xì)胞療效觀察動(dòng)物分組GCV體外殺傷試驗(yàn)成瘤后治療小鼠移植性肝細(xì)胞癌治療實(shí)驗(yàn)(六味地黃)

第三十六頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日分組及治療

模型對(duì)照組正常對(duì)照組聯(lián)合治療組

六味地黃丸治療組

自殺基因治療組

（造模）第2天第6天第16天蒸餾水灌胃每天0.5mL

腹腔注射生理鹽水每天0.25mL

蒸餾水灌胃每天0.5mL

腹腔注射生理鹽水每天0.25mL

腹腔注射生理鹽水每天0.25mL

腹腔注射GCV100mg﹒kg-1﹒d-1

腹腔注射GCV100mg﹒kg-1﹒d-1六味地黃丸懸液灌胃10g﹒kg-1﹒d-1

蒸餾水灌胃每天0.5mL

六味地黃丸懸液灌胃10g﹒kg-1﹒d-1（造模）（造模）（造模）（生理鹽水）第三十七頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日腫瘤生長(zhǎng)體積曲線時(shí)間（d）第三十八頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日腫瘤質(zhì)量及抑瘤率組別n腫瘤質(zhì)量（g）抑瘤率（%）模型對(duì)照組191.5825±1.2380六味地黃治療組190.8498±0.716346.3自殺基因治療組200.9904±0.979637.4聯(lián)合治療組180.5859±0.3786*63.0注：*與模型對(duì)照組比較P<0.05抑瘤率=（模型組腫瘤質(zhì)量－治療組腫瘤質(zhì)量）/模型組腫瘤質(zhì)量×100%第三十九頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日腫瘤質(zhì)量圖示第四十頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日病理檢查結(jié)果(肉眼觀察)

注：第二組：腫瘤模型組；第三組：六味地黃丸治療組；第四組：自殺基因治療組；第五組：聯(lián)合治療組第四十一頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日病理檢查結(jié)果(光鏡觀察

)

模型對(duì)照組

腫瘤細(xì)胞數(shù)量較多，密集。六味地黃丸治療組腫瘤細(xì)胞數(shù)量較多，密集。自殺基因治療組腫瘤細(xì)胞數(shù)量密度相對(duì)較少。聯(lián)合治療組腫瘤細(xì)胞數(shù)量密度相對(duì)較低。各組細(xì)胞密度第四十二頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日模型對(duì)照組：腫瘤組織內(nèi)腫瘤細(xì)胞壞死，呈核固縮表現(xiàn)，并見大片紅染無(wú)結(jié)構(gòu)的壞死組織六味地黃丸治療組：腫瘤組織內(nèi)腫瘤細(xì)胞壞死，呈核固縮表現(xiàn)，并見大片紅染無(wú)結(jié)構(gòu)的壞死組織自殺基因治療組：腫瘤組織內(nèi)腫瘤細(xì)胞壞死，呈核固縮表現(xiàn)，并見大片紅染無(wú)結(jié)構(gòu)的壞死組織聯(lián)合治療組：腫瘤組織內(nèi)腫瘤細(xì)胞壞死，呈核固縮表現(xiàn)，并見大片紅染無(wú)結(jié)構(gòu)的壞死組織。各組腫瘤壞死情況第四十三頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日模型對(duì)照組：腫瘤周邊纖維組織增生不明顯，未見明顯包膜六味地黃丸治療組：腫瘤周邊纖維組織增生較明顯，形成較明顯的假包膜自殺基因治療組：腫瘤周邊纖維組織增生較明顯，形成較明顯的假包膜聯(lián)合治療組：腫瘤周邊纖維組織增生較明顯，形成較厚的假包膜各組腫瘤纖維結(jié)締組織增生情況第四十四頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日模型對(duì)照組：腫瘤邊緣見少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)六味地黃丸治療組：腫瘤邊緣纖維結(jié)締組織內(nèi)見較多量炎細(xì)胞浸潤(rùn)自殺基因治療組：腫瘤邊緣纖維結(jié)締組織內(nèi)見較多量炎細(xì)胞浸潤(rùn)聯(lián)合治療組：腫瘤邊緣纖維結(jié)締組織內(nèi)見大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)各組腫瘤組織炎細(xì)胞浸潤(rùn)情況第四十五頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日肝癌治療實(shí)驗(yàn)結(jié)論

