致病菌的檢驗革蘭氏陽性產(chǎn)芽孢桿菌簡要詳解演示文稿

致病菌的檢驗革蘭氏陽性產(chǎn)芽孢桿菌簡要詳解演示文稿當(dāng)前1頁，總共35頁。（優(yōu)選）致病菌的檢驗革蘭氏陽性產(chǎn)芽孢桿菌簡要當(dāng)前2頁，總共35頁。炭疽芽胞桿菌（B.anthracis）

該菌俗稱炭疽桿菌，人畜共患病原體，在醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)上都相當(dāng)重要，是引起人類、各種家畜和野生動物炭疽（Anthrax）的病原。當(dāng)前3頁，總共35頁。G+大桿菌，長而粗大，菌體平直，兩端平截。長3.0~8.0μm，寬1.0~1.5μm；無鞭毛。在組織和血液中單在或短鏈狀，培養(yǎng)后形成竹節(jié)狀長鏈。該菌在組織或含血液培養(yǎng)基中可形成莢膜。有氧條件下形成芽孢，位于菌體中央，不膨出菌體。無鞭毛。一、形態(tài)及染色特性當(dāng)前4頁，總共35頁。體內(nèi)外培養(yǎng)有較大形態(tài)差異。（1）體內(nèi)（即病料中，如血液、組織）形態(tài)：①單在或短鏈狀(一般約2~5個)，似竹節(jié)狀；②形成莢膜；不形成芽胞；③相連的菌端平截或微凹，游離端鈍圓，本菌屬的其他細菌接頭鈍圓，如蠟狀芽胞桿菌。當(dāng)前5頁，總共35頁。（2）體外（培養(yǎng)基）形態(tài)：①長鏈狀（幾十或上百個）；②形成橢圓形芽胞，位于菌體中央或近中央，直徑小于菌體；③普通培養(yǎng)基上不形成莢膜。一、形態(tài)及染色特性當(dāng)前6頁，總共35頁。（3）炭疽桿菌特征形態(tài)：①慢性局部炭疽病料:

菌體形態(tài)常不典型，呈細長彎曲或捻轉(zhuǎn)的桿狀；②血瓊脂、血清瓊脂或碳酸氫鈉瓊脂上，10~20%CO2條件下可形成莢膜；③病料腐敗后，碳疽芽孢桿菌菌體分解，但莢膜抗腐敗能力較強，莢膜仍可殘留，稱為“菌蛻”。

一、形態(tài)及染色特性當(dāng)前7頁，總共35頁。二、培養(yǎng)特性1.需氧或兼性厭氧，最適生長溫度30-37℃，，營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基中生長良好。強毒株形成灰白色不透明、大而扁平、表面干燥；無毒或弱毒株形成稍小而隆起、表面較為光滑濕潤、邊緣比較整齊的光滑型菌落。

強毒株菌落當(dāng)前8頁，總共35頁。2.血瓊脂：一般不溶血，個別菌株輕微溶血；而該屬其他成員多有明顯溶血；3.液體肉湯培養(yǎng)基：

24h呈絮狀沉淀生長，上清透明清朗，不形成菌膜和菌環(huán)；當(dāng)前9頁，總共35頁。4.明膠穿刺培養(yǎng)，呈倒松樹狀，表面液化呈漏斗狀。明膠穿刺培養(yǎng)當(dāng)前10頁，總共35頁。5.在含0.5IU/ml青霉素的培養(yǎng)基中，可形成串珠反應(yīng)，與其它需氧芽孢桿菌區(qū)別。當(dāng)青霉素加至10IU/mL時，炭疽桿菌生長受抑，不生長或微弱生長，而該屬其他細菌一般不被抑制。

串珠反應(yīng)：在含青霉素0.5IU/ml的培養(yǎng)基中，幼齡炭疽桿菌因細胞壁的肽聚糖合成受到抑制，形成原生質(zhì)體相互連接成串。當(dāng)前11頁，總共35頁。三、生化特性

