自由基清除劑及其加工技術(shù)演示文稿

自由基清除劑及其加工技術(shù)演示文稿當(dāng)前1頁，總共63頁。（優(yōu)選）自由基清除劑及其加工技術(shù)當(dāng)前2頁，總共63頁。氧的損傷氧分子軌道有兩個(gè)未成對(duì)電子，很易轉(zhuǎn)變?yōu)樽杂苫蚧钚匝?。氧化?yīng)激生物體內(nèi)氧化與抗氧化失去平衡。氧化應(yīng)激原因營養(yǎng)不良造成膳食抗氧化劑耗竭；活性氧自由基產(chǎn)生過多。

當(dāng)前3頁，總共63頁。自由基處于產(chǎn)生與清除的動(dòng)態(tài)平衡體內(nèi)物質(zhì)和能量的轉(zhuǎn)化（氨基酸的氧化等）；維持在一個(gè)適當(dāng)水平（破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)）。自由基引發(fā)并參與脂質(zhì)過氧化作用。改善膳食（減少脂肪、增加水果蔬菜和谷物），食物抗氧化劑的積累，延遲或預(yù)防疾病。

當(dāng)前4頁，總共63頁。自由基清除劑的種類和作用機(jī)理能清除體內(nèi)自由基或能阻斷自由基參與氧化反應(yīng)的物質(zhì)。非酶類清除劑抗氧化劑（VE、VC、胡蘿卜素、還原型谷胱甘肽）。酶類清除劑抗氧化酶（超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化酶）。當(dāng)前5頁，總共63頁?？寡趸改芮宄钚匝醯拿?。非酶類清除劑抗氧化劑：食品和藥物中的抗氧化成分；自由基清除劑：能清除自由基實(shí)現(xiàn)抗氧化作用的物質(zhì)；當(dāng)前6頁，總共63頁。自由基清除劑只有在足夠濃度時(shí)才起作用；清除劑只有在產(chǎn)生自由基的位置附近才能起作用；清除劑與自由基反應(yīng)后本身會(huì)成為新自由基，這個(gè)新自由基的毒性應(yīng)小于原來的才能起防護(hù)作用。當(dāng)前7頁，總共63頁。第二節(jié)黃酮類化合物黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)及生理功能黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)基本母核：2-苯基色原酮類化合物；黃酮、黃酮醇，人體每天從食物中攝取可達(dá)1g；二氫黃酮、二氫黃酮醇類、異黃酮、二氫異黃酮、雙黃酮類、查爾酮類、橙酮類、黃烷醇類、花青素、新黃酮類。當(dāng)前8頁，總共63頁。黃酮類化合物的生理功能清除自由基與超氧陰離子反應(yīng)阻止自由基反應(yīng)的引發(fā)，與鐵離子絡(luò)合阻止羥基自由基的生成，與脂質(zhì)過氧化基反應(yīng)阻止脂質(zhì)過氧化過程。當(dāng)前9頁，總共63頁。調(diào)節(jié)免疫功能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力和自然殺傷細(xì)胞活性；增加抗體產(chǎn)量，調(diào)節(jié)體液免疫功能和細(xì)胞免疫功能；通過血腦屏障吸收活性自由基，起抗衰老作用。當(dāng)前10頁，總共63頁。保護(hù)心血管系統(tǒng)能影響血管的脆性和滲透性，改善血液循環(huán)狀態(tài)，增加寇脈流量；選擇性地與血管壁上的血栓結(jié)合，起抗血栓形成作用；防治血管老化和腦血管供血不足作用；當(dāng)前11頁，總共63頁?？拱┳饔弥掳┪?苯、苯并芘、亞硝基化合物)，由惰性物經(jīng)生物轉(zhuǎn)化成的高活性物質(zhì)，能破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，引發(fā)疾病，轉(zhuǎn)化中產(chǎn)生一些自由基中間物，進(jìn)一步形成活性很強(qiáng)的羥基自由基和單線態(tài)氧，引發(fā)癌癥。黃酮類化合物作為尋找有效抗癌活性物質(zhì)。當(dāng)前12頁，總共63頁?？寡鬃饔镁哂锌共≡⑸铩⒖寡装Y、抗感染作用。保護(hù)肝臟作用能促進(jìn)組織再生，修復(fù)內(nèi)臟器官的病變組織。調(diào)節(jié)內(nèi)分泌功能植物激素——異黃酮，具有抗雌激素作用。當(dāng)前13頁，總共63頁?？咕翱共《咀饔媚鞠菟亍ⅫS芩素有抗菌作用。解痙作用解除平滑肌痙攣?zhàn)饔茫绠惛什菟亍ⅫS豆甘原。當(dāng)前14頁，總共63頁。黃酮類化合物的制備工藝原料