自殺基因療法與六味地黃丸聯(lián)合應(yīng)用于小鼠移植性肝細(xì)胞癌的治療具有協(xié)同效應(yīng)，表明六味地黃丸對(duì)自殺基因治療小鼠移植性肝細(xì)胞癌具有增效作用第四十六頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日丹參注射液H22肝癌荷瘤小鼠剝落瘤塊照片A模型對(duì)照組；B丹參組；Ctk/GCV組；D聯(lián)合組.第四十七頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日技術(shù)路線tk＋和tk－細(xì)胞按1∶4混合接種小鼠皮下組織（1×106細(xì)胞）病毒感染黑色素瘤細(xì)胞療效觀察動(dòng)物分組及治療GCV體外殺傷試驗(yàn)小鼠移植性黑色素瘤治療實(shí)驗(yàn)

第四十八頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日分組及治療

模型對(duì)照組正常對(duì)照組聯(lián)合治療組

六味地黃丸治療組

自殺基因治療組

（造模）第2天第7天第27天蒸餾水灌胃每天0.5mL

腹腔注射生理鹽水每天0.25mL

蒸餾水灌胃每天0.5mL

腹腔注射生理鹽水每天0.25mL

腹腔注射生理鹽水每天0.25mL

腹腔注射GCV100mg﹒kg-1﹒d-1

腹腔注射GCV100mg﹒kg-1﹒d-1六味地黃丸懸液灌胃10g﹒kg-1﹒d-1

蒸餾水灌胃每天0.5mL

六味地黃丸懸液灌胃10g﹒kg-1﹒d-1（造模）（造模）（造模）（生理鹽水）第四十九頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日成瘤時(shí)間接種模型對(duì)照組六味地黃丸治療組自殺基因治療組聯(lián)合治療組

24681012141618202224262830第五十頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日成瘤率第五十一頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日腫瘤生長(zhǎng)體積曲線時(shí)間（d）時(shí)間（d）第五十二頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日腫瘤質(zhì)量及抑瘤率注：*與模型對(duì)照組比較P<0.05

六味地黃治療組因有2只腫瘤較大的荷瘤小鼠后期死亡未能獲得腫瘤標(biāo)本，該數(shù)據(jù)低于實(shí)際數(shù)據(jù)

抑瘤率=（模型組腫瘤質(zhì)量－治療組腫瘤質(zhì)量）/模型組腫瘤質(zhì)量×100%組別n腫瘤質(zhì)量（g）抑瘤率（%）模型對(duì)照組100.9583±1.3260自殺基因治療組110.3566±0.856962.8六味地黃治療組70.4369±0.693754.4聯(lián)合治療組100.1234±0.2538*87.1第五十三頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日各組腫瘤質(zhì)量圖示注：六味地黃治療組因有2只腫瘤較大的荷瘤小鼠后期死亡未能獲得腫瘤標(biāo)本，該數(shù)據(jù)低于實(shí)際數(shù)據(jù)第五十四頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日病理檢查結(jié)果(肉眼觀察)

注：B：腫瘤模型組；C：自殺基因治療組；D：六味地黃丸治療組；

E：聯(lián)合治療組第五十五頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日病理檢查結(jié)果(光鏡觀察

)

模型對(duì)照組

模型對(duì)照組：腫瘤組織內(nèi)可見細(xì)胞密集，細(xì)胞內(nèi)可見黑色素自殺基因治療組腫瘤組織內(nèi)可見細(xì)胞密集細(xì)胞內(nèi)可見黑色素六味地黃治療組腫瘤組織內(nèi)可見密集的腫瘤細(xì)胞聯(lián)合治療組腫瘤組織內(nèi)可見細(xì)胞密度稍降低各組細(xì)胞密度第五十六頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日模型對(duì)照組腫瘤內(nèi)可見大片壞死組織自殺基因治療腫瘤內(nèi)可見大片壞死組織六味地黃治療組腫瘤內(nèi)可見大片壞死組織聯(lián)合治療組腫瘤內(nèi)可見壞死組織各組腫瘤壞死情況第五十七頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日模型對(duì)照組腫瘤周圍無(wú)明顯胞膜形成自殺基因治療組腫瘤周圍見薄層假包膜六味地黃丸治療組：腫瘤周圍見薄層假包膜聯(lián)合治療組腫瘤周圍明顯的假包膜形成各組腫瘤纖維結(jié)締組織增生情況第五十八頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日模型對(duì)照組腫瘤周圍組織內(nèi)見少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)自殺基因治療組腫瘤周圍組織內(nèi)見少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)六味地黃丸治療組腫瘤周圍組織內(nèi)有較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)聯(lián)合治療組腫瘤間質(zhì)及周圍組織內(nèi)見多量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)各組腫瘤組織炎細(xì)胞浸潤(rùn)情況第五十九頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日惡性黑色素瘤治療實(shí)驗(yàn)結(jié)論六味地黃丸對(duì)自殺基因治療小鼠移植性惡性黑色素瘤具有增效作用第六十頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)第六十一頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日中藥成分聯(lián)合tk/GCV系統(tǒng)對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷作用中藥成分對(duì)肝癌細(xì)胞的作用(確定篩選藥物及聯(lián)合用藥劑量)Q值法分析聯(lián)合作用是否有協(xié)同性有效中藥成分增效機(jī)制探討有效中藥成分對(duì)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡率的影響有效中藥成分對(duì)肝癌細(xì)胞GJIC的影響自身旁殺傷效應(yīng)檢測(cè)大鼠肝癌細(xì)胞tk-、tk+細(xì)胞對(duì)GCV敏感性檢測(cè)決定采用的GCV濃度建立大鼠肝癌細(xì)胞tk/GCV系統(tǒng)技術(shù)路線第六十二頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日大鼠肝癌細(xì)胞CBRH7919/tk-和CBRH7919/tk+對(duì)GCV敏感性（MTT法，72h）第六十三頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日CBRH7919/tk-和CBRH7919/tk+不同混合比例對(duì)tk/GCV系統(tǒng)旁觀者效應(yīng)的影響(MTT法）