生化試驗不是炭疽桿菌的主要鑒定項目?？闪私庖韵聝?nèi)容：分解葡萄糖，

V.P陽性，還原硝酸鹽，不產(chǎn)生吲哚、

H2S，H2O2酶陽性。當(dāng)前12頁，總共35頁。四、抵抗力

1、繁殖體：抵抗力不強，同一般無芽孢桿菌。常用消毒劑均能于短時間內(nèi)將其殺死。

2、芽胞體：抵抗力非常強，對熱、干燥等具有較強的抵抗力；室溫干燥可存活十年，干燥背光處可存活40年以上。在動物皮毛上能活數(shù)年，混入泥土中可存活數(shù)年至數(shù)十年，每到春夏時期地面長出青草時，可將泥中的芽胞帶至地面，牛羊食入而受感染。

3、牧場一旦被芽胞感染，傳染性可保持20-30年。煮沸1h或干熱140℃3h可殺滅芽孢。炭疽桿菌的芽胞對碘敏感，1:2500碘液10min即可殺死芽胞。當(dāng)前13頁，總共35頁。1.結(jié)構(gòu)抗原

(1)莢膜抗原：多肽，僅見于有毒菌株，與毒力和抗吞噬有關(guān)。

(2)菌體抗原：多糖，與細菌毒力無關(guān)。性質(zhì)穩(wěn)定，加熱煮沸甚至高壓蒸汽處理抗原性不被破壞。在病畜皮毛或腐敗臟器中經(jīng)長時間煮沸仍能與特異性抗體反應(yīng)形成環(huán)狀沉淀，稱為Ascoli反應(yīng)。

(3)芽胞抗原：由芽胞的外膜和皮質(zhì)組成，具免疫原性。2.保護性抗原（PA）是炭疽毒素（PA、LF、EF）的組成成分之一，具有免疫原性，能刺激機體產(chǎn)生保護性抗體。

五、抗原結(jié)構(gòu)當(dāng)前14頁，總共35頁。六、致病性動物吃─→含本菌芽胞的飼料或青草─→腸出芽增殖→血→敗血癥，脾腫大發(fā)黑→炭疽(病程短而急，數(shù)日死亡)。

1、易感性（1）綿羊、牛、鹿最易感——急性敗血性，尸僵不全、血凝不良、天然孔出血，臌氣；脾急劇腫脹至3~4倍；

（2）馬屬、駱駝、豬、山羊次之——多為慢性局部感染,如咽部；

（3）狗、貓及食肉動物抵抗力強——多表現(xiàn)腸炭疽；

（4）禽類通常無易感性；

（5）人類：因侵入途徑不同而出現(xiàn)不同癥狀。當(dāng)前15頁，總共35頁。2、毒力因子（1）莢膜：炭疽桿菌的莢膜能抵抗宿主吞噬細胞的吞噬，有利于在機體內(nèi)生存、繁殖和擴散。（2）炭疽毒素：主要由3種成分構(gòu)成。①水腫因子(edemafactor，EF):脂蛋白

②致死因子(lethalfactor，LF):蛋白質(zhì)

③保護性抗原(protectiveantigen，PA):一種輔酶。

此3種成分單獨對動物無毒性。前2種成分混合注射家兔或豚鼠皮下可致皮膚水腫；后2種混合注射可致肺部出血水腫，并使豚鼠致死；3種混合注射可出現(xiàn)炭疽典型中毒癥狀。炭疽毒素主要是增強微血管的通透性，改變血液循環(huán)動力學(xué)，血液呈高凝狀態(tài)，引起DIC和感染性休克。當(dāng)前16頁，總共35頁。3、致病類型

可致人畜共患的急性、熱性、敗血性傳染病。所致疾病分皮膚、肺、腸和敗血性炭疽四種。

（1）皮膚炭疽：最常見。病菌經(jīng)皮膚小傷口進入，經(jīng)12-36h局部出現(xiàn)小癤，繼之形成水泡，膿皰，最后中心形成炭色壞死焦痂，"炭疽"之名由此而得。患者有高熱、寒戰(zhàn)。輕癥2-3周治愈，重癥發(fā)展成敗血癥而死亡。

