實驗四五六球菌

實驗四球菌引起人類化膿性感染的主要細菌，又稱化膿性球菌

葡萄球菌屬鏈球菌屬腸球菌屬奈瑟菌屬菌種葡萄球菌屬：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌鏈球菌屬：甲型溶血型鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌奈瑟氏菌屬：微黃奈瑟氏菌腸球菌屬葡萄球菌屬菌種：

金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌細菌菌落形態(tài)及色素的觀察做GS染色，鏡下形態(tài)的觀察接種血平板，觀察細菌的生長表現(xiàn)、色素及溶血生化反應(yīng)：

1.觸酶試驗2.血漿凝固酶試驗3.甘露醇試驗實驗內(nèi)容實驗器材菌種、血平板、血漿、3%H2O2、甘露醇培養(yǎng)基、濾紙片、玻片、擦鏡紙、吸水紙、污物缸等細菌菌落形態(tài)及色素的觀察:單個菌落為中等大小,圓形,表面光滑,邊緣整齊,不透明,產(chǎn)脂溶性色素.金黃色葡萄球菌呈金黃色菌落,有β-溶血環(huán)生化反應(yīng)觸酶試驗：

原理：某些細菌能產(chǎn)生過氧化氫酶，將對細菌有害的H2O2

分解成H2O、O2

方法：在潔凈載玻片上，滴加3%H2O2溶液1~2d,用接種環(huán)挑取普通瓊脂上的菌落，觀察結(jié)果。

結(jié)果：產(chǎn)生大量氣泡者（+），不產(chǎn)生氣泡者（—）

鑒別：葡萄球菌（+）、鏈球菌（—）血漿凝固酶試驗：原理：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可使血漿中可溶性的纖維蛋白原變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白，結(jié)合型血漿凝固酶附著于細菌表面，在玻片上形成凝塊；游離型的血漿凝固酶則可使試管中的血漿發(fā)生凝固。試管法37℃孵育0.5h.

方法（玻片法）：對照區(qū)試驗區(qū)生理鹽水血漿細菌細菌結(jié)果：出現(xiàn)凝集現(xiàn)象者為陽性。鑒別:(金+表-腐-)甘露醇發(fā)酵試驗：

原理：致病性葡萄球菌多能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基 由紫色變?yōu)辄S色

方法:將3種細菌分別接種于甘露醇發(fā)酵管，35℃孵育 18~24h,觀察結(jié)果。

結(jié)果判斷：培養(yǎng)基渾濁，由紫色變?yōu)辄S色（+） 仍為紫色（--）

鑒別：金黃色葡萄球菌（+）表皮葡萄球菌（--）腐生葡萄球菌（--）

鏈球菌屬菌種：

甲型溶血型鏈球菌乙型溶血型鏈球菌肺炎鏈球菌實驗?zāi)康恼莆真溓蚓鷮俚姆蛛x培養(yǎng)與鑒定方法掌握鏈球菌的菌落特點、菌體形態(tài)及染色性實驗器材菌種、GS染液、血平板、菊糖發(fā)酵管、10%去氧膽酸鈉溶液、optochin藥敏紙片、桿菌肽藥敏紙片、小鼠、1ml注射器、剪刀鑷子、濾紙片、玻片、吸水紙、擦鏡紙、牛皮紙、棉簽等細菌菌落形態(tài)及溶血的觀察

1.灰白色、圓形凸起、表面光滑、邊緣整齊的針 尖樣大小菌落，菌落周圍出現(xiàn)不同的溶血2.根據(jù)血平板上的溶血情況分：

甲型(α):草綠色溶血環(huán)

丙型(γ):無溶血環(huán)乙型(β):透明溶血環(huán)細菌鏡下形態(tài)觀察革蘭陽性球菌、圓形或卵圓形、成雙或呈鏈狀排列肺炎鏈球菌成雙排列，細菌形似矛頭，周圍有空暈，此為莢膜。2.CAMP試驗：

原理：B群溶血性鏈球菌能產(chǎn)生“CAMP”因子，該物質(zhì)可促進 金黃色葡萄球菌β溶血素的活性，故在血瓊脂平板上兩 種細菌交界處溶血能力增強，形成箭頭狀透明那個溶血 區(qū)。方法：在血平板上，用金 葡菌劃種一條橫線， 再將被檢菌距金葡菌 接種線3mm處呈直角 接種一短線，35℃培 18~24h觀察結(jié)果。結(jié)果：如圖3.Optochin敏感試驗：

原理：Optochin（乙基氫化羥基奎寧），能干擾肺炎鏈 球菌葉酸合成，抑制該菌的生長，故肺炎鏈球菌對 Optochin敏感，而其它鏈球菌對其耐藥。

方法：挑取待檢菌密集劃線接種于血瓊脂平板上，貼放 Optochin紙片，35℃孵育18~24h，觀察抑菌環(huán)。

結(jié)果：抑菌圈直徑≥14mm為敏感，肺炎鏈球菌（+）抑菌圈直徑＜14mm時，參照膽汁溶菌試驗判斷是

肺炎鏈球菌還是甲型溶血性鏈球菌4.膽汁溶菌試驗

原理：膽汁或膽鹽能活化肺炎鏈球菌的自溶酶，促進細菌 細胞膜破損或菌體裂解而自溶。方法（平板法）：在血瓊脂平板上選擇出待檢的呈草綠色 溶血的菌落，觀察記錄菌落特點，然后于菌落上滴1 滴100g/L去氧膽酸鈉溶液，35℃孵育15~30min觀察 結(jié)果。結(jié)果：菌落消失為陽性，菌落不消失為陰性。

肺炎鏈球菌（+）、甲型鏈球菌（-）6.小白鼠毒力試驗：

原理：小白鼠對肺炎鏈球菌十分敏感，少量有莢膜的肺炎 鏈球菌可使小白鼠感染致死。

方法:將平板上的肺炎鏈球菌用無菌生理鹽水洗下，取0.1ml 注射于小白鼠腹腔，飼養(yǎng)1~2d，觀察小白鼠情況。

結(jié)果：若小白鼠在1~2d內(nèi)死亡為陽性，解剖腹膜印片、革 蘭染色法鏡檢可見革蘭陽性、有莢膜的雙球菌。奈瑟氏菌屬菌種：微黃奈瑟菌（代替腦膜炎奈瑟菌）實驗?zāi)康模赫莆漳X膜炎奈瑟菌的形態(tài)和培養(yǎng)特性。實驗內(nèi)容：1.培養(yǎng)特性和菌落觀察：營養(yǎng)要求高，接種血平板或巧克力平板，置35℃，5%CO2條件下，孵育18~24h觀察結(jié)果，可見圓形突起、光滑濕潤、無色透明、邊緣整齊、似露滴狀，直徑為2~3mm。2.GS染色，形