性病實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)及應(yīng)用

常見性傳播疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”

淋病淋球菌培養(yǎng)梅毒暗視野檢查+TPPA(FTA-ABS,WB)

沙眼衣原體衣原體培養(yǎng)+核酸擴(kuò)增技術(shù)支原體感染支原體培養(yǎng)生殖器皰疹病毒培養(yǎng)+核酸擴(kuò)增技術(shù)尖銳濕疣核酸雜交和核酸擴(kuò)增技術(shù)

HIV/艾滋病蛋白印跡試驗(yàn)+HIV抗原檢測(cè)滴蟲性陰道炎濕片法+毛滴蟲培養(yǎng)細(xì)菌性陰道病G染色查線索細(xì)胞軟下疳細(xì)菌培養(yǎng)+核酸擴(kuò)增技術(shù)性病性淋巴肉芽腫衣原體培養(yǎng)+核酸擴(kuò)增技術(shù)

當(dāng)前1頁，總共63頁。一、梅毒的診斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前2頁，總共63頁。當(dāng)前3頁，總共63頁。當(dāng)前4頁，總共63頁。

1、暗視野檢查/鍍銀染色法2、非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)3、梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（一）實(shí)驗(yàn)室診斷方法的臨床意義當(dāng)前5頁，總共63頁。暗視野顯微鏡法直接鏡檢圖像（×1000）當(dāng)前6頁，總共63頁。1、暗視野檢查臨床意義當(dāng)標(biāo)本陽性時(shí)，可確診梅毒。適宜于早期梅毒(一、二期)，特別是早期一期梅毒、早期先天梅毒。暗視野顯微鏡檢查法被WHO確定為性病實(shí)驗(yàn)室的必備方法當(dāng)標(biāo)本陰性時(shí)，不能排除梅毒診斷不適用于來至口腔的標(biāo)本暗視野顯微鏡檢查法是能夠立即在獲得性或先天性梅毒的早期進(jìn)行直接診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前7頁，總共63頁。2、RPR類臨床意義RPR等試驗(yàn)一般認(rèn)為是梅毒初篩試驗(yàn)?陽性者，均需作確證試驗(yàn)。VDRL用于神經(jīng)梅毒診斷。有些疾病可導(dǎo)致生物學(xué)假陽性。復(fù)發(fā)或再感染可陽轉(zhuǎn)或滴度升高。為療效觀察、判愈方法。早期梅毒治療后血清滴度應(yīng)下降4倍認(rèn)為治療有效。當(dāng)前8頁，總共63頁。3、TPPA（TPHA）臨床意義1、為梅毒確證試驗(yàn)，其敏感性：一期梅毒76％（69％－90％）二期梅毒為100％潛伏梅毒為97％（97％－100％）晚期梅毒為94％其特異性：100％2、治療后可終生陽性，不能作為療效指標(biāo)。3、IgM抗體可作為梅毒早期診斷或胎傳梅毒診斷。4、可有1％生物學(xué)假陽性存在，如，SLE。當(dāng)前9頁，總共63頁。兩類血清學(xué)方法臨床意義的比較RPR類：RPR等試驗(yàn)可用于大標(biāo)本量的篩查？RPR定量可排除生物學(xué)假陽性？RPR是療效判定的指標(biāo)RPR是療后隨訪的指標(biāo)RPR用于判定是否血清復(fù)發(fā)TPPA類：是金標(biāo)準(zhǔn)TPPA等試驗(yàn)是確診指標(biāo)在HIV感染者中，血清學(xué)試驗(yàn)可發(fā)生難于解釋的現(xiàn)象，若懷疑梅毒感染應(yīng)作HIV檢查當(dāng)前10頁，總共63頁。（二）實(shí)驗(yàn)室診斷方法臨床應(yīng)用1、適用對(duì)象2、方法學(xué)的靈敏度3、不同病期方法學(xué)選擇4、血清學(xué)結(jié)果解釋5、RPR滴度與治療效果6、療后血清學(xué)隨訪7、生物學(xué)假陽性8、胎傳梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)9、神經(jīng)梅毒實(shí)驗(yàn)室診標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前11頁，總共63頁。1、適用對(duì)象皮膚、性病門診輸血前檢查手術(shù)前檢查入院檢查產(chǎn)前檢查檢驗(yàn)檢疫當(dāng)前12頁，總共63頁。2、方法學(xué)的靈敏度病原學(xué)檢查：PCR鍍銀染色暗視野血清學(xué)方法：FTA-ABSTPPARPR抗體：IgMIgG當(dāng)前13頁，總共63頁。3、不同病期方法學(xué)選擇一期二期三期暗視野、鍍銀染色、PCR、IgMFTA-ABS、TPPA、ELISA、CLIA、RT、WB、RPR、暗視野、鍍銀染色、PCR等FTA-ABS、TPPA、ELISA、CLIA、RT、WB、RPR、VDRL、病理等當(dāng)前14頁，總共63頁。4、血清學(xué)結(jié)果解釋請(qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋尽Ｕ?qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋?。?qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋尽Ｕ?qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋?。?qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋尽．?dāng)前15頁，總共63頁。TPPA為什么做滴度？經(jīng)常有人提問當(dāng)前16頁，總共63頁。當(dāng)前17頁，總共63頁。夫、妻、子結(jié)果不一致情況？當(dāng)前18頁，總共63頁。5、RPR滴度與治療效果1、治療成功：早期梅毒患者在治療后6個(gè)月內(nèi)癥狀消失，且RPR滴度有至少4倍的下降。晚期梅毒或隱性梅毒患者在治療后12~24個(gè)月內(nèi)RPR滴度有至少4倍的下降。2、治療失敗：治療后癥狀持續(xù)或重新出現(xiàn)；治療后RPR滴度反而上升了4倍或以上；RPR滴度較高（1:32或以上）但在六個(gè)月內(nèi)沒有達(dá)到4倍的下降?？姑范局委熓〉牟∪藨?yīng)考慮合并HIV感染及神經(jīng)梅毒的可能性。3、血清固定：經(jīng)正規(guī)治療后，梅毒患者RPR一般都會(huì)轉(zhuǎn)為陰性，但有1~3%的病人即使經(jīng)足量抗梅治療，RPR滴度仍持續(xù)呈低滴度陽性，這種現(xiàn)象稱為血清固定，其原因尚不明了。血清固定患者的滴度重又上升則提示再次感染梅毒。當(dāng)前19頁，總共63頁。6、療后血清學(xué)隨訪方法:RPR時(shí)間：第1年，每3個(gè)月檢查1次第2年，每6個(gè)月檢查1次第3年，最后1個(gè)月檢查當(dāng)前20頁，總共63頁。7、生物學(xué)假陽性常見原因大家忘掉只有梅毒才能達(dá)到1:8？當(dāng)前21頁，總共63頁。當(dāng)前22頁，總共63頁。RPR在妊娠患者中，有28%的假陽性發(fā)生當(dāng)前23頁，總共63頁。當(dāng)前24頁，總共63頁。XX梅毒事件（華西都市報(bào)）2012年8月，李冬梅（化名）懷孕。2012年12月26日，初檢胎檢篩查疑患梅毒。2013年1月4日(另一家機(jī)構(gòu)），夫妻再檢均呈陰性。2013年5月14日，待產(chǎn)，第2天產(chǎn)檢結(jié)果被告之有梅毒。2013年5月16日，剖腹產(chǎn)。2013年5月21日（另一家機(jī)構(gòu)），李冬梅RPR（-）TPPA（+），雙女與母一致。2013年9月，前往重慶，RPR（-）TPPA（+）。當(dāng)前25頁，總共63頁。8、胎傳梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)暗視野檢查陽性。非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)持續(xù)陽性。非梅毒螺旋體抗原血清抗體滴度是母親的4倍以上?；純?9S－IgM陽性。隨訪18個(gè)月觀察。當(dāng)前26頁，總共63頁。9、神經(jīng)梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（RPR、TPPA）陽性。腦脊液異常（WBC計(jì)數(shù)≥10*10/L