豆類：大豆；

水果類：山楂、葡萄柚、薔薇果、柑桔、檸檬、紅桔、櫻桃、李；

蔬菜類：花莖甘藍(lán)、洋蔥、番茄；沙棘、茶葉、葡萄酒、蜂蜜、啤酒、咖啡；

當(dāng)前15頁，總共63頁。減壓蒸餾法水中有一定溶解度，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯等有機(jī)溶劑。用熱水浸提出多糖、脂類及黃酮類化合物等可溶性成分，再用有機(jī)物溶劑進(jìn)一步提純。當(dāng)前16頁，總共63頁。樹脂柱純化法離子交換樹脂是一種不溶性高分子物質(zhì)，對(duì)溶液中的離子具有選擇吸附能力;適宜的樹脂，極性相近的黃酮類被吸附在樹脂柱內(nèi)，得到富集、純化，用洗脫劑洗脫。

當(dāng)前17頁，總共63頁。堿提取酸沉淀法黃酮苷類不溶于酸性水，易溶于堿性水;在提取液中加酸，黃酮苷類即可沉淀析出。簡便易行，如蘆丁、橙皮苷、黃芩苷的提取。當(dāng)前18頁，總共63頁。超聲波提取破壞植物細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)有效成分大量溶于有機(jī)溶劑，提高提取效率。超臨界CO2提取

當(dāng)前19頁，總共63頁。黃酮類化合物的應(yīng)用植物提取液直接制取功能食品。提取液經(jīng)濃縮、分離純化、干燥，制取高純度的黃酮化合物，用于食品抗氧化劑和制造功能食品。飲料中應(yīng)用葛根黃酮功能飲料：20~30倍的水量浸提；

當(dāng)前20頁，總共63頁。精制后的產(chǎn)品，添加入果汁中，再調(diào)配。焙烤食品的應(yīng)用面包、桃酥等。小吃食品的應(yīng)用冰淇淋、綠豆糊、黑米糊等。其他食品中的應(yīng)用奶粉、糖果、植物油等。當(dāng)前21頁，總共63頁。酶解-溶劑法提取羅漢果中黃酮類物質(zhì)研究酶法與溶劑提取相結(jié)合提取羅漢果中黃酮類化合物的工藝條件；通過正交試驗(yàn)找出纖維素酶法及溶劑提取的最佳工藝條件。

當(dāng)前22頁，總共63頁。羅漢果的果實(shí)和葉含有羅漢果三萜皂苷，還含有大量的果糖、黃酮類化合物、十多種人體必需氨基酸、脂肪酸、維生素C、微量元素等。

酶法提?。焊鶕?jù)植物藥材細(xì)胞壁的構(gòu)成，利用酶反應(yīng)所具有的高度專一性等特點(diǎn)，選擇相應(yīng)的酶，將細(xì)胞壁的組成成分水解或降解，破壞細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)，使有效成分充分暴露出來，溶解、混懸或膠溶于溶劑中，達(dá)到提取細(xì)胞內(nèi)有效成分的目的的提取方法。

當(dāng)前23頁，總共63頁。提取工藝流程羅漢果→粉碎、過目→一定量的原料加溶劑酶解→過濾→一次提取物→濃縮→乙醇沉淀→石油醚萃取→乙酸乙酯萃取→羅漢果黃酮類物質(zhì)對(duì)酶解溫度、酶解時(shí)間、酶的濃度及pH等影響因素進(jìn)行四因素三水平的正交試驗(yàn)。

當(dāng)前24頁，總共63頁。無水乙醇沉淀除去溶液中的多糖、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，石油醚為萃取劑除去溶液中的脂溶性色素等，乙酸乙酯可萃取出羅漢果黃酮。用正交試驗(yàn)確定無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯的用量，確定分離純化的工藝條件。當(dāng)前25頁，總共63頁。纖維酶酶解條件的正交因素表水平ABCD酶解溫度/℃酶濃度/(U/mL)pH值酶解時(shí)間/min165304.950270505.280375705.5110當(dāng)前26頁，總共63頁。編號(hào)ABCD得率g.100g-1)111112.010212223.610313331.942421231.323522311.470623121.148731321.207832130.769933211.129K12.5213.6002.8893.680K24.5643.7974.0433.929K33.5933.2833.7483.071極差1.4860.5430.7110.644當(dāng)前27頁，總共63頁。酶解溫度影響最大。