（2）肺炭疽：由于吸入炭疽芽胞所致。病初似感冒癥狀，進而呈嚴(yán)重的支氣管肺炎，痰中帶血并伴有全身中毒等癥狀，2-3天內(nèi)可死于中毒性休克。

（3）腸炭疽：因食入未煮透的病畜肉制品所致。有連續(xù)性嘔吐和便血，全身中毒癥狀嚴(yán)重，2-3天內(nèi)死于毒血癥。當(dāng)前17頁，總共35頁。七、微生物學(xué)診斷

1、標(biāo)本采集

按不同病型采取標(biāo)本，動物尸體僅能割尾、耳或舌尖。一般常取水泡、膿皰內(nèi)容物、焦痂、咯痰、糞及血液、腦脊液等。檢驗時必須注意：（1）病料鏡檢時一般有莢膜，如無莢膜則分離培養(yǎng)后接種實驗動物再進行形態(tài)檢查。（2）注意與類似的細菌鑒別，如蠟狀芽胞桿菌等。（3）對疑似炭疽死亡的家畜嚴(yán)禁剖檢，因其血液不凝，血濺流地面，血中細菌遇空氣即生成芽胞，芽胞在土壤中可存活數(shù)十年，造成該地區(qū)長期的疫源。如必須檢驗時，只可取獸耳或尾，密封送檢，死獸焚毀或深埋。當(dāng)前18頁，總共35頁。2.細菌學(xué)檢查（１）鏡檢：大桿菌，兩端平截，竹節(jié)狀（２）分離培養(yǎng)：用普通瓊脂或血瓊脂（３）純培養(yǎng):鏡檢、串珠試驗、生化試驗（４）動物試驗：將檢驗材料制成懸液或純培養(yǎng)物給小鼠注射，24-36h小鼠死于敗血癥。當(dāng)前19頁，總共35頁。3.血清學(xué)檢查

抗原檢測

（１）Ascoli沉淀反應(yīng)將病獸皮革或尸體組織切碎，加水煮沸過濾，取濾液滴加于小管內(nèi)的免疫血清，室溫或37℃放置10min，如見兩液接觸面出現(xiàn)白色沉淀環(huán)即為陽性，表明濾液中有該菌的多糖抗原。此法可對腐敗尸體及皮革進行追補診斷，但特異性不高，可出現(xiàn)假陽性。

當(dāng)前20頁，總共35頁。3.血清學(xué)檢查

（２）間接血凝試驗（３）協(xié)同凝集試驗（４）串珠熒光抗體檢查（５）瓊脂擴散試驗抗體檢查比較恢復(fù)期和急性期血清特異性抗體升高情況，確診或流行病學(xué)調(diào)查。當(dāng)前21頁，總共35頁。1、防─病畜尸體應(yīng)焚燒或深埋于2米以下。毛、革必須消毒處理。對易感染家畜進行Ⅱ號炭疽芽胞苗、無毒炭疽芽胞苗預(yù)防接種。對疫區(qū)牧民、屠宰員、獸醫(yī)和皮毛等加工人員以及接觸牲畜的其他有關(guān)人員，應(yīng)預(yù)防接種人用炭疽減毒活疫苗。2、治─青霉素等抗生素作為首選藥物，必要時可用特異性高免血清進行緊急預(yù)防接種。炭疽痊愈動物可獲得堅強免疫，再次感染者很少。八、免疫防治當(dāng)前22頁，總共35頁。第二節(jié)梭菌屬（Clostridium）

該屬細菌多數(shù)嚴(yán)格厭氧，革蘭氏染色陽性，形成芽孢，芽孢直徑往往比菌體粗，使菌體膨脹成梭狀，但并非梭菌屬的細菌均為梭狀，如破傷風(fēng)梭菌，芽孢位于菌體頂端，菌體呈鼓槌狀。該屬細菌能產(chǎn)生多種外毒素和侵襲性酶，致病性強，包括產(chǎn)氣莢膜梭菌、腐敗梭菌、諾維梭菌、肉毒梭菌和破傷風(fēng)梭菌等。當(dāng)前23頁，總共35頁。一產(chǎn)氣莢膜梭菌（Cl.perfringens）舊名魏氏梭菌，在自然界分布很廣。一定條件下，可引起多種嚴(yán)重疾患，局部組織出現(xiàn)壞死、水腫、產(chǎn)氣。當(dāng)前24頁，總共35頁。革蘭氏陽性粗大梭菌，3-4×1-1.5μm。單獨或成雙排列，有時成短鏈。芽胞卵圓形，寬度不比菌體大，位于中央或末端。培養(yǎng)時芽胞少見，須在無糖培養(yǎng)基中才能生成芽胞。在膿汁、壞死組織或感染動物臟器涂片可見明顯莢膜，無鞭毛，不能運動。

