生物學(xué)指標(biāo)的測(cè)定

生物學(xué)指標(biāo)的測(cè)定第一頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定指1ml水（或1g樣品），在普通瓊脂培養(yǎng)基中經(jīng)37℃、24h培養(yǎng)后所生長(zhǎng)的細(xì)菌菌群總數(shù)。評(píng)定水體污染程度指標(biāo)之一。生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB5749-2006）規(guī)定每毫升水的細(xì)菌總數(shù)不得超過100個(gè)。水中通常存在的細(xì)菌大致可分為三類：①天然水中存在的細(xì)菌。普通的是熒光假單孢桿菌、綠膿桿菌，一般認(rèn)為這類細(xì)菌對(duì)健康人體是非致病的。熒光假單胞桿菌第二頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日細(xì)菌分類②腸道細(xì)菌。它們生存在溫血?jiǎng)游锏哪c道中，故糞便中大量存在。水體中發(fā)現(xiàn)這類細(xì)菌，可以認(rèn)為已受到糞便的污染。致病性腸道細(xì)菌有沙門氏桿菌（傷寒和副傷寒菌）、B型炭疽菌、痢疾志賀氏菌和霍亂弧菌等。③土壤細(xì)菌。當(dāng)洪水時(shí)期或大雨后地表水中較多。它們?cè)谒猩娴臅r(shí)間不長(zhǎng)，在水處理過程中容易被去除。腐蝕水管的鐵細(xì)菌和硫細(xì)菌也屬此類。大腸桿菌鐵細(xì)菌第三頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日平板計(jì)數(shù)法國(guó)標(biāo)規(guī)定的方法為平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)方法：在玻璃平皿內(nèi)，接種一毫升水樣或稀釋水樣于加熱液化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，冷卻凝固后在37°C培養(yǎng)24小時(shí)，培養(yǎng)基上的菌落數(shù)或乘以水樣的稀釋倍數(shù)即為細(xì)菌總數(shù)。精度高，耗時(shí)長(zhǎng)。為了簡(jiǎn)化檢測(cè)程序、縮短檢測(cè)時(shí)間，國(guó)內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量的快速檢測(cè)方法的研究，提出了阻抗檢測(cè)法、SimplateTM全平器計(jì)數(shù)法、微菌落技術(shù)、紙片法等檢測(cè)方法。第四頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日平板計(jì)數(shù)法第五頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日總大腸菌群的測(cè)定總大腸菌群：需氧及兼性厭氧的在35℃、48h之內(nèi)生長(zhǎng)時(shí)能使乳糖發(fā)酵、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭陰性無(wú)芽胞桿菌，以每升水樣中所含有的大腸菌群的數(shù)目表示?？偞竽c菌群既包括存在于人及動(dòng)物糞便的大腸菌群，也包括存在于其他環(huán)境中的大腸菌群。包括:大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB5749-2006）規(guī)定每100mL水不得檢出總大腸菌群。第六頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日革蘭氏染色法細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。未經(jīng)染色之細(xì)菌，由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察。染色后細(xì)菌與環(huán)境形成鮮明對(duì)比，可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，而用以分類鑒定。革蘭氏染色屬?gòu)?fù)染法。革蘭氏染色法能夠把細(xì)菌分為兩大類，革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。染色的差異主要由陰性與陽(yáng)性細(xì)菌細(xì)胞壁的差異引起。第七頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日革蘭氏染色法先用龍膽紫（亦稱結(jié)晶紫）來(lái)染細(xì)菌，所有細(xì)菌都染成了紫色涂以革蘭氏碘液，來(lái)加強(qiáng)染料與菌體的結(jié)合用95%的酒精來(lái)脫色20～30秒鐘，有些細(xì)菌不被脫色，仍保留紫色，有些細(xì)菌被脫色變成無(wú)色用番紅或沙黃復(fù)染1分鐘，結(jié)果已被脫色的細(xì)菌被染成紅色，未脫色的細(xì)菌仍然保持紫色，不再著色凡被染成紫色的細(xì)菌稱為革蘭氏陽(yáng)性菌（G+菌）；染成紅色的稱為革蘭氏陰性菌（G-菌）。常見的革蘭氏陽(yáng)性菌：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、炭疽桿菌、白喉?xiàng)U菌、破傷風(fēng)桿菌等；常見的革蘭氏陰性菌：痢疾桿菌、傷寒桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌、百日咳桿菌及霍亂弧菌等。第八頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日多管發(fā)酵法配制培養(yǎng)基在密封瓶中的脫水培養(yǎng)基成品要存放在大氣濕度低、溫度低于30℃的暗處，存放時(shí)應(yīng)避免陽(yáng)光直接照射，并且要避免雜菌侵入和液體蒸發(fā)。當(dāng)培養(yǎng)液顏色變化，或體積變化明顯時(shí)廢棄不用。初步發(fā)酵試驗(yàn)水樣分別接種到盛有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中。在37℃±0.5℃下培養(yǎng)24h±2h。產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的發(fā)酵管表明試驗(yàn)陽(yáng)性。如在倒管內(nèi)產(chǎn)氣不明顯，可輕拍試管，有小氣泡升起的為陽(yáng)性。第九頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日多管發(fā)酵法復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)微振蕩初發(fā)酵試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果的發(fā)酵管，用3mm接種環(huán)或滅菌棒將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到EC培養(yǎng)液中。在44.5℃±0.5℃溫度下培養(yǎng)24h±2h（水浴箱的水面應(yīng)高于試管中培養(yǎng)基液面）。接種后所有發(fā)酵管必須在30min內(nèi)放進(jìn)水浴中。培養(yǎng)后立即觀察，發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實(shí)為糞大腸菌群陽(yáng)性。第十頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日多管發(fā)酵法結(jié)果計(jì)算第十一頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日濾膜法濾膜是一種微孔性薄膜。將水樣注入已滅菌的放有濾膜（孔徑0.45μm）的濾器中，經(jīng)過抽濾，細(xì)菌即被截留在膜上，然后將濾膜貼于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，37℃溫度下進(jìn)行培養(yǎng)，計(jì)數(shù)濾膜上生長(zhǎng)的此特性的菌落數(shù)，計(jì)算出每1L水樣中含有大腸菌群數(shù)。第十二頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日濾膜法將濾膜放入燒杯中，加入蒸餾水，置于沸水浴中煮沸滅菌三次，每次15min。前兩次煮沸后需更換水洗滌2～3次，以除去殘留溶劑。也可用121℃滅菌10min，10min一到，迅速將蒸汽放出，這樣可以盡量減少濾膜上凝集的水分。濾器、接液瓶和墊圈分別用紙包好，在使用前先經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30min。濾器滅菌也可用點(diǎn)燃的酒精棉球火焰滅菌。以無(wú)菌操作把濾器裝置裝好。過濾：用無(wú)菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣，將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上，穩(wěn)妥地固定好濾器。將適量的水樣注入濾器中，加蓋，開動(dòng)真空泵即可抽濾除菌。第十三頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日濾膜法由濾膜上生長(zhǎng)的大腸菌群菌落綜述和所取過濾水樣量，按下式計(jì)算1L水中總大腸菌群數(shù)：

第十四頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日其他細(xì)菌的測(cè)定生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB5749-2006）規(guī)定每100mL水不得檢出總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌。糞大腸菌群多