各影響因素的作用強(qiáng)度依次為：A>C>D>B。

當(dāng)前28頁，總共63頁。

溶劑提取條件的正交因素表

水平abc乙醇:粗提液/體積比石油醚:粗提液/體積比乙酸乙酯:粗提液/體積比11:281:11:121:182:12:131:83:13:1當(dāng)前29頁，總共63頁。編號(hào)abc得率/(g.100g-1)11112.84721225.00231335.61642122.75252234.96362313.30273135.31383213.11993326.123K115.58612.63010.726K212.75315.14516.059K316.84317.40718.395極差4.0904.7787.669當(dāng)前30頁，總共63頁。乙酸乙酯用量的影響最大。

各影響因素的作用強(qiáng)度依次為：乙酸乙酯>石油醚>乙醇。

當(dāng)前31頁，總共63頁。提取物的紫外光譜分析

當(dāng)前32頁，總共63頁。在250nm、320nm處均有吸收峰，在黃酮類化合物紫外吸收范圍內(nèi)，所得的產(chǎn)物為羅漢果黃酮類化合物。該方法的提取率要比一般的提取方法的提取率高。當(dāng)前33頁，總共63頁。傳統(tǒng)的提取方法，溫度高，收率低，成本高，消耗大量的溶劑，會(huì)造成對(duì)環(huán)境的污染。酶制劑具有專一性、特異性，在常溫、常壓條件下就能起催化作用，能有效地提高植物藥中的有效成分的含量，減少污染物的排放，能真正實(shí)現(xiàn)“綠色中藥工業(yè)”。

當(dāng)前34頁，總共63頁。第三節(jié)茶多酚茶多酚的結(jié)構(gòu)及其生理功能茶多酚的結(jié)構(gòu)兒茶素類、黃酮、黃酮醇、花青素酚酸、縮酚酸。兒茶素類化合物，占茶多酚總量70%。當(dāng)前35頁，總共63頁。茶多酚的生理功能清除自由基、增強(qiáng)機(jī)體免疫力當(dāng)L-表沒食子兒茶素沒食子酸酯濃度為0.006mg/ml，對(duì)超氧陰離子消除率達(dá)98%；當(dāng)濃度為0.1mg/ml，對(duì)羥自由基消除率達(dá)99.9%。

當(dāng)前36頁，總共63頁?？顾ダ献饔锰岣逽OD活性，減低細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化物，延緩肌脂褐素形成，起抗衰老延壽作用?？馆椛渥饔每拱┳饔孟?、抑菌及抗病毒作用沒食子酸酯有抑制傷寒、副傷寒、霍亂和痢疾當(dāng)前37頁，總共63頁。維持正常血管功能防齲齒作用有殺死齲齒細(xì)菌。當(dāng)前38頁，總共63頁。茶多酚的制備工藝沉淀萃取法提取水溶液將茶多酚浸提；利用茶多酚能與Bi2+、Ca2+、Hg2+、Sb3+等金屬離子產(chǎn)生絡(luò)合沉淀，將茶多酚從含茶多酚的水浸提液中分離出來；用酸轉(zhuǎn)溶，用乙酸乙酯抽提。當(dāng)前39頁，總共63頁。溶劑萃取法利用茶多酚及其雜質(zhì)在不同溶劑中溶解度的不同；用溶劑去雜或抽提。當(dāng)前40頁，總共63頁。粗制品的純化粗制品溶于水，用乙醚萃取，乙醚層減壓回收，干燥即得較純茶多酚；水層用乙酸乙酯反復(fù)萃取，除去水層，收集乙酸乙酯層；將乙酸乙酯溶液層減壓低溫濃縮，干燥，得茶多酚初級(jí)氧化聚合物。

當(dāng)前41頁，總共63頁。茶多酚的應(yīng)用飲料茶葉軟飲料、發(fā)酵酒飲料等。茶多酚添加量為250mg/mL。小吃食品冷凍制品（雪糕、冰淇淋）；糖果（硬糖、奶糖、水果糖、口香糖）。當(dāng)前42頁，總共63頁。糕點(diǎn)食品中面包、餅干、桃酥、羊羹、云片等。添加量：茶多酚150~200mg/mg食品茶膳中茶葉掛面、茶葉湯面、茶葉饅頭、茶葉紫菜澆飯當(dāng)前43頁，總共63頁。第四節(jié)超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶的基本特性及生理功超氧化物歧化酶的組成和分類Cu,Zn-SOD，綠色；Mn-SOD，紫色；Fe-SOD，黃褐色。當(dāng)前44頁，總共63頁。超氧化物歧化酶的主要理特性等電點(diǎn)pH4~6，偏酸性，酸性蛋白；對(duì)熱、pH和蛋白水解酶的穩(wěn)定性好。當(dāng)前45頁，總共63頁。超氧化物歧化酶的物化特性和生理功能延緩由于自由基侵害引起的衰老現(xiàn)象自由基引起機(jī)體衰老的機(jī)制：生物大分子的交聯(lián)聚合和脂褐素積累；器官組織細(xì)胞的死亡和癌變；免疫力降低。當(dāng)前46頁，總共63頁。治療由自由基損傷而誘發(fā)的疾病消除肌肉疲勞提高人體的抵抗力當(dāng)前47頁，總共63頁。超氧化物歧化酶的制備原料