組別tk+細(xì)胞比例（％）存活率（%）GCV15.7μM10％98.2±5.525％92.6±10.9310％71.0±9.0

a420％57.3±5.2

b540％48.8±7.0

b660％31.0±3.5

b25.9±4.6

b7100％aP0.05,bP0.01,與組1比較第六十四頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日(一)六味地黃丸藥物血清聯(lián)合不同比例tk/GCV系統(tǒng)對(duì)大鼠肝癌細(xì)胞的作用觀察第六十五頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日血清（%）GCVGCV5%tk/GCV(0μM)(39.2μM)(39.2μM)

對(duì)照對(duì)照對(duì)照含藥含藥含藥

Q值057.5100.00±15.2469.70±15.1263.60±1.71122.04±5.99109.67±11.8594.78±6.86128.79±11.91109.53±9.7169.87±28.12

a128.06±0.90105.47±7.7190.51±9.85

120.06±9.2793.58±4.9656.86±13.71

a1.191.12

(mean±SDn=3)TheeffectofherbsserumofLiuweiDiduangBoluscombiningwith5%tk/GCVsystemonCBRH7919(MTT

assay)(Serum:12h)

第六十六頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日血清（%）GCVGCV10%tk/GCV(0μM)(39.2μM)(39.2μM)

對(duì)照對(duì)照對(duì)照含藥含藥含藥

Q值057.5100.00±15.63c

85.59±6.37ac72.40±8.48b

89.06±12.85c73.46+±12.55c76.40±16.17b

91.06±9.69c84.58±6.25c55.97±13.06abd

97.45±12.60c91.88±8.34cb

75.16±11.99b

92.77±11.11c87.89±1.87db

57.79±8.45bd1.231.73

(mean±SDn=6)TheeffectofherbsserumofLiuweiDiduangBoluscombiningwith10%tk/GCVsystemonCBRH7919(MTTassay)(Serum:12h)

第六十七頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日10%tk/GCV，7.5%對(duì)照血清孵育12h10%tk/GCV，7.5%含藥血清孵育12h第六十八頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日血清（%）GCVGCV10%tk/GCV(0μM)(39.2μM)(39.2μM)

對(duì)照對(duì)照對(duì)照含藥含藥含藥

Q值057.5100.00±6.2883.50±9.3569.57±8.78

77.13±3.1772.93±7.9471.98±3.11

a

113.66±4.1984.15±9.5774.80±16.66

a

94.07±10.0868.84±8.8866.31±11.61

a

90.47±3.1779.88±10.0966.53±17.79

a1.041.26

(mean±SDn=3)TheeffectofherbsserumofLiuweiDiduangBoluscombiningwith10%tk/GCVsystemonCBRH7919(MTTassay)（Serum:24h）

第六十九頁(yè)，共七十六頁(yè)，2022年，8月28日血清（%）GCVGCV20%tk/GCV(0μM)(39.2μM)(39.2μM)

對(duì)照對(duì)照對(duì)照含藥含藥含藥

Q值057.5100.00±1.3073.10±7.9360.95±11.83

67.26±4.5064.54±4.0146.89±3.84

83.29±8.8970.45±9.1441.93±4.54a81.73±6.9676.56±6.3658.15±5.87

96.40±4.9281.01±3.9064.65±8.43

1.020.82

(mean±SDn=3)TheeffectofherbsserumofLiuweiDiduangBoluscombiningwith20%tk/GCVsystemonCBRH7919(MTT

assay)(Serum:12h)