流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介

流式細(xì)胞術(shù)原理/用途/制樣要求張波（藥理室）

bozhang_lz流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介流式細(xì)胞儀是什么儀器，

什么時(shí)候會(huì)用到？流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介2009年1月20日1月23日2月2日流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry,簡(jiǎn)稱(chēng)FCM）是一種可以快速、準(zhǔn)確、客觀，并且同時(shí)檢測(cè)單個(gè)微粒（通常是細(xì)胞）的多項(xiàng)特性的技術(shù)，同時(shí)可以對(duì)特定群體加以分選研究對(duì)象為生物顆粒，如各種細(xì)胞、染色體、微生物、及人工合成微球等研究的微粒特性包括多種物理及生物學(xué)特征，并加以定量流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介BDFACSCalibur流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介流式細(xì)胞儀可檢測(cè)到的細(xì)胞參數(shù)

非熒光信號(hào)顆粒度細(xì)胞大小前向角散射光（FSC）細(xì)胞相對(duì)大小及其表面積

側(cè)向角散射光（SSC）細(xì)胞顆粒度及細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器的相對(duì)復(fù)雜性流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介血液涂片流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介ReviewQuestionDeadcellsareknowntobesmallerandtoexhibitmoreinternalcomplexitythanlivecells.Whichofthepopulationsonthisplotwouldyouexpecttobedead?AB流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介流式細(xì)胞儀可檢測(cè)到的細(xì)胞參數(shù)

熒光信號(hào)流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介圖AnnexinV/PI雙標(biāo)記分析細(xì)胞凋亡和壞死流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介T(mén)wo-ColorCellAnalysisWhichofthethreepopulationshasthemostAbAbindingsites?AbAAbB流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介樣本處理流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介細(xì)胞懸液的制備細(xì)胞懸液：分離PBMC、PRP等：操作復(fù)雜，分離、離心步驟導(dǎo)致細(xì)胞特定群體丟失，并可能引入某些誤差直接使用外周血、骨髓：最接近生理狀況，操作簡(jiǎn)便，樣本用血量小灌洗液、體腔積液培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞系實(shí)體組織：病理組織：新鮮樣本/石蠟包埋樣本針吸組織：新鮮樣本鞘液、洗液等：清潔無(wú)顆粒雜質(zhì)（.22濾膜）流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介植物樣本的制作流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介步驟一：

選擇合適的熒光染料必須被流式細(xì)胞儀上所配備激光器所激發(fā)激發(fā)光譜在儀器上濾光片能夠接受范圍內(nèi)熒光素光譜的重疊應(yīng)當(dāng)盡量減少流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介OpticsLaserFluorochromeDetectorParameterFilterFITCGFPFL1530/30PEPIFL2585/42PerCPPerCP-CY5.5FL3670LPAPCFL4661/16488nm635nm流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介步驟二：染色體積溫度孵育時(shí)間對(duì)照流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介步驟三：數(shù)據(jù)收集和分析畫(huà)圖尋找目標(biāo)細(xì)胞調(diào)整儀器設(shè)置到合適的狀態(tài)我們可以得到怎樣的結(jié)果？它們意味著什么？流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介散點(diǎn)圖密度圖二維等高圖直方圖圖報(bào)告中常見(jiàn)的幾種流式細(xì)胞圖流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介儀器設(shè)置調(diào)節(jié)用未染色細(xì)胞調(diào)整儀器PMT電壓流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介開(kāi)機(jī)需準(zhǔn)備試劑建議首次試機(jī)避免進(jìn)行大量試驗(yàn)，僅需準(zhǔn)備下列樣品（1）NegativeControl（不加任何抗體）。（2）CD3-FITC（FL1單染）（3）CD19-PE（FL2單染）（4）CD3-FITC/CD19-PE（FL1/FL2雙染）。流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介2.用單染色的細(xì)胞調(diào)節(jié)儀器補(bǔ)償流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介關(guān)于同型對(duì)照例：一個(gè)雙色染色的實(shí)驗(yàn)抗體AFITC，抗體BPE對(duì)應(yīng)的同型對(duì)照是IgG1FITC,IgG1PE那么需要準(zhǔn)備的是陰性對(duì)照：細(xì)胞加上IgG1FITC,IgG1PE單陽(yáng)性對(duì)照：FITC:細(xì)胞加上AbAFITC,IgG1PEPE:細(xì)胞加上AbBPE,IgG1FITC流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介數(shù)據(jù)分析設(shè)門(mén)設(shè)定陰性與陽(yáng)性群體的界限確定陽(yáng)性與陰性細(xì)胞