動(dòng)物：牛血、豬血、馬血、兔血、蛋黃、鴨血、豬肝、牛乳等；

植物：剌梨、大蒜、小白菜、飯豆等；

微生物：酵母菌。當(dāng)前48頁，總共63頁。沉淀法熱穩(wěn)定性好，溫度低于80℃，短時(shí)間熱處理酶活力損失不大，一般雜蛋白在高于55℃易變性沉淀。酶蛋白在等電點(diǎn)時(shí)，溶液中的靜電荷為零，酶蛋白的溶解度最小而沉淀下來。當(dāng)前49頁，總共63頁。粗酶溶液中加入一些弱極性有機(jī)溶劑（丙酮），改變?nèi)芤旱慕殡姵?shù)，使不同種類的蛋白質(zhì)的溶解度產(chǎn)生不同程度的下降；可以把超氧化物歧化酶和其他的雜蛋白分開。當(dāng)前50頁，總共63頁。離子交換層析法離子交換劑為固定相，液體為流動(dòng)相的系統(tǒng)中進(jìn)行。等電點(diǎn)在4~6之間，pH>7.0時(shí)帶負(fù)電，能被陰離子交換劑吸附，根據(jù)離子交換劑對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)合力差異，用具有一定離子強(qiáng)度流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，就可和其他雜蛋白分開。經(jīng)透析，冷凍干燥。當(dāng)前51頁，總共63頁。鹽析法和金屬螯合親和層析法鹽的濃度增高到一定數(shù)值時(shí)，水活度降低；蛋白質(zhì)分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞；引起蛋白質(zhì)分子間相互聚集從溶液中析出。一定濃度范圍的鹽濃度(如1%~25%飽和度硫酸銨)，使部分雜質(zhì)呈“鹽析”(沉淀)狀態(tài)。當(dāng)前52頁，總共63頁。有效成分呈“鹽溶”(溶解)狀態(tài)；離心分離得上清液，選擇一定濃度范圍的鹽濃度(如25%~60%飽和度的鹽溶液)；使SOD呈鹽析狀態(tài)，另一部分雜質(zhì)呈鹽溶狀態(tài)；離心收集的沉淀為初步分離制備的SOD。當(dāng)前53頁，總共63頁。親和層析把對(duì)SOD具有識(shí)別能力的配體Cu2+以共價(jià)鍵的方式固化到含有活化基團(tuán)基質(zhì)如殼聚糖上，然后裝入層析柱；SOD粗酶液通過該柱量，由于靜電引力，結(jié)構(gòu)互補(bǔ)效應(yīng)等作用使其被吸附，而無親和力或非特異吸附的物質(zhì)被起始緩沖液洗滌出來。當(dāng)前54頁，總共63頁。改變起始緩沖液的pH，或增加離子強(qiáng)度，或加入抑制劑等；把SOD解離下來。這一操作可把SOD和雜蛋白分開。當(dāng)前55頁，總共63頁。酵母發(fā)酵法酵母菌種進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)；離心收集菌體，懸浮于磷酸鉀緩沖液中，超聲波破壁，離心除去殘?jiān)?，得粗酶提取液；?jīng)鹽析和柱層析得酵母SOD。當(dāng)前56頁，總共63頁。超氧化物歧化酶的修修飾工藝硬脂酸修飾法硬脂酸活化成硬脂酰氯；在一定條件下對(duì)SOD分子中的賴氨酸ε–氨基進(jìn)行修飾，提高了其穩(wěn)定性。當(dāng)前57頁，總共63頁。糖酯修飾法一定條件下，將葡萄糖酸內(nèi)酯與超氧化物歧化酶上賴氨酸的ε–氨基結(jié)合，提高其穩(wěn)定性。聚乙二醇修飾法一定條件下，經(jīng)活化的