蛋白量>500mg/L）3.

腦脊液VDRL試驗(yàn)陽性（可FTA-ABS陽性）。6當(dāng)前27頁，總共63頁。梅毒血清學(xué)檢測(cè)---策略一非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（RPR)陽性陰性報(bào)告：RPR陰性梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（TPPA)RPR定量試驗(yàn)報(bào)告：RPR陰性滴度TPPA陽性陽性陰性報(bào)告：RPR陽性TPPA陰性？前帶、早期第2次收費(fèi)？1：8習(xí)慣？當(dāng)前28頁，總共63頁。孕產(chǎn)婦梅毒檢測(cè)及服務(wù)流程接受初次產(chǎn)前保健的孕產(chǎn)婦采用RPR或TRUST等篩查采用TPPA等證實(shí)陽性陰性診斷梅毒感染陽性排除梅毒感染陰性繼續(xù)常規(guī)產(chǎn)前保健2個(gè)療程治療，RPR定量檢測(cè)和隨放？方法、前帶、早期？真陽？真能排除？真梅毒當(dāng)前29頁，總共63頁。梅毒血清學(xué)檢測(cè)---策略二梅毒螺旋體血清試驗(yàn)（ELISA)陽性陰性報(bào)告：ELISA陰性推薦TPPA復(fù)檢RPR定性、定量試驗(yàn)報(bào)告：ELISA陽性RPR陽性及滴度陽性陰性報(bào)告：ELISA陽性,TPPA陰性,RPR陰性報(bào)告：ELISA陽性RPR陰性陽性陰性報(bào)告：ELISA陽性,TPPA陽性,RPR陰性？敏感性第2次收費(fèi)？？收費(fèi)不？以誰為準(zhǔn)當(dāng)前30頁，總共63頁。我室推薦的梅毒血清學(xué)試驗(yàn)---策略三

梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（TPPA等）TPPA-TPPA+陰性報(bào)告RPR-RPR+現(xiàn)癥梅毒抗梅治療療后觀察既往感染隨訪或抗梅治療第2次收費(fèi)？當(dāng)前31頁，總共63頁。我室推薦的梅毒血清學(xué)試驗(yàn)---策略四

梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（TPPA等）RPR滴度（1:32直到出現(xiàn)陰性）TPPA-RPR-陰性報(bào)告TPPA-RPR+生物學(xué)假陽性TPPA+RPR-既往感染或隨訪TPPA+RPR+現(xiàn)癥病人抗梅治療療效隨訪面對(duì)當(dāng)前梅毒血清學(xué)檢測(cè)存在的問題，即將有策略五…當(dāng)前32頁，總共63頁。梅毒孕產(chǎn)婦所生兒童隨訪與先天梅毒感染狀態(tài)監(jiān)測(cè)流程梅毒產(chǎn)婦所生新生兒不能開展暗視野、IgM采靜脈血、RPR定量能開展暗視野、IgM陰性診斷先天梅毒感染陽性滴度≧母親4倍，無論有無癥狀滴度﹤母親4倍，有癥狀滴度﹤母親4倍，無癥狀治療、隨訪18月TPPA陽性預(yù)治療每3個(gè)月RPR定量，觀察癥狀陽性陰性RPR滴度不下降或上升，結(jié)合癥狀6月后RPR未陰，滴度低水平連續(xù)2次陰性每3個(gè)月TPPA18月TPPA+連續(xù)2次陰性排除先天梅毒感染陰性無此線？當(dāng)前33頁，總共63頁。歐盟梅毒指南（2008年版）初篩試驗(yàn)：選用EIA、TPPA/TPHA如果懷疑早期梅毒最好用TP特異性IgM檢測(cè)，如果陰性，1～2周后重復(fù)檢測(cè)RPR/VDRL不推薦作為初篩試驗(yàn)，但可作為有癥狀早期梅毒的快速檢測(cè)方法，需要同時(shí)檢測(cè)滴度。當(dāng)前34頁，總共63頁。確證試驗(yàn)初篩陽性，應(yīng)用另外一種TP特異性試驗(yàn)確證?EIA用TPPA/TPHA確證?TPPA/TPHA用EIA確證然后再做滴度如果初篩和確證結(jié)果不一致，則做重組抗原免疫印跡試驗(yàn)初篩和確證試驗(yàn)陽性，而RPR/TRUST陰性，推薦做IgM檢測(cè)。陽性結(jié)果需要對(duì)第二份血樣進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)以確證。當(dāng)前35頁，總共63頁。判斷梅毒活動(dòng)性成功治療后，滴度≥32罕見。IgM檢測(cè)，可以說明疾病的活動(dòng)性，但是晚期梅毒IgM可能為陰性。如果治療前RPR/TRUST為陰性，IgM檢測(cè)有助于判斷病情。當(dāng)前36頁，總共63頁。血清學(xué)試驗(yàn)選擇篩選試驗(yàn):1.EIA；2.TPPA;3.TPPA/TPHA加VDRL/RPR。疑似早期梅毒：EIA-IgM初篩陽性，另一實(shí)驗(yàn)證實(shí)TPPA,EIA,RPR/VDRLEIA+:confirmwithTPPAorTPHA。2個(gè)試驗(yàn)不一致:免疫印跡。VDRL/RPR滴度1:16、IgM陽性為梅毒活動(dòng)的標(biāo)志之一。治療當(dāng)天滴度為判斷療效的最佳依據(jù)。梅毒早期VDRL/RPR滴度可能較低。當(dāng)前37頁，總共63頁。當(dāng)前38頁，總共63頁。當(dāng)前39頁，總共63頁。當(dāng)前40頁，總共63頁。當(dāng)前41頁，總共63頁。當(dāng)前42頁，總共63頁。當(dāng)前43頁，總共63頁。當(dāng)前44頁，總共63頁。二、淋病的實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前45頁，總共63頁。淋病診斷標(biāo)準(zhǔn)－實(shí)驗(yàn)室方法1、顯微鏡檢查涂片、革蘭染色對(duì)男性病人有診斷價(jià)值（敏感性90~95%，特異性98~100%）對(duì)女性病人敏感性50~70%2、培養(yǎng)敏感性：80~100%特異性：100%3、核酸檢測(cè)：熒光PCR、NG∕CT核酸TMA雙檢、NG∕CT∕Uu三檢等敏感性：100%，死菌活菌、尿液分泌物均可特異性：100%當(dāng)前46頁，總共63頁。有診斷意義的報(bào)告報(bào)告方式，要包含4個(gè)因素對(duì)男性單純性NG感染，敏感性可達(dá)95％對(duì)女性NG感染，敏感性只有50％不能作為診斷指標(biāo)不能作為判愈指標(biāo)顯微鏡檢查臨床意義當(dāng)前47頁，總共63頁。淋菌培養(yǎng)臨床意義是臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，是WHO推薦的淋病篩查的唯一方法是判愈的指標(biāo)可以對(duì)疑似（或非生殖器部位標(biāo)本）NG的菌株作進(jìn)一步的鑒定可進(jìn)行NG耐藥監(jiān)測(cè)，PPNG、TRNG、QRNG科研當(dāng)前48頁，總共63頁。三、生殖道沙眼衣原體感染的

診斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前49頁，總共63頁。沙眼衣原體診斷標(biāo)準(zhǔn)－

實(shí)驗(yàn)室檢查方法1、培養(yǎng)法：McCoy細(xì)胞特異性高：100%敏感性低價(jià)昂、費(fèi)時(shí)、費(fèi)力設(shè)備2、抗原檢測(cè)①、直接免疫熒光試驗(yàn)（DFA）：用種特異的沙眼衣原體主要外膜蛋白單克隆抗體用熒光素標(biāo)記染色。需熒光顯微鏡，檢查者要有經(jīng)驗(yàn)，區(qū)別非特異性熒光。②、酶免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：敏感性71~97，特異性97~99%，可成批檢測(cè)。③、快速免疫層析法：明窗試驗(yàn)等。當(dāng)前50頁，總共63頁。明窗試驗(yàn)（clearviewchlamydia）臨床意義此法診斷女性宮頸沙眼衣原體感染的敏感性為87％，特異性為98.8％簡便、快速，醫(yī)生和病人都容易接受不是金標(biāo)準(zhǔn)注意事項(xiàng)標(biāo)本的量一定要夠、拭子要大一點(diǎn)、轉(zhuǎn)動(dòng)一圈、停留時(shí)間要長一點(diǎn)男性若分泌物少，可用首段尿液沉淀注意Na離子或其它原因造成的假陽性當(dāng)前51頁，總共63頁。3、核酸擴(kuò)增試驗(yàn)（NAAT）聚合酶鏈反應(yīng)與連接酶鏈反應(yīng)(PCR，LCR)、熒光定量PCR、NG∕CT核酸TMA雙檢、NG∕CT∕Uu三檢等。優(yōu)點(diǎn)：1、敏感性：90~97%，特異性99~100%2、可以用尿液作檢查，非侵襲性方法3、篩查，無癥狀病人缺點(diǎn)：1、價(jià)格昂貴需要貴重儀器、設(shè)備2、人員需要培訓(xùn)當(dāng)前52頁，總共63頁。200份標(biāo)本同時(shí)用3種方法檢測(cè)Ct結(jié)果

明窗試驗(yàn)

IDEIAPCE

FQ-PCR

陽性47 62 66

陰性153138134

合計(jì)200200200當(dāng)前53頁，總共63頁。四、生殖器皰疹實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前54頁，總共63頁。生殖器皰疹診斷標(biāo)準(zhǔn)－

實(shí)驗(yàn)室檢查方法1、病毒抗原檢測(cè)：單克隆抗體免疫熒光試驗(yàn)（IFA）或酶免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）來檢測(cè)抗原。2、培養(yǎng)：看特征性細(xì)胞病變，特異性100%，但敏感性不高。需設(shè)備條件、技術(shù)。

3、核酸檢測(cè):熒光PCR、雙檢、三聯(lián)檢4、抗體檢測(cè)：IgM當(dāng)前55頁，總共63頁。其它方法介紹－復(fù)合PCR請(qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋?。?qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋尽Ｕ?qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋?。?qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋尽Ｕ?qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋?。?dāng)前56頁，總共63頁。HSV快速檢查方法HSV-IDEIA（酶免疫放大）與金標(biāo)準(zhǔn)相比，其敏感性達(dá)93.6%,特異性達(dá)97.8％可同時(shí)檢測(cè)HSV-1和HSV-2型文獻(xiàn)報(bào)道，HSV-1致GH的比例在上升DAKO專利技術(shù)可成批，可單人份做2小時(shí)出結(jié)果可目