無芽孢有芽孢有莢膜1、形態(tài)及染色特征

當(dāng)前25頁，總共35頁。厭氧程度不如破傷風(fēng)梭菌要求高。

(1)血液瓊脂平板:菌落較大、灰白色、不透明，邊緣呈鋸齒狀，多數(shù)菌株有雙層溶血環(huán)，內(nèi)環(huán)是θ毒素的作用，而外環(huán)不完全溶血是a毒素所致。

(2)皰肉培養(yǎng)基:肉渣不被消化，有時呈肉紅色。2、培養(yǎng)特性當(dāng)前26頁，總共35頁。

(3)牛乳培養(yǎng)基:分解乳糖產(chǎn)酸，使酪蛋白凝固，同時生成大量氣體，將凝固的酪蛋白沖成海棉狀碎塊。管內(nèi)氣體常將覆蓋在液體上的凡士林層向上推擠，這種現(xiàn)象稱為“暴烈發(fā)酵”，是本菌的特點之一。2、培養(yǎng)特性當(dāng)前27頁，總共35頁。血平板上，多數(shù)菌株有雙層溶血環(huán)，內(nèi)環(huán)完全溶血，外環(huán)不完全溶血。當(dāng)前28頁，總共35頁。3、生化特性

能分解多種糖類，發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣。分解水楊苷不穩(wěn)定，不發(fā)酵甘露糖;

能液化明膠，還原硝酸鹽，產(chǎn)生硫化氫；不產(chǎn)生吲哚，不能消化已凝固的蛋白質(zhì)和血清。

當(dāng)前29頁，總共35頁。

產(chǎn)氣莢膜梭菌既能產(chǎn)生強烈的外毒素，又有多種侵襲性酶，并有莢膜，構(gòu)成其強大的侵襲力，引起感染性疾病。毒素的毒性雖不如肉毒毒素和破傷風(fēng)毒素強，但種類多，有12種外毒素(αβγδεηθικλμν)和具有毒性作用的多種侵襲性酶(卵磷脂酶、纖維蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、膠原酶和DNA酶)，構(gòu)成強大的侵襲力。在各種毒素和酶中，以α毒素最為重要，α毒素是一種卵磷脂酶，能分解卵磷脂，損傷多種細胞的細胞膜，引起溶血、組織壞死，血管內(nèi)皮細胞損傷，使血管通透性增高，造成水腫。

θ毒素有溶血和破壞白細胞的作用，膠原酶能分解肌肉和皮下的膠原組織，使組織崩解，透明質(zhì)酸酶能分解細胞間質(zhì)透明質(zhì)酸，有利于病變擴散。4、致病因子與致病性

當(dāng)前30頁，總共35頁。本菌能由消化道或創(chuàng)傷侵入機體內(nèi)，引起人類和動物的多種疾病，其中最重要的是氣性壞疽。根據(jù)細菌產(chǎn)生外毒素的種類差別，可將產(chǎn)氣莢膜梭菌分成A、B、C、D、E、F6個型。A型：人氣性壞疽和食物中毒；B型：羔羊痢疾；C型：綿羊猝死，人壞死性腸炎D型：牛腸毒血癥；E型：犢牛、羔羊腸毒血癥。當(dāng)前31頁，總共35頁。(1)直接涂片鏡檢：G+大桿菌，并有莢膜;(2)分離培養(yǎng)：接種血平板，有雙層溶血環(huán);(3)純培養(yǎng)：引起牛奶暴烈發(fā)酵;

(4)動物試驗：小鼠、家兔或鴿，出現(xiàn)“泡沫肝”;(5)